杨树溃疡病拮抗链霉菌的筛选及鉴定

【目的】以生物防治防控杨树溃疡病发生与危害为目标,筛选能有效抑制杨树溃疡病且具有开发潜力的拮抗菌株,为杨树溃疡病的生物防治提供新的生防因子。【方法】从吉林省长白山国家级自然保护区横山保护站林下土壤样品中筛选获得1株对杨树溃疡病菌有良好抑制效果的链霉菌,编号为HS1。采用多重筛选法确定菌株HS1及其发酵液的抑菌活性,通过形态学、生理生化特征、16S r DNA序列分析等方法明确其分类地位,运用人工接种法测定菌株HS1发酵液对杨树溃疡病的预防和治疗效果。【结果】菌株HS1及其发酵液对供试植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对杨树溃疡病病原菌抑制作用最强,抑菌带宽达20.66 mm,发酵液抑菌圈直径达40.26 mm; 16S r DNA序列比对分析发现,菌株HS1与Streptomyces scopuliridis同源性最高;人工接种试验结果表明,菌株HS1发酵液对杨树溃疡病的预防和治疗效果分别为60.87%和71.74%。【结论】生防菌株HS1可有效预防和控制杨树溃疡病,且对多种农林重要病害病原菌的抑菌作用效果明显,具有广阔的开发应用前景。     

新疆野苹果内生娄彻氏链霉菌A-m1的鉴定和发酵条件优化及抑菌广谱作用

【目的】研究新疆野苹果内生链霉菌菌株A-m1的分类地位,优化其发酵条件,测定其对多种植物病原物的抑菌活性,明确其广谱抑菌性,为相关病害的生物防治以及该菌株的应用提供参考。【方法】对菌株A-m1菌落培养性状、形态特征、理化性质和16S r DNA序列进行研究;以葡萄座腔菌为靶标菌,确定最高抑菌活性所需的基础培养基,优化碳源和氮源种类,确定最优发酵条件;测定发酵滤液对9种供试植物病原菌的抑菌活性。【结果】菌株A-m1是娄彻氏链霉菌,命名为Streptomyces rochei A-m1。高抑菌活性所需基础培养基为高氏一号,最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为硝酸钾;添加培养基体积5%的种子液、发酵温度23～32℃之间、p H 6～8之间、装液量100/500 m L和发酵培养4天为较优的发酵条件。发酵滤液对参试的9株植物病原菌均表现出抑菌活性,具广谱抑菌性;其中对葡萄座腔菌、苹果拟茎点霉的抑菌率可达95%以上,对胶孢炭疽菌、小麦赤霉病菌和小麦纹枯病菌的抑菌率超过80%,表现出强抑菌作用。【结论】链霉菌S.rochei A-m1抑菌谱较广、抑菌活性高,具有防治部分作物真菌性病害的应用潜力。     

一株蓝莓溃疡病拮抗菌发酵条件优化及稳定性研究

为了明确最有利于蓝莓溃疡病生防链霉菌CX3发酵的营养条件和发酵条件,采用碳氮源筛选法确定发酵培养基的最佳碳源、有机氮源和无机氮源,通过正交设计试验确定碳、氮源的最佳配比,同时,采用单因素法对优化后的CX3发酵液的稳定性进行测定.优化后的发酵培养基配方为:葡萄糖60 g,花生饼粉40 g,硝酸钾4 g,氯化钠4 g,碳酸...     

土壤中杨树溃疡病生防菌的分离鉴定

【目的】杨树溃疡病是中国杨树人工林重大生物灾害之一,采用生物防治的方法控制杨树溃疡病是持续有效的手段。本研究旨在从杨树林地土壤中分离出对杨树溃疡病菌有良好生防效果的拮抗微生物。【方法】以杨树溃疡病病原菌葡萄座腔菌为靶标,进行土壤中生防微生物的分离、筛选和鉴定。土壤微生物的分离采用稀释平板涂布法;拮抗微生物的筛选分为初筛、发酵液复筛和拮抗菌株离体复筛3步,初筛采用平板对峙法,拮抗菌发酵液复筛选择三明治法和改良琼脂扩散法相结合的方法,最终通过离体组织防治效果测定确定目的生防菌株;生防菌株的鉴定采用形态学观察和分子生物学鉴定相结合的方法。【结果】在河北省廊坊市和河南省原阳县的杨树林地中按上、中、下3层共采集48份土样,从土样中共分离得到微生物259株,其中细菌122株;放线菌106株;真菌31株,各土层微生物数量规律整体符合上层＞中层＞下层;通过平板对峙法初筛选择出8株抑菌带直径＞4 mm的细菌和放线菌以及8株拮抗菌菌落直径＞40 mm的真菌;再通过发酵液三明治法和改良琼脂扩散法复筛,筛选出8株对杨树溃疡病有良好抑制作用的拮抗菌,分别是细菌TYZ1B3和YX5B1,真菌LS10F1,LX5F1,LZ10F1,LS6F1,LX6F2和 TLZ2F2;最终通过离体组织防治效果测定,从这8株拮抗菌株中筛选出1株土壤生防真菌LX6F2,其对杨树离体组织溃疡病的防治效果可达76.04%;经过形态学观察,菌株LX6F2的菌落、菌丝及孢子形态符合镰刀菌的特征,通过 rDNA-ITS序列及其系统发育分析,测得生防菌株 LX6F2的序列长度为563 bp,序列登录号为 FR872729.1,其与编号为 JN038467的木贼镰刀菌相似度高达100%,从而鉴定该菌株为木贼镰刀菌。【结论】该菌株的发现为杨树溃疡病的生物防治提供了新的原材料,对杨树溃疡病的可持续控制具有重要意义,可在后续研究中将进一步对其抑菌机理、有效拮抗成分及菌剂研制等进行研究。     

