2种裸鲤线粒体DNA细胞色素b基因序列分析

对青海湖裸鲤和花斑裸鲤的线粒体DNA细胞色素b基因进行了PCR扩增、克隆及其序列测定,得到的序列长度均为1140bp,但T,C,A,G含量有所不同。在青海湖裸鲤细胞色素b基因中它们的含量分别为355(31．1％),296(26％),305(26．8％)和184(16．1％),GC含量为42．1％,分子量为349693道尔顿(Dalton);在花斑裸鲤细胞色素b基因中,它们的含量分别为358(31.4％),294(25.8％),305(26．8％)和183(16．1％),GC含量为41．8％,分子量为349698道尔顿(Dalton)。     

青海湖裸鲤eif5b基因克隆和初步功能分析

【目的】围绕青海湖裸鲤卵巢中的eif5b基因克隆和功能开展相关研究，为青海湖裸鲤的卵巢发育机制研究提供理论基础数据。【方法】采用RACE和RT-PCR克隆青海湖裸鲤eif5b全长cDNA序列，对其进行了生物信息分析，通过表达研究对其功能进行初步分析。【结果】青海湖裸鲤eif5b全长cDNA序列为2209 bp，包含1293-bp开放阅读框，编码430个氨基酸。氨基酸序列同源性比较发现，克隆的eif5b与其它脊椎动物的亲缘性相近,同源性为75.7%～95.1%，处于系统进化树上同一分支;eif5b与其邻近基因lipt1的共线性在整个脊椎动物中高度保守。【结论】青海湖裸鲤eif5b表达于脑、垂体、鳃、心脏、脾脏、卵巢、精巢和肾脏，在3、6、9、12、18、24月龄卵巢中均存在表达。     

青海湖裸鲤eif5b基因克隆与初步功能分析

[目的]围绕青海湖裸鲤卵巢中的eif5b基因克隆和功能开展相关研究,为青海湖裸鲤的卵巢发育机制研究提供理论基础数据.[方法]采用RACE和RT-PCR克隆青海湖裸鲤eif5b全长cDNA序列,对其进行生物信息分析,通过表达研究对其功能进行初步分析.[结果]青海湖裸鲤eif5b全长cDNA序列为2 209 bp,包含1 ...     

青海湖裸鲤foxk1基因克隆和初步功能分析

为青海湖裸鲤人工扩繁和分子遗传育种研究提供理论基础，采用RACE和RT-PCR克隆青海湖裸鲤foxk1全长cDNA序列，对其进行生物信息分析和功能分析。结果表明：青海湖裸鲤foxk1全长cDNA序列为2251 bp，包含1944-bp开放阅读框，编码647个氨基酸；克隆的foxk1与其它脊椎动物的氨基酸序列同源性为68.2%～94.4%，亲缘性相近；foxk1与其邻近基因gnal2、sdk1、mmd2的共线性在整个脊椎动物中高度保守；青海湖裸鲤foxk1高表达于垂体和性腺，中量表达于脑，微量表达于鳃和心脏；青海湖裸鲤foxk1在3月和6月卵巢中低表达，在9月及后期卵巢中持续高表达。     

花斑裸鲤GeHSP70基因的克隆及其对重金属Cu2+胁迫的应答

【目的】克隆花斑裸鲤GeHSP70基因,并进行生物信息学分析;研究正常和Cu~(2+)胁迫条件下GeHSP70的表达模式。【方法】采用分子生物学技术克隆花斑裸鲤GeHSP70基因的全长cDNA,分析其生物信息学特征。采用Real-time PCR技术分析正常和0.01mg/L Cu~(2+)胁迫(胁迫0,12,24,48h)条件下GeHSP70mRNA在花斑裸鲤肝脏、肾脏、脑和鳃4个组织中的表达情况,并采用ELISA试剂盒检测肝脏、鳃组织中GeHSP70蛋白的表达水平。【结果】花斑裸鲤GeHSP70序列共1 387bp,由123bp的5′-UTR、592bp的3′-UTR和672bp的编码区构成,编码223个氨基酸;GeHSP70蛋白是疏水性蛋白,分子质量为11.15ku,等电点为5.01,包含2个HSP70家族的特征序列:IDLGTTYS(11-18位氨基酸)和IFDLGGGTFDVSIL(199-212位氨基酸)。GeHSP70基因核苷酸序列与鲫鱼的同源性最高(93%),在系统进化树中与同科或属中鱼种聚合成一个分支,显示出高度保守性。Real-time PCR结果表明,正常条件下花斑裸鲤GeHSP70在鳃组织中的表达量最高,其次是肝脏,在脑和鳃组织中表达量较低;随着0.01mg/L Cu~(2+)胁迫时间的延长,花斑裸鲤肝脏、肾脏和鳃组织的GeHSP70mRNA表达量先升后降,在24h表达量最高,而脑组织的表达量持续升高;GeHSP70在花斑裸鲤肝脏和鳃组织的蛋白水平表达量总体均表现为先升后降,表明Cu~(2+)能够诱导GeHSP70的表达。【结论】成功克隆了花斑裸鲤GeHSP70cDNA全长,在0.01mg/L Cu~(2+)胁迫下花斑裸鲤GeHSP70在mRNA水平和蛋白水平呈规律性应答,表明GeHSP70是潜在的反映水环境质量的生物标志物。     

