Agrobacterium-mediated transformation of Musa spp.cv.Tianbao with cDNA encodina S6PDH(NADP-dependent sorbitol-6-phosphate dehydrogenase) from Prunus salicina var.cordata

研究以香蕉栽培品种“天宝蕉”(Musa spp.cv.Tianbao)横切薄片(Thin cross-sections,TCSs)为材料,采用根癌农杆菌介导的方法,进行棒S6PDH基因转化香蕉的研究.结果表明,在横切薄片继代增殖培养基M4中添加5％～7％(V/V)的椰汁明显增强了香蕉芽苗的生长势；GUS基因瞬时表达检测表明,长势旺盛的香蕉芽苗(直径为7～8 mm)适宜作为香蕉遗传转化的受体材料,横切薄片厚度以2mm左右为佳；采用两步法进行抗性芽的筛选得到37个抗性芽苗,生根移栽后获得31株成活苗；目的基因S6PDH和报告基因GUS的PCR检测表明其中4株是转基因植株.该研究为将蔷薇科山梨醇代谢途径引入香蕉以提高其耐渗透胁迫的能力奠定了重要的基础.     

根癌农杆菌介导的S6PDH基因转化香蕉研究

研究以香蕉栽培品种"天宝蕉"(Musaspp.cv.Tianbao)横切薄片(Thin cross-sections,TCSs)为材料,采用根癌农杆菌介导的方法,进行S6PDH基因转化香蕉的研究。结果表明,在横切薄片继代增殖培养基M4中添加5%~7%(V/V)的椰汁明显增强了香蕉芽苗的生长势;GUS基因瞬时表达检测表明,长势旺盛的香蕉芽苗(直径为7~8 mm)适宜作为香蕉遗传转化的受体材料,横切薄片厚度以2 mm左右为佳;采用两步法进行抗性芽的筛选得到37个抗性芽苗,生根移栽后获得31株成活苗;目的基因S6PDH和报告基因GUS的PCR检测表明其中4株是转基因植株。该研究为将蔷薇科山梨醇代谢途径引入香蕉以提高其耐渗透胁迫的能力奠定了重要的基础。     

硝酸银在香蕉遗传转化上的作用

试验以天宝蕉茎尖横切薄片为材料,研究硝酸银在根癌农杆菌介导的香蕉遗传转化中的作用。试验表明,硝酸银对农杆菌菌株LBA4404有较强的抑制作用;在筛选培养基中添加2 mg.L-1硝酸银,褐变乃至死亡的薄片比未添加硝酸银少9.0%,抗性芽分化率增高5%,因此硝酸银对香蕉的遗传转化有促进作用。     

低酚棉胚性愈伤组织农杆菌转化体系建立及转DREB1C植株的获得

利用农杆菌介导法对低酚棉胚性愈伤组织转化转录因子DREB1C基因,探讨了低酚棉胚性愈伤组织对潮霉素的敏感性和胚性愈伤组织状态对转化效率的影响。结果表明：胚性愈伤组织对潮霉素较为敏感,适宜的筛选浓度为25mg／L,可明显抑制非转化组织生长。以继代培养7～14d的胚性愈伤组织作为转化受体,转化率高达56．3％。将转化后获得的抗性愈伤组织转入分化培养基中分化成苗,经过PCR检测得到5株阳性植株。     

香蕉农杆菌介导高效转化体系

以香蕉（Musa spp.)的横切薄层切片（tTCL)外植体作为转化受体，研究影响根癌农杆菌转化香蕉的因素。研究表明，菌液的预处理和重悬液的pH值是影响香蕉转化的主要因子，而乙酰丁香酮（AS）是香蕉遗传转化中必需的酚类物质，80μmol/L是较理想的浓度；感染时间以8－15min，共培养的时间和温度分别以4－5d及26℃为最佳的条件。     

农杆菌介导籼稻明恢86高效稳定转化体系的建立

以籼稻恢复系明恢86为材料,探讨受体材料、愈伤代龄、预培养时间、筛选时间等因素对转化效率的影响,并建立了高效稳定的农杆菌介导籼稻转化体系.转化技术参数如下,水稻花后15 d幼胚诱导的胚性愈伤(2~6代),作为转化受体材料,经4 d预培养,农杆菌侵染30 min,共培养3 d后,在30 mg@L-1潮霉素筛选出抗性愈伤,抗性愈伤经50 mg@L-1潮霉素筛选10~15 d后立即分化,幼胚的胚性愈伤转化频率可达6.98%,并且能够周年转化.     

