华南小菜蛾田间种群对氯虫苯甲酰胺已产生严重抗性

2009—2011年在广东连州、惠州、佛山、广州和广西柳州、江西信丰等多个华南区主要菜场开展小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗药性监测。结果发现,与室内敏感种群的敏感基线相比(LC50=0.13 mg/L),各监测点在2009年秋季均为敏感水平,2010年秋季部分地区出现敏感性下降和低水平抗性,而2011年春季除了监测到敏感性下降和低水平抗性外,还发现个别监测点产生中等水平抗性,抗性上升趋势明显。随后,在广州增城菜区监测到一例对氯虫苯甲酰胺产生极高水平抗性的小菜蛾田间种群,其当代和F1代虫源的LC50值分别为78.78、59.14 mg/L,抗性倍数分别为606.00和454.92,达极高抗性水平。分析小菜蛾对氯虫苯甲酰胺产生抗药性的关键因素,认为过度依赖该药、随意提高施用剂量、不合理混配、连年连片单一种植模式等可能是有利于抗药性发展的关键因素。     

不同地区小菜蛾对氯虫苯甲酰胺和茚虫威的抗性初报

在十字花科种植较多的浙江省7个地区(常山、慈溪、杭州、金华、丽水、三门、上虞)采用室内浸液法和诊断剂量法进行小菜蛾对氯虫苯甲酰胺和茚虫威的抗药性试验.结果显示,上述地区小菜蛾种群对氯虫苯甲酰胺抗药性水平有一定的差异.金华地区小菜蛾种群对氯虫苯甲酰胺敏感性下降,抗性指数为8.55,其余6个地区的小菜蛾对氯虫苯甲酰胺较为敏感,抗性指数0.42～3.24.小菜蛾对茚虫威的抗药性水平差异较大.其中金华地区小菜蛾对茚虫威的抗性指数68.69,慈溪和常山地区小菜蛾抗性指数分别为25.82和15.17,丽水、杭州、三门和上虞地区小菜蛾种群分别产生了9.74,7.16,5.99和5.73的低抗药性.结果还显示,诊断剂量法可定性判别小菜蛾的抗药性,可用于田间小菜蛾的抗性监测.     

5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂对小菜蛾的防效研究

为探讨5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂对小菜蛾的防效,进行了田间试验,结果表明:5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂对甘蓝小菜蛾有很好的防治效果,其中以5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂1 000倍液防效最佳,药后3、7、10 d的防效分别为99.0%、97.4%、94.9%;5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂1 500倍液防效其次,其药后3、7、10 d的防效分别为95.5%、92.6%、90.4%,明显优于对照农药。5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂可作为吴江市防治小菜蛾的首选药剂。     

氯虫苯甲酰胺对小菜蛾生长发育的亚致死效应研究

采用叶片药膜法,确定氯虫苯甲酰胺对小菜蛾三龄幼虫的亚致死剂量(LC25和LC50),研究其对小菜蛾Plutellaxylastella(L.)生长发育的亚致死效应。结果表明:与空白对照相比,亚致死浓度的氯虫苯甲酰胺处理后,小菜蛾幼虫体重显著降低,蛹期与产卵历期均显著延长,单雌产卵量显著增加,幼虫生长发育历期、羽化率显著降低,孵化率略有下降。在亚致死剂量下,氯虫苯甲酰胺能够提高小菜蛾种群的发育速率和繁殖力,这对协调田间的化学防治和生物防治、制定小菜蛾综合防治策略的有积极意义。     

氯虫苯甲酰胺对广东小菜蛾杀虫活性和田间药效评价

氯虫苯甲酰胺悬浮剂对广东小菜蛾室内毒力测定结果LC50为0.81mg/L;持效期测定结果为药后21d死亡率64.38%,田间药效结果显示,药后7d防效达93.95%。复配制剂乳油的室内毒力测定结果为LC50=0.71mg/L;持效期测定结果为药后21d死亡率49.21%,田间药效结果显示,药后7d防效达98.63%。     

