蚕豆萎蔫病毒两个分离物的比较研究

作者对蚕豆萎蔫病毒的两个分离物Ｂ９３５和Ｐ１５８的部分特征作了比较研究；从病毒粒子形态、血清学关系、病毒衣壳蛋白组分和分子量以及病毒核酸组分和分子量这些特征看，Ｂ９３５和Ｐ１５８基本相似。 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ结果表明，Ｂ９３５和Ｐ１５８基因组具有同源性，但其同源性不高，这意味着蚕豆萎蔫病毒种内基因组上可能存在着较大的差异。     

侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究

从浙江省豌豆和蚕豆病株上获得两个病毒分离物，编号为Ｐ－９３５和Ｂ－９３４．人工摩擦接种６科１９种植物，Ｐ－９３５能侵染４科１３种植物，Ｂ－９３４能侵染４科１４种植物，除菜豆外，它们在这些植物上的症状十分相似。Ｐ－９３５和Ｂ－９３４的钝化温度为５０－５５℃，稀释限点为１０￣（－３）－１０￣（－４），体外保毒期分别为５天和４天。两个分离物均能由桃蚜以非持久性方式传毒，用昆诺藜作繁殖寄主均提取到了大量病毒粒子，提纯病毒粒子球形，平均直径２５ｎｍ。病毒外壳蛋白均由两种亚基组成，分子量分别为４２．５ｋＤ和２１．２ｋＤ，感病叶片组织中观察到了无定形的泡状内含体，在琼脂双扩散试验中，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４均能与蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）抗血清（血清型Ⅱ）形成清晰沉淀线。根据以上特性，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４均被鉴定为蚕豆萎蔫病毒，且都属血清型Ⅱ．初步调查表明杭州郊区豌豆病毒病均由ＢＢＷＶ引起，蚕豆病毒病主要有ＢＢＷＶ和黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）。     

侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究

从浙江省豌豆和蚕豆病株上获得两个病毒分离物，编号为Ｐ－９３５和Ｂ－９３４，人工摩擦接种６科１９种植物，Ｐ－９３５能侵染４科１３种植物，Ｂ－９３４能侵染４科１４种植物，除菜豆外，它们在这些植物上的症状十分相似，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４的钝化温度为５０－５５℃，稀释限点为１０＾－３－１０＾－４，体外保毒期分别为５天和４天，两个分离物均能由桃蚜以非持久性方式传毒，用昆诺藜作繁殖寄主均提取到了大量病毒粒子，     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白     

江苏蚕豆三叶草黄脉病毒的分子鉴定及全基因组结构特征分析

三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus, ClYVV)是马铃薯Y病毒属的重要成员,侵染多种豆科作物并造成严重危害。为明确从江苏省盐城市采集的蚕豆样品中检测出的ClYVV全基因组序列以及基因组结构特征,通过分段扩增的策略对ClYVV全基因组序列进行克隆,序列测定后拼接获得江苏蚕豆三叶草黄脉病毒(ClYVV-JS)全基因组序列。基因组序列分析结果显示该分离物基因组序列全长9 585 bp,编码11个蛋白质。NCBI序列比对结果表明该分离物与已报道的日本ClYVV No.30分离物(AB011819)核苷酸序列同源性最高,达96.37%,其中编码的氨基酸序列同源性高达99.06%,而与中国合肥ClYVV分离物(KU922565)核苷酸序列同源性相对较低(94.74%)。聚类分析结果也显示ClYVV-JS归入三叶草黄脉病毒分支,与马铃薯Y病毒属其他成员分别归入不同分支。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

马传染性贫血病病毒L株前病毒全基因组核苷酸序列分析

 本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中，得到 ４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和 ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到 ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长 ８２３５ｂｐ，其中 Ｇ＋Ｃ含量为 ３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外 ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有 ３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码 ｇａｇ、ｐｏｌ和 ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于 ７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于 １７０８～５１０９位碱基之间，全长     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

一种新的杆状病毒转移载体的构建

从家蚕核型多角体病毒和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒中分别克隆出其Ｐ１０基因。从ＢｍＮＰＶＰ１０中亚克隆得到基５端上游片段，经ＰＣＲ定位突变使之ＡＴＧ区突变成一个Ｂｇ１Ⅱ酶切位点。从ＡｃＭＮＰＶＰ１０中亚克隆得到基因３端下游片段，克隆人经突变的ＢｍＮＰＶＰ１０基因启动子的下游，构建成一个新的转移表达载体ｐＢｍＡｃＰＶ－１，由于ＢｍＮＰＶ和ＡｃＭＮＰＶＰ１０基因及两端的同源性高达９０％以上，     

