ST单细胞悬浮生长的驯化及培养工艺优化

正采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的ST-S细胞株,并对培养基中血清浓度及细胞初始接种密度优化,确定细胞最佳生长条件。结果表明,ST-S细胞株可完全适应1%血清营养条件并呈单细胞悬浮生长状态,最佳细胞生长条件为血清浓度1%,细胞接种密度7.5×10~5cells/ml,细胞生长旺盛,最大活细胞密度达到4.6×10~6cells/ml。猪睾丸细胞(ST)是由国际动物实验室从猪胎睾丸分离得到的成纤     

BA和PP333对油菜试管苗生长的影响

用初花期薹段作外植体，接种于Ｂ５附加物培养基中，分化出的芽苗再接种在添加不同浓工的ＢＡ和ＰＰ３３３的Ｂ５基本培养基上，试验其对试管苗增殖和生根的调控作用。结果表明，ＢＡ促进试管苗增殖的适宜浓度为８－１０ｍｇ／ｌ，在生根培养基中加入适量ＰＰ３３３，能有效地抑制试管苗的徒长，促进根的发育和生长，健壮幼苗，提高试管苗的抗性和移栽成活率。     

亚麻微生物脱胶技术的研究 Ⅲ.脱胶菌株适宜生长繁殖条件的测试

对两脱胶菌株Ｋｅ３４及Ｌｅ１０的生长繁殖条件进行了测试。结果表明,它们的适宜扩繁培养基以豆饼粉培养基为最佳、其次为麦芙皮培养基,其中豆饼粉的含量以３％为宜;最适培养温度为３５～４０℃之间;最适ｐＨ值为７０（中性）;但是,以３％的豆饼粉培养基,ｐＨ值取其自然,培养效果也很理想。在优选各项测试的条件下,测定它们的生长曲线,并结合涂片镜检观察菌体变化,最终确定两脱胶菌株Ｋｅ３４及Ｌｅ１０,以３％的豆饼粉为扩繁培养基、ｐＨ值７０或取其自然,在有氧的条件,培养１６～２４ｈ即为接种沤麻脱胶的最佳时间。     

南方鲶SME－Ⅰ细胞系的建立及其生物学特性的研究

用半消化法和组织块法接种南方鲶晚期胚，经４０多代连续培养，建立了ＳＭＥ－Ⅰ鲶鱼细胞系。该细胞系为贴附性上皮样细胞。细胞内微丝束丰富，平行排列伸到伪足，但质膜下不很密集。细胞最适在含１５％～２０％小平血清的１６４０培养基中生长，适温２８～２９℃，ｐＨ６．５～７．２，群体倍增时间为５８．６ｈ，已增殖到１０￣８个的水平。细胞染色体数为正常二倍体２ｎ＝５８，但有不少异倍化细胞。该细胞系已可用于鱼类生物工程研究和进入细胞资源库保存。     

芜菁油菜叶肉原生质体再生植株

以芜菁油菜为材料，从无菌苗５—８天叶龄的叶片分离叶肉原生质体，然后以６×１０￣４／ｍＬ的密度用ＭＰ１－３液体培养基进行浅层培养。培养１０天后，用ＭＰ４培养基对ＭＰ１－２中的培养物进行稀释（１：１）．用ＭＰ５培养基对ＭＰ３中的培养物进行稀释（１：１），每次间隔１０天。在培养期间时常用手轻轻摇动培养物。用这种方法，再生细胞分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经ＭＳ１培养基增殖３周，转到分化培养基上诱导植株分化，分化出的苗经诱导生根发育成完整的小植株（共５４株）．在研究中发现：①激素的种类、浓度及组合对刺激细胞分裂的作用差异明显；②提高培养基的ｐＨ值可明显地控制细胞褐化；③ＡｇＮＯ＿３（５ｍｇ／ｍＬ）有益于愈伤组织分化植株；④谷氨酰胺（８０ｍｇ／ｍＬ）和腺嘌呤（４０ｍｇ／ｍＬ）能提高愈伤组织的植株分化频率；⑤原生质体培养基对原生质体植株的分化亦有影响．     

