猪胚胎的体外培养

猪胚胎4—细胞期之前培养的难度较大。这期间的体外发育障碍可以采用一些方法加以克服,而使其从1—细胞期发育至囊胚期。试验证实,小鼠输卵管可用以培养猪胚胎;猪胚胎和输卵管细胞一起培养或者培养液里补充猪输卵管液可以提高培养成功率。简化改进培养液后观察到:谷氨酰胺(glutamine)可以作为猪胚胎从结合子发育至囊胚过程中的能重来源;葡萄糖对猪胚胎体外发育没有抑制作用;培养液里补充牛磺酸(taurine)和亚牛磺酸(hypotaurine)可提高猪胚胎的发育程度。迄今已极道的猪胚胎培养液有多种,但是对猪胚胎体外发育障碍的原因还未见报道,现有的培养方法还有待改进。     

更换培养液对体外成熟和受精的牛卵母细胞发育的影响

用添加氨基酸的合成输卵管培养液培养体外成熟和受精的牛卵母细胞。密度为 3或 30个 /30μl,培养 1 53h。如果培养至 72 h时培养液发生改变 ,则培养至 1 53h后培养液中铵的浓度将显著降低。但如果不考虑胚胎密度 ,则改变培养液成份对牛胚胎的发育没有影响。如当 30个胚胎一组进行培养时 ,胚泡的形成和铵的产量都会增加。本研究结果表明 ,牛的胚胎发育至胚泡期时 ,培养体系中铵浓度降低产生的影响可忽视不计。即在目前的条件下 ,采用体外培养技术使胚胎发育至胚泡的过程中 ,不必更换培养液更换培养液对体外成熟和受精的牛卵母细胞发育的影响@…     

卵母细胞成熟和受精研究的最近进展

本文就培养液中加促性腺激素对于卵母细胞成熟和体外受精的影响进行了探讨。加有LH+E_2、FSH+E_2,及不加激素培养胚胎处理间,合子发育至桑葚胚和囊胚的百分率差异不显著。用不同类型的细胞单层协同培养对于早期胚胎发育的影响试验观察到,在输卵管细胞和子宫细胞组合构成的单层中培养的胚胎比在颗粒细胞单层上培养的胚胎发育更快。有几篇关于分离刺激胚胎发育的输卵管因子的报道认为,在输卵管壶腹部条件培养液中,小鼠1—细胞受精卵发育较好,且证明一种低分子量组分在胚胎发育中起了重要作用。     

不同水平微生物发酵蛋白补充料对绵羊瘤胃发酵特性的影响

本试验旨在利用体外法研究微生物发酵蛋白补充料对绵羊瘤胃发酵参数的影响。体外试验分为6组,其中对照组只含培养底物,5个试验组分别添加占全混合日粮5.66%、8.44%、11.30%、14.27%和17.24%的发酵蛋白补充料,并保持0.200 0 g培养底物不变,测定培养液产气量、pH、挥发性脂肪酸(VFA)、菌体蛋白(BCP)和氨态氮(NH3-N)等指标,比较分析发酵蛋白补充料及其不同添加量对瘤胃发酵功能的影响。结果表明:添加发酵蛋白补充料可以提高培养液产气量和NH3-N浓度(P0.05),而对pH和TVFA浓度无显著性影响;在日粮精粗比6:4时,随着添加量的升高,瘤胃微生物数量增加,饲料中培养液产气量、干物质消失率和BCP含量均提高(P0.05),培养液NH3-N浓度降低(P0.05)。经过DPS软件Topsis法综合分析发现,在精粗比6:4日粮下,微生物发酵蛋白补充料最适添加量为14.27%。     

不同共培养体细胞和胎牛血清浓度对牛体外受精后早期胚胎的影响

利用屠宰黄牛的卵母细胞经体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)后的早期胚胎,与单层颗粒细胞(GC)、输卵管上皮细胞(BOEC)等体细胞共培养及在胎牛血清的胚胎培养液中的后续发育进行了研究,并探讨了其影响因素,以期筛选出最佳的体外培养条件。结果表明:使用GC和BOEC体外共培养牛体外受精后胚胎,均取得了较好的囊胚发育率;且牛体外受精后早期胚胎体外培养体系中,添加10%血清能有效地促进牛体外受精后胚胎的囊胚率。     

绵羊胚胎体外培养条件的研究进展

绵羊胚胎体外培养条件的研究进展曹明聚（河南省畜禽改良站郑州４５０００３）在正常生理条件下，胚胎的发育主要从输卵管和子宫壁腺体分泌物中汲取营养。显然，在体外培养条件下，培养液模拟的体外环境对早期胚胎的存活和发育是至关重要的。胚胎移植技术以及胚胎分割、克...     

