甘蔗尾中乳酸菌的分离筛选和鉴定

该研究利用传统培养法从0–90 d打包青贮发酵的甘蔗(Saccharum sinense)尾中分离得到20株乳酸菌。通过形态学观察、API 50 CH生化试剂盒鉴定及16S rDNA基因序列分析法对分离纯化的菌株进行鉴定,并测定其产酸能力。结果显示,菌株Y42是干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),菌株Y32、Y59是副干酪乳杆菌(L. paracasei),其余的17株是植物乳酸杆菌(L. plantarum);分离的20株菌株在培养18 h后,菌株发酵液的pH可降低至3.70以下,Y67菌株的pH最低,为3.57。从甘蔗尾中分离的20株乳酸菌产酸能力均较强,具备良好的青贮潜力,可作为制备青贮饲料发酵剂的菌种。     

高抗菌活性乳酸菌的筛选及菌种鉴定

研究旨在筛选适用于饲料青贮的高抗菌活性乳酸菌,并进行菌种鉴定。以藤黄微球菌、沙门氏菌、大肠杆菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从玉米、水稻、蔬菜残渣、猪粪、鸡粪等样品中分离出的121株乳酸菌进行抑菌试验。通过生理生化,碳源发酵试验和16S rRNA分子鉴定及recA基因扩增对所选菌株进行鉴定。菌株ZZU 575具有较强抗菌活性,排除酸、过氧化氢干扰后,其发酵上清液对大肠杆菌抑制作用消失,但对藤黄微球菌及沙门氏菌仍有很强的抑制活性;其抑菌活性在酸性条件下较强,在加入蛋白酶K和胰蛋白酶以及100℃以上热处理时明显下降甚至消失;ZZU 575被鉴定为植物乳杆菌。菌株ZZU 575在饲料青贮中具有潜在应用价值。     

生物添加剂对全株玉米青贮饲料中黄曲霉毒素的影响

黄曲霉毒素具有强烈的致畸、致突变性,对动物产品及人类危害极大。试验以乳酸菌、纤维素酶、乳酸菌+纤维素酶处理的全株玉米青贮料为材料,并设置对照,分析讨论3种添加剂处理方式对青贮饲料贮存过程中黄曲霉毒素含量的影响。试验首先通过pH测定判断出青贮料打开霉变的取样时间为青贮料打开后的第10天。结果表明:全株玉米原料中未检出黄曲霉毒素;全株玉米打开当天,对照组黄曲霉毒素显著高于纤维素酶处理组,而乳酸菌和乳酸菌+纤维素酶处理的青贮料均未检出黄曲霉毒素;青贮料打开后第10天,对照组霉菌毒素含量显著高于乳酸菌处理组和纤维素酶处理组,而且乳酸菌+纤维素酶处理组中仍未检出黄曲霉毒素含量。该试验表明,添加乳酸菌和纤维素酶对青贮饲料中黄曲霉毒素的产生存在抑制作用,且二者同时添加时效果最好。     

海兰褐蛋鸡盲肠中乳酸菌的分离与鉴定

试验旨在从海兰褐蛋鸡盲肠食糜中分离筛选优质乳酸菌。试验采集健康的海兰褐蛋鸡盲肠食糜,将内容物置于无菌生理盐水中,过滤后倍比稀释,采用平板划线分离法进行划线分离,反复提纯,选择疑似菌株,对其进行菌落形态观测、通过革兰氏染色镜检、16S rDNA基因序列分析鉴定,绘制24 h生长、产酸曲线。结果显示,在蛋鸡盲肠食糜中分离出两株菌,分别为唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）和敏捷乳杆菌（Lactobacillus agilis strain）,命名为JZ1和JZ2。两株菌均在10 h达到生长平台期,培养24 h后JZ1的pH值约为4.2,JZ2的pH值约为5.3。研究表明,JZ1具有生长速度快和产酸能力强的优势,耐酸（pH值3.0）、耐高温（45℃）、耐低温（15℃）和耐盐（6.5%NaCl）能力优于JZ2,更适合作为畜牧养殖中的优质菌源。     