青海湖裸鲤TNNI1和TNNI2基因克隆及其响应盐碱胁迫的表达研究

【目的】克隆青海湖裸鲤慢收缩骨骼肌型肌钙蛋白I基因(TNNI1)和快收缩骨骼肌型肌钙蛋白I基因(TNNI2),分析其在不同组织及盐碱胁迫环境下皮肤和腹侧肌肉组织中的表达水平,为揭示青海湖裸鲤生长缓慢及恢复青海湖裸鲤鱼类资源提供基础数据。【方法】以青藏高原特有鱼类青海湖裸鲤为研究材料,利用RACE技术克隆TNNI1和TNNI2基因全长cDNA序列,进行氨基酸序列同源性比对;利用实时荧光定量PCR法检测2个基因在青海湖裸鲤鳃、眼、脑、脾脏、肝脏、肠、肾、心、皮肤、腹侧肌肉组织的表达情况,以及盐碱胁迫下腹侧肌肉和皮肤组织中的表达规律。【结果】青海湖裸鲤TNNI1 cDNA序列全长为1 211 bp,其中开放阅读框540 bp,共编码179个氨基酸;TNNI2 cDNA序列全长为737 bp,其中开放阅读框531 bp,共编码176个氨基酸。序列同源性分析发现,青海湖裸鲤TNNI1氨基酸序列与安水金线鲃的同源性高达92.13%,TNNI2氨基酸序列与鲤鱼的同源性最高为92.61%。系统发育树结果显示,从TNNI1氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与金线鲃属鱼类、鲫鱼、鲤鱼的亲缘关系较近;从TNNI2氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与鲤鱼的亲缘关系最近,其次是鲫鱼和金线鲃属鱼类。TNNI1和TNNI2基因在青海湖裸鲤不同组织中均有表达,且在腹侧肌肉中相对表达量最高。盐碱胁迫条件下,TNNI1和TNNI2基因在肌肉组织中的相对表达量均显著下调;在皮肤组织中TNNI1的相对表达量极显著下调（P＜0.01）,而TNNI2极显著上调（P＜0.01）。【结论】成功克隆了青海湖裸鲤TNNI1、TNNI2基因全长;TNNI1、TNNI2基因在腹侧肌肉组织中高表达,表明其与肌肉组织发育密切相关;盐碱胁迫条件下TNNI1、TNNI2基因在腹侧肌肉组织中的表达均显著下调,提示2个基因表达量降低可能是青海湖裸鲤生长缓慢的重要因素。     

青海湖裸鲤的核型研究

采用PHA和秋水仙素体内注射制备青海湖裸(鲤Gymnocypris przewalskii)的染色体。结果表明,青海湖裸鲤染色体由92条染色体组成,按着丝粒位置可分为四组,m组有16对中部着丝粒染色体,sm组有11对亚中部着丝粒染色体,st组有12对染色体,t组有11对染色体,每个染色体均有相应的同源染色体。青海湖裸鲤的2n=92,NF=146,其核型公式为:2n=32m+22sm+24st+14t。结果表明,青海湖裸鲤的核型与其他裸鲤有相似之处。     

不同规格青海湖裸鲤形体特征和肌肉营养成分比较

测定了2种不同规格青海湖裸鲤形体特征和肌肉营养成分指标.结果表明:不同规格青海湖裸鲤各形体指标均存在显著差异,其中大规格鱼体长和肌肉占比显著高于小规格鱼,而大规格鱼的肥满度显著低于小规格鱼.大规格鱼体肌肉水分含量显著高于小规格鱼,粗蛋白含量、总氨基酸和总脂肪酸含量均显著低于小规格鱼.此外,不同规格青海湖裸鲤粗脂肪与粗灰分的含量均无显著差异.综上所述,随着体格的不断增长,青海湖裸鲤的出肉率呈上升趋势,但其营养价值却有所降低,其原因有待进一步研究.     

用灰色理论预测青海湖裸鲤的年产量

应用灰色理论与方法,以1991~1998年青海湖裸鲤Gymnocypris przewalskii przewalskii的年产量统计数据为基础,建立了灰色系统理论GM(1,1)预测模型,用该模型对1999年青海湖裸鲤的年产量进行了预测。结果表明:青海湖裸鲤年产量的时间响应函数模型为x^(0)(k 1)=4974.9670996e-0.232119k,多年平均相对误差为10.33%,后验差比值C=0.248352,小误差频率P=1,模型的预测精度达到一级;1999年青海湖裸鲤年产量的预测值为776.8 t,与实际产量(807 t)的相对误差为3.73%,模型的预测效果比较理想。     

河流中青海湖裸鲤亲鱼的捕捞技术

在入湖河流的沙柳河中围捕青海湖裸鲤亲鱼需用网具长为15 m,网目为44 mm,由绵纶或纶制成的地拉网。在裸鲤最佳产卵季节(5～8月份),进行围捕。网滩应选择在水流较为平缓,河底较为平坦且鱼群较为集中的河段下网,采用垂直岸坡的围捕方法,效果显著。一般需用6人左右能完成作业。