柞蚕蛹增殖核型多角体病毒的研究

柞蚕蛹增殖核型多角体病毒的研究谢秉泉，周怀民，郑作运（河南省云阳蚕业试验场）在Ｓｍｉｔｈ（１９８３）、前田进（１９８４）取人干扰素基因分别与苜蓿尺蠖核型多角体病毒ＤＮＡ（Ａｕ－ｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮＰＶ－ＤＮＡ）和家蚕核型多角体病毒...     

柞蚕核型多角体病毒结构多肽的分析

本文应用电子显微镜、离心分离沉淀和不连续的垂直板 SDS-PAGE等生物化学的分析方法和技术,对柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pemyi NuclearPolyhedrosis Virus 简称 APNPV)的多角体蛋白、病毒粒子的结构多肽进行了分析。结果表明,纯化的多角体形态完整,病毒粒子具有典型的昆虫杆状病毒紫外吸收特征;经 EDTA 和热处理的多角体蛋白仅有一条主带,其分子量为29,500±500d;多角体蛋白的氨基酸组成中富含 Asp 和 Glu,而 His 的含量较低(Cys 和 Met未精确测定);病毒粒子至少有23种结构多肽,其分子量范围在17,000～77,900d之间,其中有5条主要的结构多肽。     

柞蚕核型多角体病毒和家蚕核型多角体病毒的同义密码子使用模式分析

基因组中的基因和基因密码子组成不同使柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)与家蚕核型多角体病毒(BmNPV)间不能交叉感染。通过计算有效密码子数(ENc)、相对同义密码子使用度(RSCU)、GC含量、GC3s含量、密码子适应指数(CAI),比较分析ApNPV和BmNPV同义密码子使用模式差异。ApNPV和BmNPV的密码子偏好性均较弱,但二者的ENc值和GC含量差异显著;除碱基组成外,还存在其它因素影响密码子使用模式,但各影响因素的贡献率均较低,在基于密码子使用频率的对应分析中BmNPV的第1、第2向量轴贡献率均低于ApNPV;ApNPV的基因表达水平与GC含量、GC3s含量以及ENc值极显著相关(r分别为0.418、0.735、-0.628,P=0.000),而BmNPV的基因表达水平只与GC3s含量呈弱相关(r=0.214,P=0.010)。分析结果显示,ApNPV和BmNPV的密码子偏好性虽均较弱,但同义密码使用模式及其影响因素存在差异。     

蓖麻蚕核型多角体病毒和柞蚕核型多角体病毒的密码子使用模式分析

蓖麻蚕核型多角体病毒(Phcy NPV)是柞蚕核型多角体病毒(Anpe NPV)的变种,不能感染柞蚕。通过病毒基因组GC含量、GC3s含量、有效密码子数、相对同义密码子使用度、密码子偏好参数的计算及ENc-plot分析、中性绘图分析、对应分析等,比较Phcy NPV和Anpe NPV的密码子使用模式。Phcy NPV、Anpe NPV分别只有1个和4个ORF的密码子偏好性较强。与Anpe NPV比较,Phcy NPV少数ORF的GC含量、GC3s含量、有效密码子数量和密码子偏好参数变化较大,但2种病毒ORF组间的GC含量、GC3s含量、有效密码子数和密码子偏好参数均无统计学差异(P=0.135、P=0.189、P=0.192、P=0.200)。2种病毒ORF组间,由同义密码子编码的18种氨基酸的密码子使用均无统计学差异(P0.05),鉴定的17种偏好性密码子也均相同。GC碱基组成是影响2种病毒ORF组密码子使用模式的主要因素,而自然选择对GC碱基组成的影响大于突变压力,但2种病毒间自然选择的影响程度无统计学差异(P=0.770)。Phcy NPV在适应新宿主蓖麻蚕的进化过程中密码子使用模式变化较小,尚不能通过密码子使用模式分析解释杆状病毒在不同宿主间的交叉感染机制。     

不同地域柞蚕核型多角体病毒特性的研究

探讨了我国不同地域ApNPV的特征性状。试验表明:(1)不同地域的ApNPV对河南柞蚕、蓖麻蚕的致病性有差异;(2)不同地域ApNPV-DNA经EcoRI酶解,电泳图谱相似;使用salI内切酶酶解时,在琼脂糖电泳图谱中的C、G、O、Q、U和P等片段,不同毒株之间有差异;(3)河南云阳株(HY)病毒粒子多肽由16种蛋白亚基组成;病毒DNA为线形环状结构,周长4.76×10~5,计算DNA的分子量为:91.4×10~6道尔顿。     