昆明小鼠早期胚胎体外发育阻滞原因分析

为了分析小鼠早期胚胎在体外发育阻滞的原因 ,建立早期胚胎体外培养系统 ,应用几种不同的培养系统对昆明小鼠单细胞胚胎在体外培养了 96～ 12 0 h。结果表明 ,小鼠单细胞胚胎在 M1 6 和 BWW培养液中卵裂均受到阻滞 ,且两者之间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;CZB和 HTF培养液能有效地克服小鼠胚胎的 2 -细胞发育阻滞 ,与 M1 6 和 BWW相比 ,2 -细胞卵裂率和囊胚率均存在显著性差异 (P<0 .0 1) ;在 M1 6 培养液中添加牛磺酸对早期胚胎发育有促进作用 (P<0 .0 1) ;小鼠早期胚胎在 CZB和牛输卵管上皮细胞 (COEC)共培养体系中的卵裂率较对照组明显提高 (P<0 .0 5 )     

山羊卵泡颗粒细胞和输卵管上皮细胞共培养对山羊体外受精胚胎发育的影响

试验共分 3组 :对照组为单独培养液 ;第 2组为单层颗粒细胞 ;第 3组为输卵管上皮细胞 ,将山羊体外受精胚胎随机放入以上 3组处理中。结果显示山羊体外受精胚胎在卵泡颗粒细胞中发育到囊胚的比率为 4 1.0 % ,在输卵管上皮细胞中发育到囊胚的比率为 5 8.1% ,而在M199培养液中为 5 .6 %。山羊体外受精胚胎分别与山羊卵泡颗粒细胞和输卵管上皮细胞共同培养时 ,均可提高山羊体外受精胚胎的发育进程。且输卵管上皮细胞比颗粒细胞能显著提高山羊体外受精胚胎的发育进程 (P <0 .0 5 )。     

鸡胚体外培养的孵化方法

先将实施人工授精的母鸡在产蛋后2.75小时宰杀,从输卵管膨大部取出一细胞期的受精卵。把受精卵移入玻璃瓶中,倒入培养液(水样蛋白和盐类溶液以3:2混合而成),使胚盘保持不下沉。用塑料薄膜密封瓶口,在41.5℃温度下培养24小时(程序Ⅰ)。待胚胎发育到囊胚期后,除去浓蛋白和培养液,仅把卵黄部分转移到一个锐端开口(直径     

猪瘟兔化弱毒细胞疫苗的深液倾斜旋转培养与增液培养试验

1、用增加培养液量(3—4倍)旋转法培养猪瘟弱毒细胞疫苗,第一收、第二收病毒收获液的毒价均可达到普通旋转培养法的滴度。二收的绝大多数批次毒价用兔检5万倍通过,符合制苗要求。 2、用深液(培养液量增加7—8倍)倾斜旋转法培养猪瘟弱毒细胞疫苗。第一收与第二收的毒液或培养7天一次全收的毒液,其大多数试验批次毒价均可达到制苗标准。 3、用深液(培养液量增加8倍)倾斜旋转通气法培养猪瘟弱毒细胞疫苗,接毒后培养7天一次全收毒液,大多数批次试验毒价用兔检5万倍通过。符合制苗要求。以上三种培养方法所得资料说明提高猪肾细胞产毒量是明显的,工艺是简便的,在生产上是可行的。对细胞提高繁殖病毒能力的问题进行了某些探索。     