P450基因在氯虫苯甲酰胺不同抗性品系小菜蛾中的表达及功能分析

【目的】以十字花科蔬菜害虫小菜蛾（Plutella xylostella）为研究对象,筛选参与小菜蛾代谢氯虫苯甲酰胺的主要细胞色素P450解毒基因,为阐明不同抗性水平小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗性机理提供依据。【方法】利用叶片药膜法测定不同小菜蛾种群3龄幼虫对氯虫苯甲酰的抗性水平,通过转录组测序、insectbase数据库和小菜蛾基因组数据库筛选得到52个细胞色素P450基因。应用MEGA5.10软件对52个细胞色素P450基因进行进化分析,获得与抗药性密切相关的CYP3和CYP4家族P450基因。利用实时荧光定量PCR方法分析目的基因在小菜蛾室内筛选种群（HZY）和田间抗性种群惠州种群（HZ）、连州种群（LZ）、东升种群（DS）、钟落潭种群（ZLT）中的表达量,选用RNA干扰技术,采用注射法,验证在抗性种群中显著上调表达的CYP6BF1V4在小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺中的功能。【结果】抗药性测定结果表明,LZ和HZ小菜蛾种群为中等水平抗性,ZLT、DS和HZY小菜蛾种群为高水平抗性。对52个细胞色素P450基因的系统发育树分析发现,小菜蛾拥有10个CYP4家族基因,28个CYP3家族基因,其中2个CYP4家族基因在HZ和HZY种群中的表达量显著高于敏感种群,4个CYP3家族基因表达量与小菜蛾抗性呈正相关,8个基因在中等水平抗性小菜蛾体内的表达量高于在高水平抗性小菜蛾体内的表达量。对田间种群进一步筛选得到6个与小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺密切相关,在不同抗性种群中均上调表达的细胞色素P450基因,其中4个为CYP6家族基因（CYP6BF1V4、CYP6BF1V3、CYP6f1和CYP6B6）,2个为CYP9家族基因（CYP9G2.1和CYP9G2.2）,以CYP6BF1V4的表达量最高,其在抗性种群中的表达量是在敏感种群中表达量的3.5—6.3倍。RNA干扰结果显示,沉默CYP6BF1V4能够显著提高小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的敏感性。【结论】CYP6BF1V4、CYP6BF1V3、CYP6f1、CYP6B6、CYP9G2.1和CYP9G2.2可能在小菜蛾体内协同调控多功能氧化酶的表达,从而加快小菜蛾代谢氯虫苯甲酰胺的速度,提高小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗性。     

氯虫苯甲酰胺和甲维盐对甘蓝小菜蛾三种不同生测方法的研究

比较喷雾法、夹毒叶片法和点滴法用于测定氯虫苯甲酰胺和甲维盐对甘蓝小菜蛾的室内生物活性的差异。结果表明,喷雾法操作简便易行,但误差较大;夹毒叶片法用药量少、结果可信度高,但准备过程较长;点滴法对操作者要求较高,结果较为准确。氯虫苯甲酰胺对小菜蛾的速效性不如甲维盐,而持效性好于甲维盐。     

抗性和敏感小菜蛾谷胱甘肽-S-转移酶和谷胱甘肽的比较

研究了抗性和敏感小菜蛾谷胱甘肽 - S-转移酶 ( GSTs)在不同发育期的变化及有机磷类杀虫剂对虫体谷胱甘肽 ( GSH)质量摩尔浓度的影响 .结果表明 :抗性和敏感小菜蛾 GSTs比活力在各发育期中变化不大 ,但虫体 GSTs总活力随虫体生长发育而显著增加 ,在 4龄和蛹期达到最大值 .抗性小菜蛾 GSTs活力明显高于敏感小菜蛾 .甲胺磷和水胺硫磷对敏感小菜蛾幼虫 GSH影响不明显 ,但可导致抗性小菜蛾 GSH质量摩尔浓度的显著降低 .因此可以认为 ,GSTs活力增高和 GSH的结合作用应是小菜蛾对有机磷类杀虫剂抗性的重要机制 .     

