猪胸膜肺炎放线杆菌血清型的PCR鉴定

据胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）生物I型各血清型之间外毒素（apx）基因组结构差异,参考GenBank上已发表的4种毒素（apxⅠ/apxⅡ/apxⅢ/apxⅣ）的核酸序列设计了6对特异性引物,对APP的12个血清型进行多重PCR扩增,得出不同的特异性的扩增片段,得以准确鉴定APP生物I型中的9种血清型,但其中血清型2和8,血清型5、9和11仍未能区分。     

复合PCR进行胸膜肺炎放线杆菌血清型快速分型

根据胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）各血清型之间外毒素apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣA基因差异，设计6对引物，对16株标准菌株进行1次5对引物的多重PCR和1次根据apxⅣA基因设计1对引物PCR的扩增，得到各血清型特异性片段，并将片段特征相同的血清型归为同一组。通过这2步PCR分组情况的不同能将16株标准菌株中的大多数血清型区别开，但是仍然不能将血清2型和8型、血清9型和11型、血清5型中的2个亚型以及血清12型和13型区分开。又根据血清2型英膜多糖（CP）基因差异设计1对引物将血清2型和8型区分开。将此分型系统应用于23株未知病原菌检测，检测到胸膜肺炎放线杆菌9株，并全部能够将其分型。本试验PCR分型体系可以作为胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的一种快速而有效的鉴定方法。     

胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布

胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布吴硕显（上海动植物检疫局，２０００３２）胸膜肺炎放线杆菌（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ａｐ）为猪胸膜肺炎的病原，曾称作副流嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）...     

猪胸膜肺炎放线杆菌感染和血清型分布

猪场猪只感染胸膜肺炎放线杆菌(APP)后根据病情不同可造成程度不等的损失,对某一区域内感染率和流行血清型的调查是进行针对性防控的基础工作。目前国内外系统性进行上述研究的报道较少,国外主要通过屠宰场和猪场,应用酶联免疫吸附试验和临床诊断发现在养猪密集区均存在感染,且种猪群和育肥猪的阳性率最高;国内应用间接血凝试验对猪场进行的调查发现不同省份的阳性率差异较大,从猪群来看种猪群的感染率最高,其次为肥猪和保育猪。血清型分布方面,国外以2型最多,国内出现较多的是7型、3型和1型。对国内外关于APP感染率和血清型的文献资料进行综合分析发现,APP感染率普遍较高,流行优势血清型会随着时间的推移发生变化,新的血清型会不断出现。     

猪胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素研究进展

从分子质量、基因结构及致病机理等方面概述了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素ApxⅠ,ApxⅡ,ApxⅢ和ApxⅣ的基本特点和研究进展.比较并归纳了这4种溶血外毒素的异同点及在15种血清型中存在的特点.     

猪胸膜肺炎放线杆菌感染和血清型分布

生猪感染胸膜肺炎放线杆菌之后,症状存在一定的差异,此病的感染率和该区域内流行的血清型有很大的关系。本文对胸膜肺炎放线杆菌感染情况以及血清型的分布做了详细的阐述,以供参考。     

猪胸膜肺炎放线杆菌的血清型分型及毒力因子研究进展

根据荚膜多糖和脂多糖抗原表位的不同，猪胸膜肺炎放线杆菌分为15个血清型，某些血清型问存在交叉反应，不同血清型甚至同一血清型不同菌株间的毒力大小不一样，致病性也有强弱之别。该菌的致病性与多种毒力因子密切相关，主要有外毒素、外膜蛋白、脂多糖、英膜多糖、转铁蛋白、脲酶等。本文综述了国内外对胸膜肺炎放线杆菌的几种主要毒力因子及血清型的研究进展。     

猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的研究进展

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的细菌性呼吸道传染病。Apx毒素(actinbacillus pleuropneumoniae toxin)是由胸膜肺炎放线杆菌分泌的一类溶血毒素,在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中,Apx毒素起了重要的作用。     

鲁西地区猪胸膜肺炎放线杆菌血清型多重PCR研究

本研究建立了鉴定猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清型的多重PCR方法,并对鲁西地区流行的APP血清型进行了鉴定.根据猪胸膜肺炎放线杆菌的外膜脂蛋白(OmlA)基因设计1对种特异性引物;并且根据血清1型、5型、7型荚膜多(cps)基因设计型特异性引物,建立检测血清1型、5型、7型的PCR方法.运用多重PCR对临床分离鉴定的89株APP进行血清型鉴定,结果表明建立的多重PCR检测方法特异性和敏感性良好,可作为猪传染性胸膜肺炎快速诊断和流行病学调查的重要手段.     

胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型标准抗血清的制备及初步临床应用

用十三种血清型的胸膜肺炎放线杆菌标准菌株免疫家兔,制备了标准抗血清,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和免疫电泳试验,对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测,结果表明,制备的抗血清有较好的特异性,在4℃可以保存一个月、-20℃和、-80℃下保存一年无明显变化.用抗血清对从湖南,安徽,河南等地分离的胸膜肺炎菌株进行分型鉴定,分别为血清2,3,8型;而PCR检测均为阳性,说明抗血清可用于野生株的鉴定和流行病学调查.     

