氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因在动物源大肠杆菌中的检测

为了解郑州地区氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA)在健康动物大肠杆菌中的流行情况,对2009年在郑州地区鸡、犬、猪的肛门拭子中分离保存的231株大肠杆菌进行了药敏试验,并分别设计特异性引物对其进行16S rRNA甲基化酶基因的聚合酶链式反应扩增。结果显示:在6种基因中,鸡、犬源大肠杆菌可检测到armA和rmtB,而猪源大肠杆菌仅检测出rmtB。鸡、犬源大肠杆菌armA的检测率分别为7.6%和3.3%;鸡、犬、猪源大肠杆菌rmtB的检出率分别为47.8%、20.0%和0.9%。其中,鸡、犬中分别有3.3%的大肠杆菌可同时检测到armA和rmtB。     

春秋两季不同地区猪源耐药大肠杆菌β-内酰胺酶及16SrRNA甲基化酶基因检测及分析

为了解新疆春秋两季不同地区耐药猪源大肠杆菌携带β-内酰胺酶和16S rRNA甲基化酶基因及其共存情况。通过PCR方法对克拉玛依地区142株春季猪源耐药菌、9株克拉玛依秋季猪源耐药菌、78株昌吉地区春季猪源耐药菌和52株昌吉地区秋季猪源耐药菌进行β-内酰胺酶(blaTEM、blaCMY-2、blaLAP-1、blaKPC、blaSHV和blaOXA)和16S rRNA甲基化酶(arm A和rmt B)基因检测,并对检出耐药基因的PCR产物进行测序。结果显示:克拉玛依春季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM(142/142,100%)、blaOXA(16/142,11.3%)、blaCMY-2(7/142,4.9%)和blaLAP-1(1/142,0.7%);克拉玛依秋季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶为blaTEM(9/9,100%)和blaOXA(1/9,11.1%),克拉玛依春秋两季猪源耐药菌均未检测出16S rRNA甲基化酶基因;昌吉地区春季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM(78/78,100%)、blaOXA(9/78,11.5%)、blaCMY-2(3/78,3.8%)和16S rRNA甲基化酶基因rmt B(1/78,1.3%);昌吉地区秋季猪源耐药菌携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM(52/52,100%)、blaOXA(4/52,7.7%)、blaCMY-2(3/52,5.8%)和blaSHV(1/52,1.9%),未检测出16S rRNA甲基化酶基因。上述结果表明春秋两季不同地区猪源大肠杆菌blaTEM检出率均为100%;其次不同地区春季猪源大肠杆菌对blaOXA检出率均高于秋季猪源大肠杆菌。产生β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因是猪源菌对β-内酰胺类及氨基糖苷类抗菌药物耐药的主要原因之一,养殖场应合理使用抗菌药物,加强对产生β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因的监控。     

1株猪源阴沟肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性研究

为研究猪源阴沟肠杆菌的生物学特征及药物敏感性,从临床病死猪病料中分离到1株优势细菌,经革兰染色、镜检、MALDI-TOF鉴定、16S rRNA序列分析,确定分离菌株为阴沟肠杆菌。对分离菌株进行小鼠感染试验,结果显示,分离的猪源阴沟肠杆菌对小鼠的半数致死量(LD₅₀)为1.4×10⁸ CFU。药物敏感性试验结果表明,分离的猪源阴沟肠杆菌对阿米卡星、大观霉素、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素、多黏菌素B敏感;对头孢他啶、头孢曲松、氨苄西林、青霉素、氟苯尼考、四环素、磺胺、复方新诺明、美罗培南、替加环素、利奈唑胺耐药。综上,分离获得1株猪源阴沟肠杆菌,且耐药性较强。     

鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶检测

为了解河南地区鸡源大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶的流行情况,对2005～2008年在河南地区病鸡的病料中分离保存的429株大肠杆菌进行药敏试验,并分别设计特异性引物对其进行16S rRNA甲基化酶基因的聚合酶链式反应扩增.检测结果显示,在6种氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因中,仅检测出ArmA和RmtB,检出率分别为20.7%(89/429)和23.3%(100/429).且随时间的推移,ArmA和RmtB的出现几乎是逐年增高.提示河南地区鸡大肠杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶产生率较高,且以ArmA和RmtB为主.     

线粒体DNA12SrRNA、16SrRNA研究进展

动物线粒体DNA是共价闭合的环状双链DNA,在真核生物具有高保守性,使其成为了研究物种进化的一种常用的标记,并为线粒体起源提供了有价值的线索.通过动物线粒体DNA从分子水平上研究类群的系统关系,获得种群遗传多态性的资料及建立种群遗传标记,对类群系统关系研究有重要意义.     