柞蚕蛹卵巢细胞的离体培养及其病毒感染试验

对柞蚕蛹卵巢细胞进行离体培养,原代培养出现细胞聚集中心,生长良好的卵巢原代培养细胞一般在1—2个月由可以形成细胞单层进入传代培养。培养的细胞多为圆形上皮样细胞,并以哑铃状、棱形及分枝伸展的方式进行增殖。其原代培养20天以上的单层细胞对同源的柞蚕核型多角体病毒很敏感。病毒接种3—4天后,细胞出现明显的致病变现象,5—6天后,大部分细胞核内形典型的多角体,8天以后核内多角体成熟,致使细胞破裂而释放到培养基中。而且感染后的细胞培养物回接蛹体和原代细胞仍具感染力。     

柞蚕卵巢细胞原代培养及对核型多角体病毒的敏感性

对柞蚕卵巢细胞采用原代培养法,经6—7天形成细胞单层。对培养2周以上的细胞单层,进行柞蚕核型多角体病毒的感染试验,经2—3天可见部分细胞核内形成多角体,约半月感染率达60％左右。     

利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白

为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Δph/egfp+。将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-Δph/egfp+后6 d,EG-FP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定。研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异。     

柞蚕核型多角体病毒侵染对柞蚕幼虫体内部分保护酶活性的影响

研究柞蚕幼虫被柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)侵染后,体内主要保护酶活性的变化,有利于了解Ap NPV对柞蚕的致病机制。测定柞蚕4龄幼虫被Ap NPV侵染后血淋巴中几种保护酶的活性,结果表明:柞蚕幼虫被Ap NPV侵染后,其血淋巴中的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性逐渐升高,分别在接种后第4和第3天达到最大值0.11 U/(m L·min)、573.97 U/(m L·min),之后又逐渐下降;血淋巴中的过氧化氢酶(CAT)活性则表现出降低-升高-降低的变化趋势,在接种后第5天达到峰值378.44 U/(m L·min)。在柞蚕对Ap NPV侵染的免疫防御过程中,POD、SOD是首先作出应答反应的保护酶,CAT是在前二者之后起作用的保护酶,并且试验组柞蚕幼虫血淋巴中的POD活性始终高于发育同期的对照组幼虫,故推测POD是起主要作用的保护酶。     

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对家蚕的感染性分析

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒作为一种新型微生物源低毒杀虫剂,能够防治大多数鳞翅目昆虫并广泛应用于农业生产,它对同属于鳞翅目昆虫的家蚕是否具有感染性是该生物农药在桑保和蚕区植保上推广的关键。     

柞蚕幼虫、嫩蛹及滞育蛹营养成分的比较研究

为进一步开发柞蚕的可利用价值,对柞蚕幼虫、嫩蛹（神仙蛹）及滞育蛹的营养成分进行了分析比较,结果表明：蛋白质和脂肪含量均以滞育蛹最高,分别为59．2g／100g和12．1g／100g;总糖和粗多糖含量则以嫩蛹最高,分别为3．0g／100g和5．4g／100g,其中,嫩蛹的粗多糖比柞蚕幼虫高58．8％,比滞育蛹高74．2％;氨基酸总量嫩蛹最高为44．94g／100g,而且其天门冬氨酸和谷氨酸含量也高于柞蚕幼虫和滞育蛹,分别占氨基酸总量的10．68％和12．84％。柞蚕嫩蛹是营养价值较高的昆虫食品,具有较高的开发利用价值。     

柞蚕对ApNPV感染的抵抗性与部分生命力性状的相关性

柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)是危害柞蚕的主要病原。以柞蚕部分现行品种、杂交种及引进品种为材料,研究柞蚕对ApNPV感染的抵抗性与部分生命力性状的相关性。结果显示,稚蚕对ApNPV感染的抵抗性与普通孵化率呈显著正相关,相关系数为0.71,而与5龄壮蚕对ApNPV感染的抵抗性及自然发病率无显著相关关系;5龄壮蚕对ApNPV感染的抵抗性与5龄壮蚕感染ApNPV后的虫蛹统一生命率呈显著正相关,相关系数为0.98。研究结果表明,柞蚕品种的抗ApNPV病毒性能应依据稚蚕期和5龄壮蚕期2个发育阶段对病毒感染的抵抗性进行综合鉴定。     