金针菇软腐病的研究

金针菇软腐病是近年来普遍发生的病害，病菌初步鉴定为Ｃｌａｄｏｂｏｔｒｙｕｍ ｓｐ．菌丝生长的适宜温度为１３－２７℃，最适１５－１９℃；适宜ｐＨ值为５．６－８．１，最适为６．０。在马铃薯蔗糖琼脂培养基上生长最好。病害发生期在１０月下旬至１１月和３－４月。气温高（１５℃以上），湿度大的年份发病严重。室内药剂抑菌试验结果表明：０．０１０％－０．００１％百菌清和０．０５％－０．２０％多菌灵对该病菌的菌丝生     

Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究

[目的]探索Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[方法]以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为材料,采用正交试验设计研究RPMI1640和DMEM2种不同培养基及细胞接种密度、血清浓度、双抗浓度、D-Hanks漂洗次数、胰蛋白酶浓度和消化时间6个不同因素对Hepa1-6传代培养的影响;根据细胞在6个时间点的生长状况评分,筛选出Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[结果]Hepa1-6细胞在含有20%血清的RPMI-1640培养基,接种密度为4×104个/cm2,100U/ml的双抗浓度,贴壁率在90%以上时,D-Hanks漂洗1次,0.5%胰蛋白酶消化2min,传代效果最好。[结论]通过正交设计筛选,为Hepa1-6细胞体外培养探索出最佳培养条件。     

Hepa1-6细胞的最佳培养条件研究

[目的]探索Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[方法]以小鼠Hepa1-6肝癌细胞为材料,采用正交试验设计研究RPMI1640和DMEM2种不同培养基及细胞接种密度、血清浓度、双抗浓度、D-Hanks漂洗次数、胰蛋白酶浓度和消化时间6个不同因素对Hepa1-6传代培养的影响;根据细胞在6个时间点的生长状况评分,筛选出Hepa1-6细胞的最佳培养条件。[结果]Hepa1-6细胞在含有20%血清的RPMI-1640培养基,接种密度为4×104个/cm2,100U/ml的双抗浓度,贴壁率在90%以上时,D-Hanks漂洗1次,0.5%胰蛋白酶消化2min,传代效果最好。[结论]通过正交设计筛选,为Hepa1-6细胞体外培养探索出最佳培养条件。     

烟草蛙眼病菌生物学特性及寄主范围研究

烟草蛙眼病菌菌丝生长最适温度为２５～３２℃，在ｐＨ５～１０之间病菌生长良好，致死温度为５５℃。该病菌对碳源的利用以蔗糖最佳，在具Ｌ－天冬酰胺的培养基上病菌生长最好，烟草蛙眼病菌寄主人工接种可侵染所供试的１２科作物中的６科１３种作物，除烟草外，还可侵染茄、辣椒、菜豆、绿豆、蚕豆、大豆、饭豆、菊芋、冬葵、白菜、蕹菜及牵牛花等。     

金针菇深层发酵的研究：Ⅱ.影响金针菇胞外多糖产量的因素

研究了金针菇不同菌株、ｐＨ值、淀粉原料、微量元素、多糖的组成单糖、表面活性剂等几个重要因素对金针菇胞外多糖生产的影响。结果表明，供试菌株中以Ｆ－１９产胞外多糖的能力最强；产多糖培养基的最适ｐＨ值为６．５左右；以马铃薯淀粉和甘薯淀粉作碳源，胞外多糖的产量比其他淀粉的高；在培养基中添加质量分数为１００×１０－６－１６０×１０－６的Ｍn2 能显著提高胞外多糖的产量。而添加同等浓度的Ｃｕ２＋反而降低胞外多糖     

船舶压载舱黑暗条件对青岛大扁藻种群的生态影响

为阐明船舶压载舱的黑暗密闭环境对绿藻生长的影响,以青岛大扁藻为模式生物,设置不同的初始密度(5 cells/m L、50 cells/m L、5×10~2cells/m L、5×10~3cells/m L和5×104~cells/m L),研究青岛大扁藻在黑暗条件下的相对生长抑制率及在不同生长期和初始密度处理下的种群响应。并对黑暗处理后的青岛大扁藻进行光照恢复研究,探索在不同的起始密度下,未经黑暗与经黑暗处理后的扁藻种群密度变化的差异。结果表明,经过黑暗处理的低密度(3 cells/m L)的青岛大扁藻在光恢复两周后仍然可以达到较高的种群密度水平(1×10~3);经黑暗处理的青岛大扁藻在光恢复初始密度为3及3×10~4cells/m L时的种群恢复能力较未经黑暗处理的弱,且存在显著差异(P0.05)。     