响应面法优化森吉木霉M75菌株发酵培养条件

目的 利用响应面法优化森吉木霉M75菌株的液体发酵培养条件,使其无菌滤液拮抗松枯梢病病原菌松球壳孢菌的抑菌活性得到有效提高,获得森吉木霉M75高效抑菌的发酵培养基配方。 方法 采用Plackett-Burman试验设计、最陡爬坡试验,结合响应面设计法优化森吉木霉M75的发酵培养基,采用Design Expert 11.0软件对试验数据进行处理分析。 结果 得到了培养基配方中对森吉木霉M75发酵滤液抑菌活性影响最显著的3个主要因素：葡萄糖、温度和转速,同时得到了最佳发酵培养浓度为：葡萄糖2.75%,胰蛋白胨1.2%,硫酸锌0.2%,马铃薯浸汁1 000 mL,温度31.0 ℃、转速195 r·min−1,接种量5%,装液量180 mL,发酵培养5 d。 结论 获得了在实验室条件下森吉木霉M75菌株高效抑菌的发酵培养基配方和培养条件,为森吉木霉菌株后续的研究提供了有效依据。     

鱼腥草不同部位抑菌作用的研究

以鱼腥草为材料,石油醚为溶剂,设计L9(34)正交实验提取方法,以金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、酵母菌、青霉菌为供试菌种,进行抑菌实验,研究鱼腥草抑菌活性成分的最佳提取方法及其不同部位的抑菌作用和最小抑菌浓度。结果表明:最佳提取方法为1∶25的料液比,50℃的提取温度,4 h的提取时间;鱼腥草全株均具有抑菌活性,其中地下茎提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、酵母菌的抑制作用最强,最小抑制浓度分别为0.04 g/mL、0.06 g/mL、0.06 g/mL,叶的提取液对痢疾杆菌的抑制作用最强,最小抑制浓度为0.08 g/mL,各提取液对青霉菌的抑制作用均不明显。     

高产丁醇菌株诱变选育及发酵研究

菌株是丁醇发酵生产的重要因素,优良丁醇菌株的选育及发酵条件优化是提高丁醇产量的有效途径。本研究选取工业上重要的产丁醇菌株——拜氏梭菌Clostridium beijerinckii ATCC 55025为对象,进行紫外诱变,获得了一株丁醇产量高、耐受性强和稳定性好的优良突变株Clostridium beijerinckii U-57,由中国典型培养物保藏中心保存,注册号为CCTCC M 2013208。该突变株发酵产丁醇和总溶剂(丙酮、丁醇、乙醇)分别为6.44g/L、10.57 g/L,较原始菌株分别提高了7.15%、6.98%。采用Plackett-Burman设计以及Box-Behnken响应面设计,对突变株U-57的最佳培养基组分进行了筛选。进一步通过正交实验对突变株U-57的最佳发酵条件进行了优化,发酵得丁醇和总溶剂产量分别为7.85 g/L、12.28 g/L,比优化前分别提高了21.9%、15.3%。研究结果为进一步工业化应用提供了基础。     

复合诱变选育恶臭假单胞菌高产菌株的研究

以恶臭假单胞菌Pseudomonas putida野生株Ps-FLAG01为出发菌株,经超声波(US)-硫酸二乙酯(DES)复合诱变后,筛选出一高产菌株Ps-FLAG05,其总酶活力为0.325 3 u/mL,比出发菌株提高25.89%;对其发酵培养基配方进行了优化,最佳配方为:玉米浆1.0%,葡萄糖3.5%,氯化钠0.15%,诱导剂4.5%,与原配方相比,发酵水平提高了13.03%.     

