菌核寄生菌盾壳霉的研究 Ⅱ．不同菌株培养特性及寄生致腐菌核能力的比较

在ＰＤＡ平板上比较了来自我国不同地区的２４个盾壳霉菌株和１个加拿大盾壳霉菌株的培养特性，并在核盘菌菌核上接种盾壳霉孢子，测定其寄生致腐菌核的能力。结果表明：在２０℃下供试菌株平均生长速度是３．０ｍｍ／ｄ，根据菌落的基质菌丝色素、气生菌丝和产孢量等特性可把２５个菌株分成Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ３种菌落类型，各占８０％、１２％和８％；２５个菌株寄生致腐菌核能力存在显著差异，并可将它们分成强、中和弱３组，各占４０％、４８％和１２％。     

菌核寄生菌盾壳霉的研究：Ⅰ.生物学特性及在湖北省的自然…

采用菌核诱捕法从源于湖北省４０个县市的土壤样品中分离及鉴定同腐烂菌核相关的真菌。结果表明：重要的菌核寄生菌盾壳霉在湖北省分布于西北及西南部高海拔山区，表现出明显的地域性。除核盘菌，质壳霉还可寄生三叶草核盘菌和小核盘菌。盾壳霉菌丝生长和分生孢子萌发的适温为２０℃，菌丝生长的最适ｐＨ值为４，光对孢子的产生具明显的促进作用。此外，分生孢子萌发需９５％以上的空气相对湿度。     

菌核重寄生菌盾壳霉生物学特性研究

对菌核重寄生菌盾壳霉生物学特性研究表明 :盾壳霉菌可在 5～ 2 5℃温度范围内生长繁殖 ,菌丝生长和繁殖的最适温度为 2 0℃ ;菌丝生长的pH值范围是pH 3～ 10 ,pH 5时最适宜于菌丝生长 ;孢子萌发需 95 %以上的相对湿度 ,空气湿度为 10 0 %时孢子萌发率较高 ;光照对孢子成熟具有明显的促进作用 ;该菌在PDA培养基上菌落生长迅速且产孢量最多。     

关于生防菌盾壳霉的研究

许多研究表明盾壳霉具有控制温室和田间多种作物菌核病的潜力.为了加速盾壳霉产业化进程和更好地发挥其控制菌核病的作用,以及为了使人们对盾壳霉的研究不断深入,综述了盾壳霉生态学特性,对核盘菌的生防机制及在菌核病防治上的潜力等方面的研究进展.     

菌核寄生菌盾壳霉扩大培养和孢子保存方法的研究

盾壳霉(Coniothyriumminitans)可以在脱皮高粱米上扩大培养,为了获得大量菌料,本文规范了扩大培养的程序,研究了菌料的获得方法、时间对产孢量的影响及孢子在不同的保存条件下的存活情况。结果显示:培养最适含水量高粱米与水的体积比为4:1,最适的培养条件是18～20℃,PH3.5～4.5,时间为20～40天,每天至少用力摇动三次。菌料粉碎处理的孢子量最多,为表皮处理的10～25倍。干燥保存的菌料孢子活性最高,其萌发率为35.7%(48小时),与对照35.5%没有明显差异,且分别为矿物油(汽油)中保存的孢子(8.6%)和灭菌蒸馏水中保存的孢子(5.2%)萌发率的4.2倍和6.9倍。不同保存时间内干燥保存的孢子萌发率之间没有明显差异。     

盾壳霉对核盘菌的重寄生机制研究

室内对峙培养和寄生致腐作用测定结果表明 :盾壳霉 (ConiothyriumminitansCampbell)对核盘菌菌丝生长没有明显拮抗作用 ,但对菌核形成有一定抑制作用。被盾壳霉寄生的菌核表面皱缩、软化腐烂 ,后期菌核表面密生大量盾壳霉分生孢子器 ,并从顶端孔口分泌出黑色球状分生孢子黏液。显微镜检盾壳霉寄生的腐烂菌核石蜡切片 ,结果表明 :盾壳霉菌可在菌核的表面和内部疏丝组织寄生 ,并形成分生孢子器。盾壳霉分生孢子器表生、半埋生或埋生于腐烂菌核上。被盾壳霉寄生的菌核 ,后期拟薄壁组织消解断裂成不连续的残片 ,内部疏丝组织消解 ,在发病后期致密的疏丝组织被盾壳霉菌消解成的网状结构所代替。     