不同病毒侵染种根对太子参生长及产量和品质的影响

【目的】探明不同病毒对太子参生长、产量及品质的影响。【方法】以柘参2号为试验材料，采用RTPCR分子鉴定方法筛选出只携带一种常见病毒、携带两种常见病毒和不带病毒的太子参个体，经扩繁后，在田间使用随机区组的方法种植，探讨不同种类病毒对太子参的生长、产量和品质的影响。【结果】与未带病毒的植株相比，同时感染芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒的植株总叶绿素含量、净光合速率和地上部株高分别降低了24%、33%和26%，单位面积的块根产量、浸出物含量和多糖含量分别降低了77.5%、76.2%和87.3%；而仅感染蚕豆萎蔫病毒的植株与未带病毒的植株相比，总叶绿素含量、净光合速率、地上部株高、块根产量、浸出物含量和多糖含量均无显著性差异。【结论】芜菁花叶病毒显著抑制太子参的生长，降低了太子参产量和品质，而蚕豆萎蔫病毒的影响不显著，在太子参脱病毒培养和脱毒苗的生产应用中应优先去除芜菁花叶病毒。     

同时检测豇豆花叶病毒属与蚕豆病毒属病毒的通用RT-PCR检测方法

【目的】建立一个可同时检测豇豆花叶病毒属（Comovirus）和蚕豆病毒属（Fabavirus）病毒的通用RT-PCR检测方法。【方法】通过基因组序列的多重比对分析,在其保守区域设计简并引物,用于这2个病毒属病毒的通用RT-PCR检测,并进行灵敏性、特异性试验。为便于PCR产物直接测序,在简并引物中引入通用测序引物（RV-M和M13-47）,并通过序列分析对病毒种类鉴定。利用该方法对来自福建柘荣的太子参病毒进行检测验证。【结果】设计一对简并引物,建立了一个用于扩增豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒部分依赖于RNA的RNA聚合酶（RdRp）基因的通用RT-PCR方法。该方法成功用于检测安第斯马铃薯斑驳病毒（ApMoV）、蚕豆染色病毒（BBSV）、蚕豆真花叶病毒（BBTMV）、菜豆荚斑驳病毒（BPMV）、豇豆花叶病毒（CPMV）、豇豆重花叶病毒（CPSMV）、南瓜花叶病毒（SqMV）、红三叶草斑驳病毒（RCMV）和萝卜花叶病毒（RaMV）9种豇豆花叶病毒属病毒;蚕豆萎蔫病毒1号（BBWV1）、蚕豆萎蔫病毒2号（BBWV2）2种蚕豆病毒属病毒共计17个分离物,而不能与同亚科的线虫传多面体病毒属病毒及健康寄主植物反应,显示出良好的广谱性和特异性。在简并引物的5′端分别加入一段非互补的通用测序引物序列（RV-M和M13-47）,不仅可以利用该通用测序引物进行PCR产物直接测序,而且检测灵敏度可以提高10-100倍。序列及系统发育分析表明,所扩增的序列可以把豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒区分到种的水平。利用该方法测定了BBSV的部分RdRp基因序列,显示出与RCMV具有最近的亲缘关系。利用该方法在太子参中检出BBWV2。【结论】建立的通用RT-PCR方法可用于豇豆花叶病毒属和蚕豆病毒属病毒的广谱性检测,结合序列可进行病毒种类的快速鉴定,并且可能用于新病毒种类的检测鉴定。     

水稻黄矮病毒结构蛋白的分离及其小鼠腹小抗体的制备

从人工接种感染黄矮病毒的水稻茎杆中提取得到了部分纯化的ＲＹＳＶ制品，病毒制品，病毒制品经Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ得到分子量分别为８４ｋＤ，６０ｋＤ，３１ｋＤ和２９．５ｋＤ的４条主要蛋白带和分子量为１７０ｋＤ和４３ｋＤ的两条次要蛋白带。根据弹状病毒结构蛋白命名法，按分子量大小依次命名为Ｌ，Ｇ，Ｎ，ＮＳ，Ｍ１和Ｍ２蛋白。从电泳凝胶上切下Ｇ和Ｎ蛋白带，制成抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，制得Ｇ和Ｎ...     

蚕豆上的菜豆卷叶病毒鉴定

从表现黄化和卷叶症状的蚕豆病株上分离到病毒Ｂ－２分离物。它只能由豆蚜、豌豆蚜、棉蚜和桃蚜以持久性方式传毒。豆蚜可以终生传毒，传病有间歇性。病毒Ｂ－２分离物可以侵染１４种豆科植物。酶联免疫吸附测定表明Ｂ－２分离物与菜豆卷叶病毒和甜菜西方黄化病毒有血清学关系。根据传病分体、寄生范围和血清学反应，将病毒Ｂ－２分离物鉴定为菜豆卷叶病毒（ＢＬＲＶ）的一个蚕豆株系，属于大麦黄矮病毒组。     

长江流域蚕豆病毒病的发生情况

自1983年至1985年的三年间,先后对长江流域蚕豆的主要产地(四川、湖北、浙江、上海和江苏五个省市)的蚕豆病毒病进行了现场调查和采样测定。从各地共采集有病毒病症状的标样339份。根据它们在田间的症状、寄主范围、传毒介体、病毒粒体形态和大小以及血清学反应等测定结果,已经鉴定出蚕豆萎蔫病毒(BBWV)、芜菁花叶病毒(TuMV)、大豆花叶病毒(SMV)、蚕豆染色病毒(BBSV)菜豆黄花叶病毒(BYMV)和黄化卷叶病毒(BLRV?)等六种病毒。蚕豆萎蔫病毒的分布最广,危害也重。芜菁花叶病毒主要发生在江苏、浙江一带。黄化卷叶病毒则主要在湖北和江苏发生,危害大,损失重。蚕豆染色病毒都只是在国际蚕豆试验圃中发生,据调查,这些种子都是由国际旱地农业研究中心于1984年提供的。大豆花叶病毒的样本虽然不多,但作为一个越冬的桥梁寄主,其重要性不可忽视。 BBSV在中国是首次发生。TuMV和SMV能侵染蚕豆,这是第一次报道。     