牦牛肠道与粪便乳酸菌的分离鉴定及PCR-16SrDNA鉴定

以取自四川省不同地区的牦牛粪便、肠道内空物为材料，用MRS琼脂双层培养基进行厌氧培养，分离到50株乳酸菌，经生化鉴定为嗜热链球菌（2株）、乳酸乳球菌（1株）、保加利亚乳杆菌（5株）、嗜粪乳杆菌（10株）、嗜酸乳杆菌（8株）、乳酸乳杆菌（9株）、肠乳杆菌（10株）、弯曲乳杆菌（5株）。采用乳酸菌16 SrDNA通用引物，对分离的8种菌的16S rDNA-段可变区序列进行扩增，均得到大小约470bp的产物；扩增产物经纯化、测序后与GenBank中标准菌株的核甘酸序列比较，同源性均大于97．5％，同源性分析与生化试验的结果是一致的。证实，牦牛肠道和粪便的乳酸菌较为丰富，且乳杆菌的数量较多，这可能与牦牛复杂的生长环境有关。     

禽用乳酸菌SR1的分离鉴定

采用添加碳酸钙的MRS培养基分离乳酸菌,从自然样品中分离到1株禽用乳酸菌.采用形态学鉴定、生理生化特性试验及16S rDNA序列分析,对筛选到的乳酸菌SR1进行菌种鉴定.结果 表明,乳酸菌SR1属于乳酸片球菌.     

不同复合乳酸菌组合菌株对全株玉米青贮品质的影响

本试验研究二次发酵菌、植物乳杆菌和粪肠球菌3个菌种组合体对青贮发酵的作用。采用单因素试验设计,共计3个处理,每个处理15个重复,各处理为:处理1:玉米青贮中添加抑制二次发酵菌(5×102cfu/g)+植物乳杆菌(5×102cfu/g)(B+L组);处理2:玉米青贮中添加抑制二次发酵菌(5×102cfu/g)+粪肠球菌(5×102cfu/g)(B+F组);处理3:玉米青贮中添加植物乳杆菌(5×102cfu/g)+粪肠球菌(5×102cfu/g)(L+F组)。组合菌株接种后青贮料的pH和乳酸菌数量分别在装填后第0、4、6、9、10、30及60d取样检测。结果表明:乳酸菌数量变化特点为各处理组的乳酸菌数量在6～10d到达增值高峰;在10～60d,B+L组数量最先下降,其次B+F组、L+F组。在此过程中,乳酸菌数量依次为B+L组﹤B+F组﹤L+F组。青贮饲料中酸度变化特点是,各处理组的pH在4～60d,pH由低到高的顺序为:B+L组﹤B+F组﹤L+F组(P<0.05)。在青贮的第30、60d,各处理组乳酸含量差异显著(P<0.05),含量顺序分别为:B+L组﹥L+F组﹥B+F组(P<0.05),B+L组﹥B+F组﹥L+F组(P<0.05)。在青贮的第30、60d,各处理组乙酸含量差异显著(P<0.05),含量顺序分别为:B+L组﹥L+F组﹥B+F组(P<0.05),L+F组﹥B+L组﹥B+F组(P<0.05)。青贮饲料中营养物质含量特点是,各组NH3-N含量随着青贮时间的延长而逐渐增加,L+F组﹤B+F组﹤B+L组,差异显著(P<0.05);各组WSC的含量随着青贮时间的延长逐渐降低,B+L组﹥B+F组﹥L+F组,差异显著(P<0.05)。NDF含量B+L组﹤B+F组﹤L+F组。以上结果表明,由B+L组合处理青贮物料可以得到较好的青贮品质,是试验中3个组合的最优选择。     

乳酸菌添加剂对全株玉米和苜蓿青贮品质的影响

本试验以全株玉米和苜蓿为研究材料,通过对其发酵品质和化学成分的分析,探讨添加LaLSIL Dry(LD)、H/M FINOCULANT(H/M F)和FAST-SILE(FS)三种乳酸菌添加剂对全株玉米青贮和苜蓿青贮品质的影响.研究结果表明:全株玉米可以单独调制出优质青贮料,添加乳酸菌制剂可以提高全株玉米青贮乳酸含量并降低乙酸含量;乳酸菌添加剂可明显降低苜蓿青贮的pH值,丁酸和氨态氮含量;乳酸菌添加剂可以进一步改善全株玉米青贮和苜蓿青贮品质.     