胸膜肺炎放线杆菌血清学分型多重PCR方法的建立

10株胸膜肺炎放线杆菌参考菌株,经过纯化、扩增、提取基因组DNA,设计一套特异性引物,运用多重PCR技术,对外毒素基因apxⅠ、apxⅡ和apxⅢ进行扩增,产物经1.6%琼脂糖凝胶电泳,可将10株参考菌株分为5个血清群。血清Ⅰ群由259(血清1型)、263(血清5型)、267(血清9型)组成。血清Ⅱ群由260(血清2型)、262(血清4型)、264(血清6型)、266(血清8型)组成。血清Ⅲ群、血清Ⅳ群和血清Ⅴ群分别由261(血清3型)、265(血清7型)和268(血清10型)单独组成。对于血清Ⅰ群和血清Ⅱ群,通过apxⅣ进行扩增,结果259(血清1型)、263(血清5型)和267(血清9型)分别扩出2.4kb、2.8kb和1.6kb片段;262(血清4型)、264(血清6型)、260(血清2型)或266(血清8型)分别扩出1.6kb、2.0kb、2.8kb片段。     

猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定

采用巧克力琼脂平板从贵州省某养猪场发病猪体分离到3株细菌,经培养特性观察、生化特征检查和血清型鉴定,确定3株分离菌均为猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型。经药敏试验显示,分离菌对氨苄西林、硫酸庆大霉素、丙氟哌酸、氟哌酸、头孢三嗪和四环素等药物高度敏感。     

利用菌落多重PCR对传染性胸膜肺炎放线杆菌进行血清分型

参照文献报道的传染性胸膜肺炎放线杆菌的特异基因合成5对特异引物,建立传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的菌落多重PCR方法,结果为10株传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对41株传染性胸膜肺炎放线杆菌分离菌株进行血清型分型,结果所有菌株均扩增出了相应的特异片段,其中6株为1型,5株为7型,1株为5型,29株为9型。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的套式PCR检测

根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)apxⅣA毒素基因的序列,设计了两对特异性引物P1/P4和P6/P8,建立了检测APP全部15个血清型的套式PCR方法.对APP的15个国际标准血清型和国内的APP菌株进行了PCR检测,都能得到223 bp的特异性扩增产物;检测的灵敏度可达1.3 CFU,最低检出DNA浓度为9 fg.     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌参考株抗血清的制备及野毒株血清型鉴定

将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌全部12个血清型的国际参考菌株接种于培养基大量培养。回收菌体、甲醛灭活后，加入蜂胶佐剂制成疫苗。分别免疫健康的试验用白兔。获得针对该菌单一血清型的抗血清。虽然不同血清型间有一定的交叉反应，但对同源菌株的菌体抗原的凝集效价最高。分别可达6～8个log2。用该套血清对2003年从山东省各地分离到的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌野毒株11株进行了血清型鉴定。分别为3型（2株）、4型（1株）、5型（4株）和7型（4株）。     

猪胸膜肺炎放线杆菌脂多糖的制备及对小鼠的免疫保护作用

采用酚-水法制备血清3型、4型、5型、7型和8型猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）脂多糖（LPS），以该多糖免疫小鼠，进行同源攻毒保护试验，结果LPS在20斗∥只的免疫剂量下可对小鼠产生较强的保护作用，用同血清型菌株对免疫后的小鼠攻毒，仅表现肺脏轻微出血，无死亡，而对照组未经免疫直接攻毒的小白鼠全部死亡，肺脏严重出血；小鼠免疫后第2d就可以检测到抗体，并且抗体水平上升较快，到第6d抗体达到最高水平，之后，抗体水平开始下降，但下降幅度不大，可持续2个月左右；交叉保护试验结果表明血清3型LPS对血清5型和7型APP，血清4型LPS对血清5型和7型APP没有保护作用，免疫后的小鼠攻毒仍表现多数死亡；血清3型LPS对血清4型和8型APP有交叉保护作用，血清4型LPS对血清3型和8型APP有交叉保护作用，血清5型、7型、8型LPS对5个血清型的APP都有交叉保护作用，免疫后的小鼠攻毒无死亡，仅表现肺脏有不同程度的出血。上述结果表明LPS是APP的主要免疫保护性抗原之一，该研究为APP亚单位疫苗的研制及应用提供了理论依据。     

胸膜肺炎放线杆菌的实时荧光PCR检测

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的危害养猪业的五大疾病之一。至目前为止App共报道有2个生物型15个血清型。所有型都可能致病，但有显著差异。使用血清学方法监测猪传染性胸膜肺炎有其局限。一些猪细菌分离培养阳性，但血清反应仍为阴性，对这些猪群只能使用病原分离进行确诊。亚临床感染及处于潜伏期的动物，     

猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌血清3型分子鉴定及药敏试验

为了解猪接触传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的血清型及耐药情况,本研究根据GenBank数据库设计1对引物,特异性的扩增950 bp核苷酸片段,对血清3型APP进行分子鉴定及药敏试验。结果显示,所得PCR产物经过测序,与GenBank已发表的血清3型APP的同源性达99%以上,所分离菌株耐药性较强,大多为多重耐药。通过对血清3型APP进行分子鉴定及药敏试验,为猪传染性胸膜肺炎的鉴定、诊断及防制提供了基础。