侵染蚕豆的芜菁花叶病毒(TuMV)和大豆花叶病毒(SMV)的鉴定

南京地区蚕豆上的病毒病种类很多,除了去年已经鉴定的有蚕豆萎蔫病毒(BBWV)和菜豆黄花叶病毒(BYMV)(已载本刊1984年第3期)之外,对另外两种病毒又作了进一步的鉴定,其一是芜菁花叶病毒(TuMV),其二是大豆花叶病毒(SMV),它们都能侵染蚕豆而引起发病。现将测定结果简报如下:     

菜豆萎蔫病菌的PCR检测技术

根据在GenBank已登录的萎蔫短小杆菌(Curtobacterium flaccumfaciens)的基因间重复序列，用DNAman5．0软件比较同源性，设计了一对引物CffF1和CffR2，并以菜豆萎蔫病菌的基因组DNA为模板进行扩增，得到了一段长280bp的PCR特异产物。参试的其他属如棒形细菌属(Clavibacter)、节杆菌属(Arthrobacter)、拉氏杆菌属(Rathayibacter)、红球菌属(Rhodococcus)细菌和萎蔫短小杆菌的其他致病变种(Cur．f.pv．oortii、Cur.f.pv．poinsettiae、Cur．f.pv．betae)，以及其他植物病原细菌的基因组DNA均无扩增产物。该检测方法特异性强、灵敏度高，在100Pg的基因组DNA浓度下仍能检测到很强的条带。     

辣椒病毒病的防治

1 发病规律 引起甜（辣）椒病毒病的病毒主要有：黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒、苜蓿花叶病毒、烟草蚀纹病毒、马铃薯X病毒、蚕豆萎蔫病毒等。传播途径随其毒源种类不同而异，但主要可分为虫传和接触传染两大类。借蚜虫传播的病毒主要有前三种病毒，烟草花叶病毒靠接触及伤口传播，通过整枝打杈等农事操作传染。     

新疆辣椒上蚕豆萎蔫病毒的鉴定

从新疆五家渠辣椒上采到的一株病毒,病株症状为矮化、落叶、茎部有坏死条斑。在3科18种寄主植物上接种结果,它可系统侵染苋色藜、蚕豆、心叶烟等10种植物,局部侵染绿豆、豇豆、蔓陀罗、首蓿等5种植物,不侵染三叶草、鹰嘴豆、普通烟。其致死温度为65—70℃,体外存活期为4—5天,稀释限点为5000倍。它可由桃蚜传播,其粒体为球形,其核酸有两个组分,外壳蛋白有两个亚基,分子量分别为43500及26000Dalton,与蚕豆萎蔫病毒抗血清呈阳性反应。     

京津冀地区猪圆环病毒3型的全基因组克隆与分析

【目的】监测近期在京津冀地区流行的猪圆环病毒3型毒株及其基因变异情况。【方法】以近期京津冀地区猪圆环病毒3型阳性临床样品为模板，用PCR技术扩增猪圆环病毒3型全基因组片段，随后进行基因克隆、序列测定和序列分析。【结果】PCR扩增、序列测定和BLAST比对结果显示获得4株大小都为2 000个核苷酸的猪圆环病毒3型全基因组序列。基于全基因组核苷酸分析结果显示，这4株猪圆环病毒3型与选取的国内外15株猪圆环病毒3型的同源性均达98.4%以上，系统发育树显示上述PCV3毒株所处的分支虽有所不同但却都非常近，表明不同猪圆环病毒3型毒株之间的全基因组核苷酸有非常高的同源性和保守性。基于开放阅读框2基因核苷酸的系统发育树显示上述猪圆环病毒3型毒株被分成3个分支，所得4株猪圆环病毒3型分别归属于基因型a与c,并呈现出一定的地域差异。【结论】获得了京津冀地区4株猪圆环病毒3型全基因组序列，虽然它们具有很高的全基因组核苷酸同源性与保守性，但却分属于2种基因型，并呈现出一定的地域差异。     

不同基因型禽Ⅰ型副粘病毒致病性及全基因组序列分析

为了解当前流行于鸭群的禽Ⅰ型副粘病毒的致病性和分子特征,测定分析了两株病毒对不同动物的致病性、病毒的遗传进化地位及其全基因组序列.结果表明,所分离的两株病毒中,M4毒株与疫苗Ulster株同源性最高,为基因Ⅰ型,基因组全长15186 nt,PX2/03毒株则与近来分离自水禽的FP1/02等高致病分离株的同源性最高,为基...