海南天然饲草青贮饲料中乳酸菌分离鉴定及优良菌株筛选

为筛选适合热带牧草的高温发酵优良乳酸菌,改善青贮发酵品质,本试验从海南岛不同气候区采集野生草本植物斑茅(Saccharum arundinaceum)、蔓生莠竹(Microstegium vagans)和木本植物银合欢(Leucaena leucocephala)、构树(Broussonetia papyrifera),青贮60 d后分离纯化乳酸菌,以培养36 h条件下最终发酵液pH≤4且OD(Optical density,吸光度)≥2作为条件初筛乳酸菌。用温度T=40℃,45℃,50℃和pH=3.0,3.5,4.0,6.0,8.0,9.0进行复筛,选取OD值较高的菌株作为优势菌株,再对其进行16S rDNA序列分析、生长和产酸速率测定以及生理生化实验。结果表明,本试验共分离到98株天然乳酸菌,经筛选得到4株优良乳酸菌(15B,10D,13C,14B)。经鉴定,10D,13C,14B为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),15B为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)。菌株15B,10D,13C,14B均耐酸、耐高温、且生长及产酸性能优良,具有良好的青贮潜力并对致病菌具有良好的抑制作用,可作为热带地区制备青贮添加剂的备选菌种。     

高寒地区菊芋青贮物料耐低温乳酸菌的筛选与鉴定

为筛选可提升高寒地区菊芋(Helianthus tuberosus)青贮发酵品质的耐低温乳酸菌,本研究以‘青芋2号’菊芋青贮物料为材料,利用平板培养法分离乳酸菌株,分析菌株生理生化特性,并通过16S rRNA测序进行菌株种属鉴定。结果表明,菊芋青贮物料中共分离得到34株乳酸菌株,经低温及生理生化筛选获得13株耐低温乳酸菌株,包括11株同型发酵乳酸菌和2株异型发酵乳酸菌,其耐酸性和耐盐性均较强;经产酸和生长能力对比,GN02菌株生长最快(OD=2.63),GN10菌株具有更强的产酸能力(pH=3.59),XN25菌株兼具较强的生长和产酸能力;16S rRNA测序鉴定出9株植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)、1株戊糖乳杆菌(Lactiplantibacillus pentosus)、1株棒状乳杆菌(Lactiplantibacillus coryniformis)、1株短乳杆菌(Lactiplantibacillus brevis)及1株无法鉴定。本研究筛选出适合高寒地区菊芋青贮发酵的耐低温植物乳杆菌、戊糖乳杆菌、短乳杆菌各1株。     

羊瘤胃乳酸菌的分离鉴定及抗逆性筛选

为开发羊源乳酸菌菌种资源,从健康成年散养山羊瘤胃内容物中分离乳酸菌,经生化试验、基因测序以及同源性分析、构建遗传进化树等方法对分离出的乳酸菌进行鉴定,并通过耐酸和耐胆盐试验筛选抗逆性良好的乳酸菌.结果表明:从散养山羊瘤胃内容物中分离出11株乳酸菌,将其编号为R1～R9、R11和R12;其中R1、R2为杜氏肠球菌,R3、...     