杀菌剂对盾壳霉和核盘菌的毒力及选择性研究

为了选择可与盾壳霉相结合共同防治菌核病的有效化学药剂,采用菌落直径法比较了9种常用杀菌剂对盾壳霉和核盘菌的毒力差异。结果表明,盾壳霉对多菌灵、菌核净、腐霉利和百菌清高度敏感,平均EC50为0.11~3.04 mg.kg-1;对异菌脲、乙烯菌核利和乙霉威中度敏感,平均EC50为11.83~14.17 mg.kg-1;对代森锰锌和福美双敏感性最低,平均EC50为49.88~53.39 mg.kg-1。核盘菌对多菌灵、菌核净、乙烯菌核利、福美双和腐霉利高度敏感,平均EC50为0.08~2.07 mg.kg-1;对乙霉威、异菌脲和百菌清中度敏感,平均EC50为6.66~15.33mg.kg-1;而对代森锰锌最不敏感,平均EC50为33.57 mg.kg-1。福美双和乙烯菌核利对盾壳霉和核盘菌的选择性指数较大,分别为32.28和12.71,比较适合与盾壳霉搭配共同控制菌核病。     

重寄生真菌盾壳霉与核盘菌对峙培养的差异代谢物分析

运用基于液相质谱联用技术的代谢组分析手段,检测重寄生真菌盾壳霉和宿主植物病原菌核盘菌对峙培养时的代谢物差异。结果发现:盾壳霉与核盘菌对峙接触能显著诱发盾壳霉代谢物的分泌,构建盾壳霉特定代谢物数据库检测到3种代谢物涉及重寄生过程,分别为Macrosphelide A,Benzenediol和5-Aminopentanoate,且对峙接触2d时检测到的代谢物积累量最大。对盾壳霉重寄生过程代谢物变化的分析结果表明,真菌重寄生能诱发代谢物水平的交流和次级代谢物积累。     

盾壳霉对2种除草剂的敏感性评价

为了与播前除草措施相配合,达到油菜轻简化栽培的目的,开展了盾壳霉对田间常用灭生型除草剂草甘膦和草铵膦敏感性的研究。结果发现,草甘膦和草铵膦原药对盾壳霉菌丝生长有较强抑制作用,EC50分别为714.3μg/mL和574.5μg/mL;草甘膦对盾壳霉孢子萌发抑制作用较弱,EC50为1 019.8μg/mL,而草铵膦原药对孢子的萌发基本没有抑制作用;2种除草剂原药均抑制核盘菌菌丝生长,EC50分别为1 695.8μg/mL和223.5μg/mL;2种除草剂商品制剂对盾壳霉孢子没有杀灭作用,但延迟孢子的萌发,影响盾壳霉对核盘菌菌核的寄生。研究结果表明,在田间生产中盾壳霉可以与草甘膦和草铵膦2种除草剂进行混合施用。     

盾壳霉孢子苹果渣培养研究

以苹果渣为培养基,采用单因素试验研究苹果渣预处理方法、盾壳霉孢子种龄、初始pH、碳酸钙添加量和脲素添加量及其添加方式等对盾壳霉孢子生长的影响,优化培养条件。结果表明,将苹果渣用4倍水清洗1次,灭菌后接入3日龄液体种子,以及调节苹果渣pH为6.5,添加15 g.kg-1碳酸钙或25 g.kg-1脲素均有利于盾壳霉孢子的产生,每克培养基最多可产孢子1.1×109~1.2×109个。     

盾壳霉几丁质酶和葡聚糖酶酶动力学性质初步研究

盾壳霉几丁质酶和葡聚糖酶酶动力学性质研究表明:几丁质酶和葡聚糖酶的酶促反应,在本试验计量范围内,其反应速度与酶量和底物浓度均呈正相关,但两种酶促反应适宜的温度和pH值有较大差。几丁质酶降解几丁质的最适反应温度为50℃,最适pH值为8.0,葡聚糖酶降解葡聚糖的最适反应温度为60℃,最适pH值为3.0。     

盾壳霉寄生核盘菌过程中葡聚糖酶、几丁质酶及电导率的变化

为了解盾壳霉寄生核盘菌的生化机理,采用了紫外分光光度法测定了盾壳霉寄生菌核过程中,葡聚糖酶和几丁质酶的变化,并用电导率仪测定了这个过程中电导率的变化。结果表明:从被盾壳霉寄生的活菌核检测到(处理)葡聚糖酶和几丁质酶活性明显高于活菌核和被盾壳霉寄生的死菌核,其中处理的葡聚糖酶活性从15 d以后就明显高于菌核自身也高于盾壳霉本身的酶活性,处理的几丁质酶活性从10 d起就维持在较高水平,处理的电导率从10 d以后明显高于活菌核。在这个过程中这两种酶活性提高,电导率增大,膜透性增强。     