肠杆菌的耐药酶检测及分析

目的:研究临床分离的肠杆菌产酶耐药情况,以指导临床合理用药.方法:按全国临床操作规程进行菌株分离鉴定,以Nifrocefin法检测β-内酰胺酶,用三维试验法与K-B法进行酶型分析与药敏试验.结果:本组197株肠杆菌产β-内酰胺酶54株,阳性率27.4%,其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)占88.9%, 头孢菌素酶(AmpC)占9.3%,同时产ESBLS和AmpC(即产超超广谱β内酰胺酶,SSBL)占1.8%,金属β-内酰胺酶未检出.对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒服巴坦耐药率分别为19.8%、17.3%、10.2%,对头孢吡肟耐药率为6.1%,对阿米卡星耐药率为20.8%,而对亚胺培南敏感未检出产酶耐药株.结论:肠杆菌的耐药菌株以产ESBLS为主,对肠杆菌感染的治疗应选用头孢吡肟以及加酶抑制剂复合抗生素,必要时可选用亚胺培南.     

食品动物源大肠杆菌耐药性分析及16S rRNA甲基化酶基因的检测

【目的】对四川地区临床分离的437株健康动物源及82株患病动物源大肠杆菌(E.coli)的耐药性及其机制进行研究,为临床合理用药提供理论依据。【方法】用3种氨基糖苷类药物和11种非氨基糖苷类药物对分离的大肠杆菌进行药物敏感性试验(K-B纸片法)。选取至少耐1种氨基糖苷类药的大肠杆菌作为供试菌,通过PCR检测其16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE和npmA;对阳性菌株进行质粒接合试验;并用K-B纸片法分析临床菌和接合子对抗生素的敏感性。【结果】437株健康动物源和82株患病动物源大肠杆菌对14种抗菌药物表现出不同程度的耐药性。健康动物源大肠杆菌对氨苄西林、氯霉素、磺胺甲恶唑的耐药率较高,分别为69.79%,50.8%和68.72%,对庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星比较敏感,敏感率分别为75.97%,67.73%和97.02%;其中有134株分离菌至少对1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。患病动物源大肠杆菌除对美罗培兰耐药率较低(为3.66%)外,对其余药物的耐药率在32.93%~100%,且都对至少1种氨基糖苷类药物表现出耐药性。多重耐药分析表明,健康动物源大肠杆菌主要分布于0~4耐,而患病动物源大肠杆菌至少耐7种抗菌药物,主要分布于10~14耐。在134株耐氨基糖苷类抗生素大肠杆菌中,检测到5株含rmtB基因,检测率为3.73%,未检测到armA、rmtA、rmtC、rmtD、rmtE和npmA基因。在82株患病动物源大肠杆菌中,检测到1株含armA基因,10株含rmtB基因,检出率分别为1.22%和12.2%,未检测到rmtA、rmtC、rmtD、rmtE及npmA基因;接合试验的耐药质粒传递率为100%,受体菌接合频率在(9.2×10-9)~(4.8×10-6)。【结论】四川地区健康动物源大肠杆菌对抗生素呈中低水平耐药,多重耐药以4耐及以下为主,占63.84%,主要由rmtB基因引起;而患病动物源大肠杆菌对抗生素则呈高水平耐药,89.02%为10~14耐,主要由rmtB和armA基因引起。     

有机磷农药降解菌—阴沟肠杆菌的生物学特性

[研究目的]对有机磷农药降解菌阴沟肠杆菌的生物学特性进行研究,为研究其降解特性机理及应用提供理论依据.[方法]测定阴沟肠杆菌生长曲线、生理生化特征,筛选出最适生长培养基,测定不同温度、pH值、摇床振数、装液量下的生长状况,确定最适生长条件,测定对乐果、甲胺磷、敌敌畏、敌百虫的耐受力和利用情况.[结果]阴沟肠杆菌培养3h后进入对数生长期,可以利用分解大部分含碳化合物.在营养贫瘠的条件上生长,生长温度范围为10～43℃,生长pH值范围为6～12,对乐果、甲胺磷、敌敌畏、敌百虫的降解利用必须建立在一定的营养物质的基础上.[结论]该菌的繁殖速度快,在营养条件较贫瘠的条件下就可以生存,是一株生存能力很强的菌株,适合应用于土壤、水体环境中的有机磷农药的降解.     

阴沟肠杆菌对乐果的降解效果试验初探

研究了阴沟肠杆菌对空心菜上乐果残留的降解效果,结果表明：施用阴沟肠杆菌培养液后,乐果在空心菜上的降解半衰期减少至2.69 d,施药14 d后的相对降解率为47.3%。     

新疆某猪场猪源耐药大肠杆菌β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶检测及分析

[目的]了解新疆乌市某猪场猪源耐药大肠杆菌携带β-内酰胺酶和16S rRNA甲基化酶基因及其共存情况.[方法]采用PCR方法检测203株β-内酰胺类药物(包括头孢噻呋、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林)多药耐药大肠杆菌进行β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因,并测序检出基因的PCR产物.[结果]检出83株菌携带blaTEM (40.89;),2株菌携带blaCTXM(0.99;);检出2株菌携带rmtB(0.99;)基因,并且同时携带blaTEM,未检出其它被检耐药基因.[结论]该猪场猪源大肠杆菌中存在β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶介导的耐药,并且共存.β-内酰胺酶的基因型以blaTEM为主;16S rRNA甲基化酶检出率较低.猪源大肠杆菌存在对头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素多重耐药的风险,有必要对此猪场耐药基因流行情况进行密切监测.     