大果沙棘溃疡病室内药剂筛选及田间药效防治试验

为筛选防治沙棘溃疡病的有效药剂,分别采用室内抑菌实验和田间防治试验研究了5种杀菌剂对沙棘溃疡病原菌的抑菌作用和田间防效,结果表明:5种药剂中戊唑醇和寡雄腐霉药效优于乙蒜素、石硫·矿物油微乳剂和甲硫·福美双。药剂浓度处理上,药剂浓度为60μg/mL优于30、6、3μg/mL。抑菌效果较好的药剂80%戊唑醇水分散粒剂,其次为寡雄腐霉,效果较差的是70%甲硫·福美双可湿性粉剂;田间试验结果表明,80%乙蒜素乳油0.13%浓度药液及80%戊唑醇水分散粒剂0.10%浓度药液对沙棘溃疡病防治效果较好,涂药后3个月防效分别达82.14%和79.65%,而微生物杀菌剂寡雄腐霉防效较差,防效低于60%。     

生防细菌对松材线虫灭杀效果初步研究

为了寻找高效低毒且对环境友好的松材线虫病生防菌株,本研究测定了10株对根结线虫有较好防治效果的生防菌对松材线虫的室内灭杀作用,并且选取杀虫活性最好的菌株A4做了其发酵乙醇抽提物对松材线虫LC50值的测定和林间防治效果的测定。结果表明:10株生防菌株的发酵原液对松材线虫都有较好的杀虫效果,其中A4更是在将发酵液稀释10倍之后仍然具有大于50%的杀虫活性,表明该菌株具有较大的生防潜力;室内毒力测定显示菌株A4的发酵抽提物对松材线虫处理24 h的LC50值为0.291 mg/mL;林间防效实验表明菌株A4的发酵抽提物能够显著降低松树枯死率。     

苏北杨树新造林地溃疡病病原菌的鉴定

2001年以来,苏北地区每年春季杨树新造林发生大面积死亡,在死亡或濒临死亡的杨树枝干上,几乎都有溃疡病症状的病斑发生。本试验通过对杨树新造林地(I-72杨)溃疡病病组织的分离、纯化培养获得10余株菌株,经接种、发病后再分离,获得6株拟茎点霉菌株;进一步克隆并分析供试菌株核糖体DNA-ITS区域的序列,结果是分离菌株与GenBank中Phomopsis eucommiicola的ITS序列有同源性,相似性达到99%。因此将该拟茎点霉菌确定为Phomopsis eucommiicolaC.Q.Chang,Z.D.JiangP.K.Chi,。该病原菌侵染杨树引起杨树新造林木溃疡病是首次报道。     

15个生防菌株乙酸乙酯提取物对松材线虫的杀虫活性

筛选的15个生防菌株乙酸乙酯提取物对松材线虫的杀虫活性研究表明,淡紫拟青霉菌株PT1杀虫效果最佳,24 h、48 h和72 h校正死亡率均达到100%;木霉菌株T-28在24 h校正死亡率达到78.64%,48 h为97.12%,72 h达到100%;T-19和T-43在72 h校正死亡率分别达到63.17%,63.59%。     

细黄链霉菌与氮磷钾肥配施对桔梗幼苗的影响

以桔梗(Platycodon grandiflorus)种子为材料,用不同浓度细黄链霉菌菌剂与氮磷钾肥配施桔梗幼苗,研究桔梗幼苗的生理指标及其相关性。结果表明,不同浓度细黄链霉菌菌剂与氮磷钾肥配施,均提高了桔梗幼苗过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性和可溶性蛋白含量(细黄链霉菌菌剂最佳浓度为50倍),而降低了丙二醛(MDA)含量(细黄链霉菌菌剂最佳浓度为20倍)。通过相关性分析表明,桔梗幼苗POD活性分别与蛋白质含量、CAT活性正相关且差异性高度显著(P0.001),蛋白质含量与CAT活性正相关且差异性极显著(P0.01)。     

百菌清对两种杨树病害病原菌的抑制作用初探

选取保护性杀菌剂百菌清,研究其对杨树水泡型溃疡病和烂皮病的抑制作用,采用生长速率法和数据统计分析。通过室内抑菌试验结果表明,百菌清600倍稀释液对杨树水泡型溃疡病抑制率达到90%以上,百菌清400倍稀释液对杨树烂皮病的抑制率达到88%以上,证实百菌清对两种杨树病害有较好的抑制效果。期待本研究为百菌清在杨树病害防治中的应用提供理论支持,为杨树病害防治提供科学依据。     