新疆乌鲁木齐传统酸奶中乳酸菌的多样性分析

本研究对新疆乌鲁木齐传统酸奶中乳酸菌进行分离鉴定,通过传统生理生化鉴定结合16S rDNA序列同源性分析,从6份样品中共分离出14种乳酸菌。乳杆菌属有干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、发酵乳杆菌、格氏乳杆菌、弯曲乳杆菌;肠球菌属有屎肠球菌、坚强肠球菌、肠道肠球菌、乳酸肠球菌;链球菌属有嗜热链球菌和黄连链球菌。     

乳酸菌与免疫调节作用

乳酸菌是人消化道区域主要的微生物菌群,并作为益生菌应用于发酵食品,特别是乳制品的生产中,膳食中提供活性乳酸菌可以防止多种疾病的发生。乳酸菌在免疫调节,保持消化道微生物菌群平衡,保护消化道感染等方面起着重要作用。本文简要介绍肠道免疫系统,乳酸菌免疫调节在抗炎、抗感染、抗肿瘤中发挥重要作用,以及免疫调节功能特性评价方法。     

青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定

试验从12种不同来源的青贮饲料中分离到25株乳酸菌,依据伯杰氏系统细菌学手册的标准和描述,把25株乳酸菌都鉴定到了属的水平,有17株乳酸菌鉴定到种的水平,其中:玉米乳杆菌2株、布氏乳杆菌4株、短乳杆菌4株、戊糖乳杆菌3株、干酪乳杆菌1株、粪肠球菌1株、坚强肠球菌2株。其余的8株乳酸菌根据本研究的结果还无法确定其种的归属。测定同时已鉴定的17株乳酸菌的产酸速率,结果发现,Sld2-1、Ssd3、Shw3-7和Ssm3-1都表现出较强的产酸能力。     

添加尿素和乳酸菌制剂对玉米秸秆青贮料品质的影响

我国玉米秸秆资源丰富,由于饲用品质差,而饲用开发利用不足。为了研究尿素、乳酸菌制剂(青宝2号)对玉米秸秆青贮饲料品质的影响,试验分别设置添加尿素(3kg/t或6kg/t)、青宝2号(2.5g/t)和青宝2号+尿素(3kg/t+2.5g/t或6kg/t+2.5g/t)5个处理,青贮发酵60d后取样分析。结果表明:玉米秸秆直接青贮,发酵品质较好,但粗蛋白含量较低。尿素(3kg/t或6kg/t)能够显著提高玉米秸青贮饲料的粗蛋白含量(P<0.05),乳酸菌制剂(2.5g/t)并没有明显改善玉米秸秆青贮饲料的发酵品质,与单独添加尿素(3kg/t或6kg/t)相比较,尿素和乳酸菌制剂一起添加(3kg/t+2.5g/t或6kg/t+2.5g/t)并没有进一步改善玉米秸秆青贮饲料发酵品质。     

水稻秸秆青贮饲料中可培养微生物多样性分析及优势乳酸菌的分离鉴定

为探究影响水稻（Oryza sativa L.）秸秆青贮质量的腐败菌种类并筛选适合其青贮的优质乳酸菌,研究了青贮前后水稻秸秆中可培养微生物的变化并分离鉴定2株乳酸菌。使用稀释平板涂布法将青贮前后可培养微生物计数并分离纯化,限制性酶切分析ARDRA技术分析分离纯化后的微生物多样性,结合ARDRA和RAPD-PCR技术对青贮中优势乳酸菌进行分离鉴定。结果表明：青贮前后好氧或兼性厌氧细菌菌落总数由7.6×10⁷ cfu·g^-1下降到2.43×10⁶ cfu·g^-1,真菌菌落数变化较为明显,从4.43×10⁵ cfu·g^-1下降到86 cfu·g^-1,乳酸菌菌落数从4.16×10⁵ cfu·g^-1上升到6.61×10⁶ cfu·g^-1。ARDRA聚类分析及16SrDNA测序显示青贮前存在腐败细菌芽孢杆菌（Bacillus）和致病菌阴沟肠杆菌（Enterobacter）,青贮后腐败细菌主要是芽孢杆菌,腐败真菌主要为青霉菌属（Penicillium）。筛选出的2株乳酸菌分别属于乳杆菌属（Lactobacillus casei）和片球菌属（Pediococcus ethanolidurans）,需进一步验证是否可作为青贮饲料添加剂。水稻秸秆青贮后依然有腐败菌的存在,需进一步提高其青贮发酵工艺,防治有氧恶化。     