EGF·Insulin和IGF-I对食蟹猴耳部成纤维细胞体外增殖的影响

探讨了培养基中不同浓度血清情况下,分别添加不同浓度的表皮生长因子（EGF）、胰岛素（Insulin）和胰岛素样生长因子-I（IGF-I）对食蟹猴耳部成纤维细胞体外增殖的影响,目的是寻找这3种物质促进体外培养成纤维细胞的最佳浓度,改善细胞体外培养系统,为以后体细胞及干细胞培养提供参考。将处于对数生长期的10～15代细胞进行常规消化混匀,计数,接种,培养24h后分别向孔中加入含5％和10％的两种血清浓度、添加不同浓度的EGF、Insulin和IGF-I的培养基,6d后分别向孔中加入MTT,然后用酶联免疫检测仪测定各孔在492nnl处的吸光度值（0D）。血清浓度为10％情况下,培养基中添加10ng／ml EGF、10μg／ml Isulin、100ng／ml IGF-I时,食蟹猴耳部成纤维细胞增殖能力最好。     

几种理化因子对青钱柳悬浮细胞生长的影响

为了利用细胞悬浮培养技术生产青钱柳细胞及其代谢物质以解决青钱柳资源稀缺问题,采用单因素和正交试验优化青钱柳细胞悬浮培养条件。结果表明,在供试的WPM、MS、1/2MS、B5、N6、DKW、White7种培养基中,WPM、MS、B5均有利于悬浮细胞的生长;有利于悬浮细胞生长的碳源是果糖和蔗糖;2,4-D是影响青钱柳悬浮细胞生长的关键因子,对细胞生长影响极显著,最佳激素组合为0.4mg/L 2,4-D+0.4mg/LNAA+0.4mg/L KT+0.4mg/L 6-BA;通过L9(34)正交试验得出几种物理因子对悬浮细胞生长的影响效应排序为接种量>装液量>转速>pH,最佳条件组合为接种量80g/L、装液量40%、摇床转速115r/min、pH 5.0。     

罗布麻悬浮细胞生长特性及产绿原酸的初探

[目的]探索罗布麻(Apocynum ventetum Linn.)悬浮细胞生长特性和产绿原酸量的最佳激素浓度,为进一步以罗布麻悬浮培养的细胞生产绿原酸奠定前期基础.[方法]以罗布麻悬浮细胞系为材,确定最佳接种量和细胞生长曲线,培养获得的材料经干燥、粉碎后经超声波法提取,以高效液相色谱法(HPIC)测定其中的绿原酸(CGA)量.以绿原酸量为指标,进行方差分析,确定最佳的植物生长调节剂的浓度.[结果]将罗布麻细胞悬液抽滤,以1.0 g(FW)/10 mL的接种量接种在MB(硝酸钾加倍,硝酸铵减半)+2.0 mg/L 2,4-D+0.05mg/L 6-BA+50g/L蔗糖(pH 5.9)培养基上,对数生长期为4～8 d.以上述接种量和5 d培养周期为条件,将获得的罗布麻细胞接种在不同NAA和KT浓度的培养基上培养,产绿原酸量最大的培养基为MB+0.3 mg/LNAA+0.3 mg/L KT+50g/L蔗糖(pH5.9),产量达0.183 mg/g(DW),与其它培养基相比在P=0.05水平上差异显著.[结论]通过罗布麻悬浮培养的细胞产绿原酸最佳培养基为MB+0.3 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+50g/L蔗糖(pH5.9).     