碳酸氢钠等药剂对水泡型杨树溃疡病的防治研究

对水泡型杨树溃疡病进行了碳酸氢钠和福美胂的室内抗菌活性测定和室外防治试验。当培养基中碳酸氢钠浓度为12 g/L时,溃疡病菌菌丝生长抑制率为96.71%;当培养基中福美胂含量为30 mg/L时,菌丝生长抑制率为100%。在野外40%福美胂150倍液和碳酸氢钠10倍液施药后2周防治效果分别为48.69%和67.74%。碳酸氢钠是一种价格低廉、效果理想、安全的无机化学药剂,对杨树溃疡病的防治有推广和应用价值。     

杨树变色真菌生防细菌KLBMP033发酵条件优化

以内生解淀粉芽孢杆菌KLBMP 033对可可球二孢菌的拮抗活性为评价指标,采用单因素多浓度和响应面试验设计法,对其液体发酵培养基和培养条件进行了优化。优化结果表明,发酵培养基为玉米粉17.8g/L,黄豆粉13.7g/L,NaCl5.0g/L;发酵条件pH值7.5,培养温度28℃,转速为180r/min,种子液的接种量4%,装液量60mL/250mL,培养时间为60h;对可可球二孢的抑制率从起始的53.3%提高到83.2%。     

红松松针原料超声波辅助提取生物抑菌剂的研究

研究不同提取条件下红松松针抑菌物对大肠杆菌的抑菌活性。采用单因素和响应面试验的方法,通过不同乙醇浓度、超声时间、料液比和提取温度下红松松针提取物对大肠杆菌的抑菌圈大小,确定提取红松松针抑菌物的条件。试验表明,乙醇浓度50%,料液比56mL/g,超声时间30min,提取温度50℃时,红松松针抑菌物提取条件最佳。料液比对提取红松松针抑菌物的影响最大,其次是超声时间。     

豚草粗提物提取及对杨树烂皮病抑菌效果比较

为了研究豚草粗提物提取工艺,并与广谱药剂比较对杨树烂皮病的抑菌效果,采用6种提取方法从豚草叶片中提取抑菌活性物质,确定最佳提取方法为温浸-超声波联合提取法,最适提取条件为超声波45 min、75%乙醇溶液、料液比1∶20 g·mL~(-1)、40℃水浴24 h,提取率为20.35%。并开展粗提物与3种药剂对杨树烂皮病林间防治效果比较,结果表明,豚草粗提物对杨树烂皮病有较好的抑菌效果,期待为新型植物源农药的研究提供前期基础,为推进植物源农药在林木病虫害防治中的推广与应用提供一定理论依据。     

新疆野苹果根围木霉分离鉴定及生防特性研究

为了给防治新疆野苹果病害提供生防性能优良的木霉菌株,利用孟加拉红平板分离法进行新疆巩留县野苹果根围木霉菌株分离,通过形态特征和ITS rDNA序列比对进行菌种鉴定,利用平板对峙试验检测分离木霉抑菌能力,用NBT染色和根部观察检验木霉诱导后新疆野苹果幼苗叶片活性氧含量、抗病和促生能力。结果表明:分离鉴定出俄罗斯木霉22株,渐绿木霉13株,哈茨木霉4株。从长势和产孢量等特性上看,俄罗斯木霉T7和哈茨木霉T2为新疆野苹果根围优势生防木霉菌种。哈茨木霉T2对尖孢镰刀菌的抑菌率为75.47%,对链格孢菌的抑菌率为78.17%。俄罗斯木霉T7对尖孢镰刀菌的抑菌率为79.66%,对链格孢菌的抑菌率为91.53%;NBT染色发现木霉处理后野苹果苗叶片活性氧含量降低,叶片染色颜色更浅。总之,木霉能有效抑制病原菌生长,能有效减少新疆野苹果幼苗中活性氧含量,促进和保护根系生长。本研究为防治新疆野苹果病害防治提供生防性能优良的木霉菌株,为苹果病害的生物防治提供可以借鉴的方法。     

解淀粉芽孢杆菌Y-S-Y12菌株对人参锈腐病的生防作用

为了探明杨树内生解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens菌株Y-S-Y12对人参锈腐病的生防作用,进行室内外抑菌防治试验。结果显示,室内抑菌率达到95.13%;菌株的发酵浓缩液对菌丝生长抑菌率为69.41%。Y-S-Y12菌株的发酵浓缩液(含活菌)田间对锈腐病的防效达到75.79%,人参Panax ginseng苗成活率比对照增加了51.82%,小区人参产量比对照增加了154.73%。Y-S-Y12菌株及其发酵浓缩液对6种植物病原菌(Cylindrocarpon destructans,Alternaria brassicicola,Botrytis cinerea,Rhizoctonia solani,Cytospora chrysosperma,Fusarium moniliforme)菌丝生长均具有较强的抑制作用;并且在较广的温度和p H值范围内均具有较强的抑菌作用,其中20℃、p H6.18条件下的抑菌作用最强。