溴虫腈对小菜蛾幼虫解毒酶的影响

为深入研究小菜蛾对溴虫腈抗性发展机制,采用浸叶法研究溴虫腈对小菜蛾3龄幼虫解毒酶系(多功能氧化酶MFO、酯酶EST和谷胱甘肽S-转移酶GST)活性的影响。结果表明:用溴虫腈处理小菜蛾3龄幼虫48h的致死中质量浓度(LC50)为1.281mg/L;用溴虫腈LC50剂量处理小菜蛾3龄幼虫一定时间后,处理组EST酶活力显著高于对照组,并且随着处理时间的延长,解毒酶活性逐渐升高并保持在较高的水平;MFO酶活力在处理初期就被溴虫腈极显著诱导,但随着处理时间的推移,处理组的MFO酶活力与对照相比差异不显著;而GST酶在处理后则没有被激活。由此可见,溴虫腈处理后能有效的干扰EST和MFO的活性,说明这2种解毒酶可能参与小菜蛾对溴虫腈的代谢过程。     

人胎盘谷胱甘肽S-转移酶的快速分离纯化

将人胎盘组织粗匀浆、超速离心、GSH-Sepharose6B亲和纯化,再经DEAE52纤维素离子交换层析,分离纯化了人胎盘谷胱甘肽S-转移酶(GST-π).纯化的酶比活力为66.94 μmol*min-1*mg-1,纯化倍数为515倍,人GST-π的最适pH值为7.5;冷冻干燥后,在-20℃可保存1年.体外实验表明,酶在37℃保温90 min,酶活性下降80%.     

Biochemical Mechanism of Chlorantraniliprole Resistance in the Diamondback Moth,Plutella xylostella Linnaeus

The insecticide chlorantraniliprole exhibits good efifcacy and plays an important role in controlling the diamondback moth, Plutella xylostella Linnaeus. However, resistance to chlorantraniliprole has been observed recently in some ifeld populations. At present study, diamondback moths with resistance to chlorantraniliprole （resistant ratio （RR） was 82.18） for biochemical assays were selected. The assays were performed to determine potential resistance mechanisms. The results showed that the selected resistant moths （GDLZ-R） and susceptible moth could be synergized by known metabolic inhibitors such as piperonyl butoxide （PBO）, triphenyl phosphate （TPP） and diethyl-maleate （DEM） at different levels （1.68-5.50-fold and 2.20-2.89-fold, respectively）, and DEM showed the maximum synergism in both strains. In enzymes assays, a high level of glutathione-S-transferase （GST） was observed in the resistant moth, in contrast, moths that are susceptible to the insecticide had only 1/3 the GST activity of the resistant moths. The analysis of short-term exposure of chlorantraniliprole on biochemical response in the resistant strain also showed that GST activity was signiifcantly elevated after exposure to a sub-lethal concentration of chlorantraniliprole （about 1/3 LC50, 12 mg L-1） 12 and 24 h, respectively. The results show that there is a strong correlation between the enzyme activity and resistance, and GST is likely the main detoxiifcation mechanism responsible for resistance to chlorantraniliprole in P. xylostella L., cytochrome P450 monooxygenase （P450） and carboxy-lesterase （CarE） are involved in to some extent.     

小菜蛾抗药性研究及其治理

小菜蛾是一种世界性十字花科蔬菜害虫，巳报道小菜蛾对50多种杀虫剂产生抗药性，包括有机氯、有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯类、昆虫生长调节剂及苏云金杆菌（Bt）类等杀虫剂。本全面阐述了国内外小菜蛾抗药性研究概况，包括小菜蛾抗性发展、交互抗性、抗性稳定性、抗性机理及抗性遗传等方面的研究，并对小菜蛾抗药性的治理策略进行讨论。     

田间小菜蛾对9种杀虫剂的抗药性测定

在室内采用浸叶法测定湖南3个蔬菜产区(长沙市长沙县、株洲市茶陵县和永州市祁阳县)的田间小菜蛾对9种药剂的抗药性。试验结果表明,小菜蛾对高效氯氰菊酯抗性达到极高水,对定虫隆、阿维菌素和茚虫威抗性属于高抗水平,对溴虫腈,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和多杀菌素属于中抗水平,对氯虫苯甲酰胺和苏云金杆菌相对敏感。因此,这3个地区的小菜蛾防治应该减少溴虫腈、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和多杀菌素的使用,交替使用氯虫苯甲酰胺和苏云金杆菌,停止阿维菌素、茚虫威、高效氯氟氰菊酯的使用,以便延缓抗药性的产生与发展。     