抗生素对水生植物小对叶外植体分化的影响

[目的]研究小对叶对常用的抗生素的敏感性。[方法]将培养2周的小对叶无菌苗叶片切成0.5 cm×0.5 cm的小块,在添加不同浓度梯度的卡那霉素、潮霉素、壮观霉素和氯霉素4种抗生素的MS1培养基上进行培养,诱导其分化出芽,研究了4种抗生素对小对叶外植体分化的影响。[结果]一定浓度的抗生素对小对叶离体叶片的分化均具有抑制作用;确定了4种抗生素作为小对叶遗传转化研究的筛选标记的适宜浓度:卡那霉素为15 mg/L,潮霉素为10 mg/L,壮观霉素为60 mg/L,氯霉素为20 mg/L;小对叶对4种抗生素的敏感程度为:潮霉素>卡那霉素>氯霉素>壮观霉素。[结论]在进行遗传转化之前,对待转化材料进行抗生素敏感性测定是建立小对叶遗传转化系统的必然条件。     

籼粳稻对农杆菌遗传转化反应的差异及提高转化率的研究

通过对粳稻品种日本晴及5个籼稻品种的研究,发现籼稻、粳稻在成熟胚愈伤组织培养、农杆菌遗传转化的最适条件方面存在差异.在MS,CC,NB培养基上,日本晴的愈伤组织诱导率达86.37%以上,远高于各籼稻品种;与农杆菌液的共培养时间,籼、粳稻均以3 d为宜;转化后的籼稻抗性愈伤组织用40 mg/L的潮霉素筛选效果较好,日本晴则需用50 mg/L的潮霉素筛选;幼苗生根阶段,籼稻的潮霉素适宜质量浓度为20～30 mg/L,日本晴的潮霉素适宜质量浓度为50 mg/L;日本晴的gus基因瞬时表达率强于各籼稻品种,hpt基因转化率也高于各籼稻品种.     

蕨菜适宜生长条件及种植模式探讨

采用塑料大棚、小拱棚、露地栽培3种种植模式,研究了不同种植模式对蕨菜生长环境条件、生长发育和产量的影响.结果表明:蕨菜适宜的出芽气温和地温分别为13～14℃和11～12℃;适宜的出茎气温和地温分别为15～16℃和12～14℃;适宜的孢子形成气温和地温分别为26～27℃和20～22℃.塑料大棚促进蕨菜提前出芽、出茎,采收期较其他模式提前25～39 d,产量达20 800 kg/hm2,分别比小拱棚和露地增产25%和40%.     

PEG-CaCl2�鵼ţ��֥�Ŵ�ת����ϵ�Ĺ���

为建立稳定的牛樟芝(Antrodia cinnamomea)遗传转化体系,同时筛选出适宜介导牛樟芝原生质体转化的PEG-CaC12浓度.利用潮霉素抗性、绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)标记和PCR扩增验证拟转化子.结果表明:新鲜的牛樟芝菌丝体在10 mg/mL溶壁酶溶液中,30℃条件下酶解4h,原生质体的获得率为3.55×105个/mL;菌丝体和原生质体在潮霉素B浓度分别为60 μg/mL和40μg/mL时不能生长,最终确定筛选拟转化子的潮霉素B浓度为60 μg/mL;浓度为20％～40％的PEG均可介导牛樟芝原生质体转化,且40％的PEG转化效率最高.     

两种抗生素对阿拉巴马花烛植株再生的影响

花烛（Anthurium andraeanum Lind）是世界第二大热带盆栽花卉,其转基因育种具有巨大的应用前景。以 花烛为材料,研究不同浓度卡那霉素和潮霉素对阿拉巴马花烛植株再生的影响,结果表明;卡那霉素和潮霉素均能 促使外植体严重褐变死亡,同时,二者对愈伤组织和芽的诱导具有明显抑制作用;当以叶片或叶柄为转化受体时,选 择压以100 mg/L 卡那霉素或20 mg/L 潮霉素为宜;当以愈伤组织为转化受体时,选择压以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜;两种抗生素对生根亦具有抑制作用,选择压则以150 mg/L 卡那霉素或40 mg/L 潮霉素为宜。     