三对家蚕新品种对血液型脓病的感染性试验简报

对由我所育成的新品种夏7×夏6、秋菊×新6、春华×秋实及秋丰×白玉、丰一×54A共5对蚕品种从3龄起蚕添食家蚕血液型脓病多角体病毒,作其对NPB的感染性比较试验。结果表明,不同杂交种对血液型脓病的感染性差异很大,对血液型脓病的感染性由弱到强依次为夏7×夏6夏6×夏7>秋菊×新6新6×秋菊白玉×秋丰>丰一×54A>秋实×春华春华×秋实秋丰×白玉。     

柞蚕新品种墨玉的选育

为解决我国北方二化性柞蚕产区柞蚕品种辨识度低等问题,辽宁省蚕业科学研究所以具有幼虫期典型体色性状的8822和具有成虫期典型标记性状的H 8701为亲本,选育出兼具幼虫期和成虫期典型性状特征的柞蚕新品种墨玉.新品种幼虫体背为宝石绿色,成虫前翅前缘脉呈黑紫色.新品种具有对北方低温多湿气候适应性强,茧型中等,抗病丰产等优点,繁种试验比对照品种抗大春季增产9.08％、秋季增产9.87％.     

东方蜜蜂微孢子虫孢子冷冻保存后对意蜂工蜂的侵染性

东方蜜蜂微孢子虫是成年蜜蜂的重要传染性病原真菌。试验对10%的甘油、乙二醇、二甲亚砜及水在-80℃低温下冷冻保存东方蜜蜂微孢子虫孢子5个月后,孢子对意蜂工蜂的侵染性进行了考查。每只初出房工蜂接种3×104个孢子,结果发现,接种后15天,各组的孢子量无显著差异(P>0.05),产孢量为3.05⁴.13×107个/只。10%甘油和10%二甲亚砜2种保存孢子感染工蜂的22 d累计死亡率分别高达74%和68%,而水保存的累计死亡率仅12.5%。所以得出结论,10%甘油和10%二甲亚砜是比水更好的孢子冷冻保护剂。     

美国白蛾Hyphantria cunea(Drury)越冬蛹的抗寒性研究

基于为控制美国白蛾Hyphantria cunea(Drury)对桑树和柞树的的危害提供理论依据,测定了美国白蛾越冬蛹不同时期的过冷却点和含水量。结果显示,越冬蛹的过冷却点以2月份最低,为(-27.07±0.38)℃,11、12月份最高,分别为(-20.38±2.26)℃和(-22.99±4.03)℃;含水量以11、3月最高,分别为67.03%和65.07%,1月份开始下降,2月份降至最低30.76%,3月份又增加到45.95%。含水量的变化与过冷却点的变化趋势相似,含水量的下降降低了越冬蛹的过冷却点,可增强其抗寒能力。     

Infectivity of Trichinella papuae for experimentally infected red foxes (Vulpes vulpes)

To evaluate infectivity for carnivores as well as other biological characteristics of the newly described Trichinella papuae, eight red foxes were experimentally infected with the parasite. Five weeks after inoculation, T. papuae larvae were recovered from nine different muscle types. The larvae recovered from muscle tissue were shown to be infective to mice, to have a very low tolerance to freezing, and to survive longer than the other Trichinella genotypes in decaying tissue up to 5 weeks after infection.     

Infectivity and pathogenicity of Cryptosporidium andersoni to a novel host, southern multimammate mouse (Mastomys coucha)

The infectivity and pathogenicity of Cryptosporidium andersoni (bovine isolate) for neonatal and adult southern multimammate mice (Mastomys coucha) was studied using transmission experiments. C. andersoni isolate used in this study was not infective for BALB/c mice, but experimental infection proved susceptibility of neonatal and adult M. coucha to the infection. The prepatent period was 20-24 days, the patent period varied between 46 and 59 days. No signs of clinical illness or macroscopic findings were detected in infected animals. Cryptosporidium developmental stages were detected only in the glandular part of the stomach of M. coucha in histological sections stained with Wolbach's modification of Giemsa and using immunofluorecence. Histopathological changes were characterized by dilatation and epithelial metaplasia of infected gastric glands without inflammatory response in the lamina propria. Neonatal M. coucha were more susceptible to C. andersoni infection than adults. M. coucha seems to be a useful laboratory model for study of C. andersoni infection.