防治小菜蛾混配剂的筛选与联合毒力测定

测定了乐斯本、氯氰菊酯、菜喜、敌敌畏、安打、锐劲特和阿维菌素7种单剂及其混配剂对小菜蛾3龄幼虫的毒力。结果表明,阿维菌素与锐劲特、安打与氯氰菊酯混配,以及部分混配剂的个别配比表现出拮抗作用;安打与敌敌畏、菜喜与敌敌畏以及菜喜与氯氰菊酯、敌敌畏与氯氰菊酯、安打与菜喜的部分配比有增效作用,最佳配比分别为1∶10、1∶10、1∶10、2∶1和1∶4,其共毒系数分别为2147.13、23501.07、519.48、21228.89和281.14。     

不同种群小菜蛾乙酰胆碱酯酶性质研究

小菜蛾乙酰胆碱酯酶的性质研究表明，小菜蛾各种群成虫与幼虫AChE活性相比，差异极显，成虫是幼虫的5～7倍；武汉种群小菜蛾成虫和幼虫AChE与底物的亲和力最小．小菜蛾谷胱甘肽-S-转移酶的性质研究表明，宣化、武汉、云南3个田间种群GST活性较高，明显高于台湾敏感品系；北京种群GST活性较低，与台湾敏感品系近似。     

Biochemical Mechanism of Chlorantraniliprole Resistance in the Diamondback Moth,Plutella xylostella Linnaeus

The insecticide chlorantraniliprole exhibits good efficacy and plays an important role in controlling the diamondback moth, Plutella xylostella Linnaeus. However, resistance to chlorantraniliprole has been observed recently in some field populations. At present study, diamondback moths with resistance to chlorantraniliprole (resistant ratio (RR) was 82.18) for biochemical assays were selected. The assays were performed to determine potential resistance mechanisms. The results showed that the selected resistant moths (GDLZ-R) and susceptible moth could be synergized by known metabolic inhibitors such as piperonyl butoxide (PBO), triphenyl phosphate (TPP) and diethyl-maleate (DEM) at different levels (1.68–5.50-fold and 2.20–2.89-fold, respectively), and DEM showed the maximum synergism in both strains. In enzymes assays, a high level of glutathione-S-transferase (GST) was observed in the resistant moth, in contrast, moths that are susceptible to the insecticide had only 1/3 the GST activity of the resistant moths. The analysis of short-term exposure of chlorantraniliprole on biochemical response in the resistant strain also showed that GST activity was significantly elevated after exposure to a sub-lethal concentration of chlorantraniliprole (about 1/3 LC₅₀, 12 mg L⁻¹) 12 and 24 h, respectively. The results show that there is a strong correlation between the enzyme activity and resistance, and GST is likely the main detoxification mechanism responsible for resistance to chlorantraniliprole in P. xylostella L., cytochrome P450 monooxygenase (P450) and carboxy-lesterase (CarE) are involved in to some extent.     

贵阳地区小菜蛾种群对15种杀虫剂的敏感性测定

[目的]分析贵阳地区小菜蛾种群对15种杀虫剂的抗性水平,为小菜蛾的防控提供理论依据.[方法]在室内采用浸叶法测定田间甘蓝地小菜蛾种群和敏感种群3龄幼虫对15种杀虫剂的敏感性.[结果]贵阳地区田间小菜蛾种群除对氯虫苯甲酰胺、氰氟虫腙、氟虫双酰胺、乙基多杀菌素和藜芦碱仍处于敏感(抗性倍数小于3.0倍)状态外,对其他10种杀虫剂均产生了不同程度的抗药性,其中对高效氯氟氰菊酯和辛硫磷的抗性倍数最高,分别为352.1005和164.0557倍,达极高抗水平.[结论]氯虫苯甲酰胺可作为贵阳地区防治小菜蛾的首选药剂,其次为氟虫双酰胺、乙基多杀菌素和氰氟虫腙,藜芦碱对其毒力一般,建议尽量少用或与其他药剂混配使用.