山羊卵母细胞体外成熟培养液体积筛选

研究在一定卵丘-卵母细胞复合体(COCs)与培养液体积比例条件下,不同体积的培养液对山羊卵母细胞体外成熟的影响。按照COCs 1枚/4μL培养液的比例,采用5种不同体积的培养液,即50,100,250,500和1 000μL,对山羊卵母细胞进行体外成熟培养和孤雌激活。结果:100μL和250μL两组的卵母细胞体外成熟培养24 h后,其卵母细胞成熟率分别为78.10%和74.62%,差异不显著(P>0.05),但高于50μL组(P<0.05)、500μL组(P<0.05)和1 000μL组(P<0.01)组。100μL组孤雌激活胚胎的卵裂率(68.37%)、桑葚胚率(48.78%)和囊胚率(27.61%)都优于其他各组,其卵裂率和囊胚率与250μL组相比差异不显著(P>0.05)。结果表明采用COCs 1枚/4μL培养液的比例条件下培养卵母细胞,宜选用100～250μL范围内的培养液体积进行卵母细胞成熟培养,其卵母细胞体外成熟率可以达到78.10%左右。     

沙棘总黄酮、槲皮素对鸡成骨细胞碱性磷酸酶活性作用机制的体外研究

本试验旨在研究在体外培养条件下沙棘总黄酮(total flavones of Hippophae rhamnoides,TFH)及槲皮素(quercetin)对爱拔益加(AA)肉鸡鸡胚成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响及其作用机制.成骨细胞分别采用基础培养液、基础培养液添加...     

小鼠胚胎的收集培养和移植

介绍了小鼠胚胎的收集、培养和移植方法．其中包括改进的输卵管、子宫的胚胎收集及改良的胚胎培养液组分；同时对培养板培养胚胎和培养皿微滴胚胎培养进行了比较。     

影响黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的因素

从屠宰场收集黄牛卵巢,取皮质深层卵母细胞进行体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养,分析了影响其效果的因素。结果表明,在成熟培养液中添加FSH(10IU/mL)、HCG(20IU/mL)和17β-E2(1mg/L)对卵母细胞受精后早期胚胎发育能力有极显著促进作用;等量牛卵泡液(BFF)与新生牛血清(NCS)对体外受精胚胎发育效果影响不显著,以15?F为宜;颗粒细胞与输卵管上皮细胞均能显著提高卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎的发育率,颗粒细胞 输卵管上皮细胞对克服胚胎阻滞现象效果显著。     

利用体外法研究功能性寡糖对生长绵羊瘤胃发酵特性的影响

试验采用批次培养法研究了体外条件下日粮分别添加异麦芽寡糖、甘露寡糖及果寡糖对生长绵羊瘤胃发酵功能的影响。三种功能性寡糖的添加水平分别为0.0%(对照组)、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%以及1.0%。结果表明:(1)日粮添加异麦芽寡糖可以提高培养液中的挥发性脂肪酸(VFA)含量,降低培养液中的氨态氮(NH3-N)含量和培养残渣中的中性洗涤纤维(NDF)含量,对培养液中菌体蛋白(BCP)含量的影响不确定。(2)日粮添加甘露寡糖可以提高培养液中的VFA和BCP含量,并以0.6%的添加量效果最佳;添加量在0.8%以上时,可以显著降低(P<0.05)培养液中的NH3-N含量,对培养残渣中的NDF含量没有显著影响(P>0.05)。(3)日粮添加果寡糖可以显著(P<0.05)提高培养液中的VFA含量;当添加量在0.6%以上时,可以显著(P<0.05)提高培养液中的BCP含量,显著(P<0.05)降低培养液中的NH3-N含量和培养残渣中的NDF含量;在本试验所设添加范围内,1.0%的果寡糖对瘤胃发酵影响的综合表现最优。日粮添加异麦芽寡糖、甘露寡糖和果寡糖有助于提高生长绵羊的瘤胃发酵功能,其中果寡糖对提高瘤胃整体发酵功能的作用效果最佳。     

嗅神经鞘细胞条件培养液对PC12细胞活性及分化影响

研究嗅神经鞘细胞(OEC)条件培养液对PC12细胞活性和分化的影响。原代培养并纯化OEC，收集其培养上清并制备条件培养液，然后用其培养PC12细胞，随后于倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化，通过MTT检测PC12细胞活性，免疫细胞染色观察β-tubulin的表达变化。结果显示OEC条件培养液可促进PCI2细胞突起生长，增加细胞活性，促进其β-tubulin的表达升高。从而证明OEC能够分泌一些促进PC12细胞和诱导其向神经元分化的营养因子。     

Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽在蛋鸡肠道内水解的研究

采用蛋鸡离体外翻肠段培养法,将小肠分为十二指肠、空肠前段、中段、后段和回肠五个部位肠段,洗净外翻。2种二肽培养液(Gly-Gly肽和Gly-L-Leu肽溶液)作为两组对照培养液,每种二肽培养液中添加肽酶抑制剂(Bestatin和Amastatin),作为试验培养液,39.5℃培养25min,每5min取样一次,测定培养液中的二肽含量。结果表明,培养5min后,含Gly-Gly肽的对照和试验培养液中均未能检测到完整Gly-Gly肽。而含Gly-L-Leu肽的对照培养液Gly-L-Leu肽的含量降低到16.75％,试验培养液则下降到43.40％。而试验培养液中Gly-L-Leu肽的含量10min后无显著降低(P>0.05)。各培养时段试验培养液Gly-L-Leu含量均显著高于对照培养液(P<0.05)。由此认为,离体肠囊在培养过程中能够迅速释放肠肽酶及一些生物活性物质,快速水解2种二肽。肽酶抑制剂(Bestatin和Amastatin)能抑制Gly-L-Leu的水解,但不能抑制Gly-Gly的水解。     

PVP和17β-E2对牛卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

在黄牛和水牛卵母细胞成熟培养液中用0.3%PVP代替10%FBS,卵母细胞的体外成熟率和受精率无显著差异(P>0.05),结果表明,在成熟培养液中用0.3%PVP代替10%FBS是可行的;在黄牛(或水牛)卵母细胞成熟培养液中添加17β-E2时,卵母细胞的体外成熟率和受精率都显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的高于不添加17β-E2组,试验结果表明,17β-E2对牛卵母细胞的成熟和受精是必要的.同时,本试验对现行的黄牛和黑白花牛体外受精程序应用于水牛体外受精的可行性进行了探讨,结果显示,虽然水牛卵母细胞在体外培养可成熟和受精,但是在同一处理下,水牛卵母细胞的成熟率和受精率都显著(P<0.05)或极显著(P< 0.01)低于黄牛和黑白花牛,这表明,利用现行的黄牛体外受精程序进行水牛的体外受精是有效、可行的,但可能所用的精液或受精过程的某些步骤不太适合水牛卵母细胞,还需进一步改进.     

体外法研究异麦芽寡糖对生长绵羊瘤胃发酵功能的影响

采用批次培养的方法,研究了体外条件下日粮添加异麦芽寡糖对生长绵羊瘤胃发酵功能的影响。异麦芽寡糖的添加水平分别为0%(对照组)、0.20%、0.40%、0.60%、0.80%、1.00%。结果表明,日粮添加异麦芽寡糖可以提高培养液中挥发性脂肪酸(VFA)含量,降低培养液中的氨氮(NH3-N)含量和培养残渣中中性洗涤纤维(NDF)含量,但对培养液中菌体蛋白(BCP)含量的影响不确定。研究初步证明,日粮添加异麦芽寡糖可以在一定程度上提高生长绵羊的瘤胃发酵功能。     

卵巢低温保存时间与不同培养液对小鼠卵母细胞体外发育的影响

为了探讨在4℃条件下,保存卵巢时间与不同培养液对小鼠卵母细胞体外发育的影响,试验比较了在4℃条件下,小鼠卵巢不同保存时间对后续卵母细胞发育的影响,同时对M2和M16两种不同培养液对小鼠卵母细胞体外培养发育效果进行比较。结果表明:随着卵巢保存时间的延长,待成熟受抑制状态的生发泡期(GV期)的卵子所占比例呈上升趋势,减数分裂Ⅱ期(MⅡ期)的卵子所占比例呈下降趋势,4℃低温不同保存时间小鼠卵子体外发育存在差异,4℃保存可延长到18 h,但到24小时时所得卵子发育能力急剧下降。在运用M2和M16两种不同培养液进行卵母细胞体外培养时,M16培养液培养效果略好于M2培养液。