光照和温度对竹缺爪螨的影响

光照时数对竹缺爪螨存活、发育及繁殖均有影响。全黑条件下竹缺爪螨不能完成所有发育世代；5h以上光照完成整个世代的机率随光照时数延长而增大；8h和≥12h光照处理幼螨发育至成螨产卵历期相近，分别为14 41d和15.47d,5h光照处理历期延长为25.26d;5h,8h和≥12h等3种光照处理下平均每雌总产卵量分别为3.50粒、9.23粒和9.50粒，竹缺爪螨最适存活温区为20-30℃，但2℃下存活率更高，-10℃以下不能存活，40℃仍有较高存活率，可见该螨对高低温适应力强，表3参7。     

两步控制策略优化生防菌B579芽孢生成条件

[目的]优化生防菌-枯草芽孢杆菌B579芽孢生成的发酵条件,提高芽孢浓度。[方法]采用2步控制策略,即发酵的第1阶段（菌体生长阶段,0~10 h）促进细胞生长,发酵的第2阶段（菌体对数生长后期,芽孢生成阶段,10~30 h）促进芽孢生成,分别考察了培养基初始葡萄糖浓度、发酵pH、第2阶段摇床转速、第2阶段发酵温度对芽孢生成的影响。通过单因素试验确定其水平,在单因素试验基础上进行正交试验优化,确定获得高浓度芽孢的最佳发酵条件。[结果]培养基初始葡萄糖浓度是影响芽孢生成的显著因素,芽孢生成的最佳发酵条件为培养基初始葡萄糖浓度5 g/L,发酵pH7.0,第1阶段的发酵温度37℃,摇床转速180 r/min,约10 h后进入第2阶段,发酵温度提高到40℃,摇床转速调节为200 r/min。发酵30 h,最终获得的芽孢浓度为（9.43±0.15）×108CFU/ml,芽孢生成率为90.99%,分别是优化前的6.70和2.43倍。[结论]利用两步控制发酵策略可提高生防菌B579芽孢浓度,建立的发酵工艺为生防菌剂的大规模生产奠定了基础。     

充气在几种饵料单细胞藻二级培养中的应用

采用实验与生产结合的方法,研究了充气条件下几种饵料单胞藻的生长特性。结果表明,充气能大幅度提高4种饵料单胞藻的生长速度。在充气条件下,新月菱形藻、金藻3011、3012和扁藻的最大培养密度分别为2．957×10^7,1．7×10^7,2．355×10^7和3．5×10^5细胞／mL,分别是对照组最大培养密度的3．2倍,6．5倍,4．1倍和5倍;实验组（充气）与对照组（不充气）在细胞数目、特定生长率（SGR）、相对生长率（RGR）和绝对生长率（AGR）等方面均有显著差异。二级充气培养的藻液可以直接扩种到大池进行生产培养,能有效延长生长时间,显著提高生产培养效率。     

不同培养条件下欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞的生长优势

为建立欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,以欧洲鳗鲡胸鳍细胞人工培养适应株(第21代)为试验材料,采用人工培养基体外传代培养的方法,探讨欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件。观察比较不同培养基(L-15、RPMI-1640、高糖型DMEM)、血清成分(BS和FBS)及其浓度(5%、10%、15%、20%)对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长状态的影响。结果表明:含有10%胎牛血清(FBS)的L-15培养基最适合欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。     

小头端菱形藻生长的最适光照强度及氮磷比

[目的]为进一步探索小头端菱形藻（Nitzschia capitellata Hust．）作为优质饵料、生物能源的潜能,在室内条件下对小头端菱形藻生长的最适光照强度、氮磷比等培养条件进行研究。[方法]首先设定不同光照度梯度,在相同营养、温度（25±1）℃以及光周期（12h／12d）下进行培养,筛选得出最适光照强度,其次将氮磷比设置为5：1、6：1、7：1和8：1,置于相同条件进行培养。[结果]在3000lx的光照度下,小头端菱形藻的藻比增殖率和现存量最高,分别为0．51d。和7．97×10^4cells／ml。在氮磷比为6：1条件下,小头端菱形藻生长最佳。[结论]小头端菱形藻的最适光照度为3030lx,最适氮磷比为6：1。     

春石斛和铁皮石斛试管苗壮苗生根条件的优化

以离体保存5 a的春石斛和铁皮石斛原球茎为材料,采用正交试验对其试管苗壮苗生根的条件进行优化,从鲜重、假鳞茎、颜色、株高和根系生长等方面对植株进行综合评定.结果表明:适宜春石斛壮苗生根的培养基为1/2MS+20 g.L-1白糖+50 g·L-1香蕉匀浆物;适宜铁皮石斛壮苗生根的培养基为1/2MS+10 g·L-1白糖.