青贮饲料中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株筛选

为研究青贮饲料中乳酸菌的分类及形态学与生理生化特性,从苜蓿(Medicago sativa L.)及玉米(Zea maysL.)青贮饲料中分离得到5株乳酸菌。经16S rRNA序列分析,2株(GI7,GI24)为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici),其余3株(GI11,GI44,GI62)分别为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);5株菌均为同型发酵乳酸菌,除弯曲乳杆菌GI44在pH3.0,4.0,8.0等条件下不能生长外,其余菌株均可在5,10,40,45℃等不同温度条件下、pH3.0~8.0等环境下以及3.0%和6.5%NaCl溶液中良好生长或微弱生长。同时,通过产酸速率和生长曲线等指标筛选出产酸较快、生长迅速的GI62可作为制备乳酸菌青贮饲料添加剂的优良菌株。     

添加乳酸菌对开窖后玉米青贮品质及有氧稳定性的影响

玉米青贮时,设计4个添加乳酸菌处理:CK处理(不加任何菌剂);T处理(同型发酵乳酸菌);Y处理(异型发酵乳酸菌);TY处理(同型+异型发酵乳酸菌)。以60d为发酵期,检测各处理开窖后第0、48、96、144、192、240h品质变化及有氧稳定性。结果表明Y处理水溶性碳水化合物含量始终显著高于其余处理(P<0.05),Y和TY处理的有氧稳定性显著高于CK和T处理(P<0.05),分别达到195.58h和196.21h,且乙酸含量始终显著高于CK和T处理(P<0.05)。T处理pH值始终显著低于其余处理(P<0.05),且乳酸含量始终显著高于CK和Y处理(P<0.05)。综合评价排序:Y处理>TY处理>T处理>CK处理。因此,玉米青贮时单一添加异型乳酸菌,在改善青贮品质、提高开窖后有氧稳定性方面均优于在玉米青贮中单一添加同型或复合添加乳酸菌。     

Screening of Pychrotrophic Lactic Acid Bacteria from Changbai Mountain Soil

The purpose of the experiment was to screen psychrotrophic lactic acid bacteria with strong stress-resistant growth ability,acid production ability and good bacteriostatic characteristics in vitro,and analyze its related biological characteristics,so as to provide excellent psychrotrophic lactic acid bacteria resources for low temperature silage in Northeast China.The culture condition of 10 ℃ was used to screen the psychrotrophic lactic acid bacteria.After the determination of the growth characteristics of Lactobacillus under different pH,temperature and salinity conditions,the species identification of the candidate strains was carried out,and the growth curve,acid production curve,acid and bile salt resistance,bacteriostatic performance and feeding test of mice were conducted for the candidate strains.The results showed that 11 strains of psychrotrophic lactic acid bacteria could grow well at 10 ℃.The strains C37,C34 and C4212 were identified as Lactobacillus plantarum by 16S rRNA sequencing analysis.The pH of C37,C34 and C4212 decreased to below 4.25 after 7 days of culture.In addition,C37,C34 and C4212 could grow well at 4 ℃,45 ℃,pH 3.0 and 6.5% NaCl.The analysis of growth curve showed that the three strains of Lactobacillus all had a fast growth rate,entered the logarithmic growth period at 4 h,and entered the stable growth period in 10-12 h after inoculation.In the aspect of acid production rate,C37,C34 and C4212 could reduce pH below 4.04 at 24 h of culture.At pH 3.0,C37 and C4212 had a high survival rate,they all had a certain tolerance to 0.5% bile salt,and the survival rate was more than 80%.C37,C34 and C4212 had inhibitory effect on enterotoxin producing Escherichia coli,Salmonella Typhimurium,Staphylococcus aureus and Salmonella Enteritis,and the animal test of three Lactobacillus plantarum were safe.Based on the results of this experiment,Lactobacillus C37,C34 and C4212 were screened and identified from the forest soil of Changbai Mountain,which could provide excellent lactic acid bacteria resources for low temperature silage in winter in Northeast China.