盾壳霉产几丁质酶培养条件的研究

通过在SMCS培养液中加不同的碳源、氮源以及双碳源,改变培养时间、温度及培养液的pH值,研究了盾壳霉产几丁质酶的培养条件。结果表明：盾壳霉接种在改良的SMCS液体培养基中置于恒温摇床(200 r·min~1．20℃)上培养15 d,可诱导产生大量的几丁质酶。改良的SMCS培养液配方：KH_2PO_4680 mg,K_2HPO_4870 mg,KC1200 mg,NH_4NO_3lg,MgSO_4·7H_2O_200 mg,CaCl_2 200 mg．FeSO_4 2 mg．znSO_4 2 mg,MnSO_4 2mg,葡萄糖5 g,几丁质5 g,加水1000 mL,调pH值到6．5。     

盾壳霉对核盘菌的重寄生作用机理及生防应用前景研究获山西省自然科学三等奖

<正>该研究通过科学地试验和观察,客观真实地再现了盾壳霉对核盘菌的重寄生过程,探明了盾壳霉主要是通过分泌胞外几丁质酶和葡聚糖酶来降解核盘菌菌丝细胞壁及菌核和子囊盘组织,从而抑制核盘菌生长,并导致菌核和子囊盘的腐烂消解的机理,并在初步分离纯化盾壳霉几丁质酶和葡聚     

NADPH氧化酶相关基因对盾壳霉代谢的影响

基于液质联用(LC-MS)的代谢组学分析手段,通过突变株Qnox1-6与野生株zs-1的代谢比较,研究NADPH氧化酶相关基因对盾壳霉代谢的影响。筛选得到14个重要的代谢差异物质,主要是羧酸类和苷类物质。特别是7个仅在突变株中出现的物质为:苯二酚、松柏苷、甾体皂苷类物质、3个羧酸类物质及其他物质,这些代谢物与盾壳霉寄生核盘菌紧密相关。     

盾壳霉发酵物对向日葵的促生作用及SOD活性的影响

用盾壳霉固体发酵物分别稀释5倍、10倍、50倍、100倍、200倍和400倍对向日葵浸种,研究其对种子萌发、根长、株高、干质量和鲜质量的影响;并采用紫外分光光度法测定了盾壳霉发酵物浸种向日葵后,叶内超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。结果表明,稀释50倍的发酵液能明显促进根长、株高生长,增加干质量,效果最好;100倍的发酵液对种子萌发和根长生长有明显的促进作用,效果最好;稀释10倍的盾壳霉发酵物浸种向日葵后,叶片内SOD活性显著高于对照。     

盾壳霉发酵物对向日葵的促生作用及PAL活性的变化

将盾壳霉固体发酵物分别稀释10倍、50倍和100倍对向日葵浸种,研究了其对种子萌发、根长、株高、干重和鲜重的影响;并采用紫外分光光度法测定了盾壳霉固体发酵物拌种向日葵后,苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的变化。结果表明:稀释10倍的发酵液对种子萌发和幼苗生长表现出一定的抑制作用,都明显低于对照;稀释50倍和100倍的发酵液可明显促进植株和根茎生长,增加干重和鲜重,其中以50倍液的效果最好;实验还表明稀释10倍的盾壳霉固体发酵物拌种向日葵后茎内PAL活性显著高于对照水平;叶和根内PAL活性与对照无显著差异。     

盾壳霉寄生核盘菌过程中胞壁降解酶的变化及对核盘菌的影响

通过测定盾壳霉寄生核盘菌过程中几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的变化及对核盘菌菌丝和菌组织的影响,结果表明:盾壳霉在寄生核盘菌初期其几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性均会明显的升高,具有明显的诱导酶特征,同时盾壳霉对照在没有核盘菌存在时,也能检测到几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性,说明盾壳霉产生的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶都有组成酶存在。核盘菌菌丝和菌核组织的大量消解都出现在这两种酶活性达到高峰之后,表明两种酶协同作用更有利于核盘菌菌丝和菌核组织的消解腐烂。     

坪草腐霉枯萎病菌(Pythium aphanidermatum)的生物学特性及诱变菌株毒素的除草活性研究

为了明确坪草腐霉枯萎病菌PA1菌株的生物学特性及其诱变菌株所产生毒素的除草活性,对PA1菌株的生长适度、保存条件及孢子囊和藏卵器的产生条件进行了研究,测定结果发现,PA1菌株菌丝生长的最适温度为34℃,菌种保存的适宜温度为10℃～15℃;20℃条件下,在CMA培养基和燕麦粉液体培养基中可以大量产生藏卵器和卵孢子;5℃～15℃条件下,可以产生孢子囊。利用紫外线对PA1菌株的菌丝进行紫外诱变,得到了18株诱变菌株(PAM 1～18)。通过生长速率测得,PAM1菌株的生长速率最快,诱变菌株所得粗毒素对马唐和反枝苋的生长抑制作用结果表明,以PAM1的除草活性最高。对PAM1诱变菌株进行了发酵试验,在72 h的发酵过程中,发酵液的pH值逐渐降低;用发酵液制备所得粗毒素对马唐、反枝苋具有很好的除草活性。