拮抗细菌Enterobacter cloaeae B8的一株抗菌素抗性突变体(英文)

为了研究拮抗细菌Enterobacter cloacae B8在野外水稻叶面上的定殖情况及拮抗作用,由自然选择和Tn5诱变从B8产生了一株抗菌素抗性突变体BX8.BX8能在含利福平达400μg/ml或卡那霉素达300μg/ml的LB培养基中生长.实验表明该抗菌素抗性的产生没有降低BX8的拮抗活性.该抗性比较稳定,在无抗菌素培养基中培养.BX8至少分裂生长60代内抗性不变.     

猪场蚊子中乙型脑炎病毒的RT-PCR检测

收集湖北省与安徽省部分猪场的蚊子样本,用RT-PCR检测蚊子样本是否携带有乙型脑炎病毒,并对猪群乙型脑炎病毒抗体进行了检测.结果表明,53份蚊子样品中乙型脑炎病毒阳性样品为44份,表明这些猪场的蚊子广泛携带有乙型脑炎病毒.从阳性PCR产物中随机选出8个,并将其克隆到pEASY-T1载体中,得到5个阳性重组质粒,进行序列测定和进化树分析,结果表明阳性蚊子样本携带的都是基因Ⅲ型乙型脑炎病毒.猪场的1 401份血清样品的乙型脑炎病毒抗体阳性率为57.7％,说明这些猪场猪群的乙型脑炎病毒感染率较高.     

河南省规模化猪场致病性大肠杆菌血清型鉴定

从河南省29个猪场118份病料中分离出87株细菌,经分离培养、鉴别培养、生化试验鉴定为猪大肠杆菌。对87株大肠杆菌进行血清型鉴定,共定型51株菌,有26株未能定型,定型菌株包括了14种血清型。为中药筛选治疗大肠杆菌提供研究基础。     

不同猪种背肌中Cst B基因的表达研究

[目的]研究Cst B基因在大白猪、野猪及野家杂交猪背肌组织中表达情况。[方法]采用RT-PCR技术对试验猪只进行检测,探索Cst B基因在大白猪、野猪及野家杂交猪背肌组织中表达情况。[结果]背肌中Cst B基因的表达在90日龄的野家杂种猪表达量最高,其他个体相对较均衡。[结论]从蛋白酶水解的角度来说,90日龄的野家杂种猪利用背肌制作的火腿品质高于大白猪。     

猪肠道非致病性且无耐药性大肠杆菌的分离鉴定、生长特性和基因组进化分析

【目的】从猪肠道中分离出无毒力基因且无抗生素耐药性的大肠杆菌,并分析其生长性能和遗传进 化规律,以期为开发猪用微生态制剂或口服疫苗奠定基础。【方法】采集广东省 2 个地区养猪场的 11 头和 15 头健 康成年猪的粪便样本。首先,采用培养方法从麦康凯培养基中分离出疑似大肠杆菌的菌株,通过 16S rRNA 序列分 析鉴定其是否为大肠杆菌菌株;然后,采用 PCR 方法验证所选大肠杆菌是否含有 13 种常见的猪致病性大肠杆菌毒 力基因,并以 7 类（14 种）抗生素进行药敏试验;最后,对筛选出的优质大肠杆菌菌株进行生长动力学分析,并 提取其全基因组 DNA,构建全基因组系统进化树。【结果】在 260 株疑似为大肠杆菌菌株中,经 16S rRNA 序列分 析确认后有 206 株属于大肠杆菌。其中,107 株大肠杆菌不含 13 种常见毒力基因,25 株大肠杆菌对 7 类（14 种） 抗生素敏感。在这 25 株菌株中,有 23 株非致病性且无抗生素耐药性大肠杆菌（编号为 2-9、3-2、3-4、5-1、6-1、 6-2、6-9、6-10、8-2、8-9、10-5、B-4、B-6、B-7、B-10、D-10、E-2、E-10、J-1、J-4、K-6、L-6 和 O-9） 的生长性能与大肠杆菌 Nissle1917、MG1655 相似,其他 2 株大肠杆菌（编号为 6-4 和 5-2）的生长速度高于 Nissle 1917 和 MG1655。此外,有 10 株菌株（编号为 E-10、E-2、6-4、6-9、8-2、O-9、3-2、6-2、J-1、K-6）耐酸性 能较好,可能适合长期定殖于猪胃肠道内。基于 SNP 核心基因组系统进化树分析,发现这 25 株菌株中有 9 株菌株（编 号为 3-2、6-10、10-5、6-1、8-9、5-2、L-6、O-9、K-6）在系统进化树开端处属于同一大类群,表明它们极可 能为猪原生大肠杆菌的祖先群。【结论】综合上述大肠杆菌的抗生素敏感性、生长性能和全基因组进化树和胃液环 境耐受性能分析,菌株 O-9 在这 4 个方面均具备优势,该菌株与大肠杆菌 Nissle 1917、MG1655 的生长动力学相似 甚至更优,意味着 O-9 菌株可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌,具有极大研究潜力。