澳大利亚香蕉品种Williams球茎再生体系研究

以澳大利亚香蕉品种Williams吸芽球茎种植获得的球茎为外植体,探讨不同激素组合对球茎萌芽诱导、增殖分化、生根以及不同基质对生根苗移栽的影响。结果表明,球茎在初代培养基MS＋6-BA 3.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋蔗糖30.0 g/L＋琼脂3.0 g/L中培养18 d后即可萌芽生长,生长速度快,长势强;在培养基中添加不同浓度MT的增殖效果优于6-BA,且芽体分株清晰,高度适中,无愈伤组织,芽体整齐一致,继代芽容易切割,增殖系数高,其中0.5 mg/L MT有利于促进芽体长根。在MS培养基中添加IBA、NAA均可有效诱导芽苗生根,根系生长较旺盛。在不同移栽基质泥炭土、沙土混合、田园土中,生根苗移栽成活率均达95.0%以上。大田种植结果表明,4月种植的Williams组培苗在8月假茎高为195.00 cm,累计叶片数为24.67张,最大叶长和叶宽分别为201.33和80.33 cm,其农艺性状表现较好。     

植物生长延缓剂B9对马铃薯试管苗生长的影响

为提高马铃薯种质试管苗保存质量,研究了植物生长延缓剂B9在不同浓度范围(10～60 mg/L)对费乌瑞它试管苗株高、叶数、可用节数和成活率的影响.结果表明:B9对马铃薯试管苗的生长有抑制作用;B9浓度40 mg/L可明显延长试管苗的保存时间,使培养234 d的试管苗成活率仍能达到90％,且不影响试管苗继代.结论:用40 mg/L的B9保存马铃薯种质试管苗,可减少试管苗转接次数,降低污染比例,节约人力、物力.     

植物生长延缓剂多效唑和比久对怀山药离体保存的影响

为了寻找怀山药种质资源缓慢生长离体保存的有效方法,以铁棍山药、47号山药和B号山药为试材,研究了植物生长延缓剂多效唑(PP333)和比久(B9)对其试管苗在常温(25℃)和低温(4℃)下的保存效果。结果表明:常温和低温下,PP333、B9均可延缓各怀山药试管苗的生长,PP333的保存效果优于B9的,低温的保存效果优于常温的。在MS+KT 2mg/L+NAA 0.02mg/L培养基上,铁棍山药、47号山药和B号山药低温保存的适宜PP333质量浓度分别为5.0mg/L、2.5mg/L、1.0mg/L,在此条件下,各怀山药无需继代可保存6个月,保存6个月的存活率分别为100%、100%、95%。在试验范围内,怀山药种质资源缓慢生长离体保存的有效方法为:将不同怀山药带芽节段接种在添加各自适宜质量浓度PP333的MS+KT 2mg/L+NAA 0.02mg/L培养基上,常温下培养7d,再转入4℃低温、自然光下保存。     

Production of Transgenic Anliucheng Sweet Orange (Citrus sinensis Osbeck) with Xa21 Gene for Potential Canker Resistance

Citrus canker, an epidemic quarantine disease caused by Xanthomonas axonopodis pv. citri, has brought a great damage in citrus production worldwide. Herein, a rice PRR (pattern recognition receptor) gene Xa21 together with GUS reporter gene and hygromycin phosphotransferase gene (HPT) was introduced into Anliucheng sweet orange (Citrus sinensis Osbeck) via Agrobacterium-mediated transformation of embryogenic callus. The transgenic calluses were screened on MT basal medium containing hygromycin (HYG) and detected by histochemical GUS staining. The transgenic plantlets were recovered through somatic embryogenesis pathway. The regenerated plantlets were accustomed to and maintained in the greenhouse. The transgene integration of recovered plantlets was identified by PCR and Southern blot hybridization. It showed that all the transgenic plantlets tested had undergone single copy integration, the expression of Xa21 in eight different transgenic lines detected by qRT-PCR can be divided into three grades, high for T5 and T6, middle for T4 and low for the rest. The tolerance to citrus canker disease of the three recovered transgenic lines T2, T4 and T6 was assessed by in vitro pin-puncture inoculation. The results showed that all the three transgenic lines conferred improved resistance to citrus canker bacterium infection and the T4 transgenic line displayed the highest resistance. The mechanism and feasibility of rice Xa21 in triggering innate immunity in citrus was briefly discussed.     

Study on the Factors Influencing the Efficiency of Wheat Transformation

Wheat transformation efficiency is closely related to several factors such as receptor genotype, constructed plasmid and selection procedure after bombardment or co-cultivation. In our study, several kinds of antibiotics, which were normally used in plant transformation to the selection genes of nptⅡ, bar and hpt,were tested for the optimal concentrations for wheat transformation. The results showed that 25 - 50mg/L of geneticin (G418) was suitable for the selection of nptⅡ, kanamycin or neomycin was not suitable for use. 3 5mg/L of phosphinothricin (PPT) or biolaphos could be used for the selection of bar, 100 - 150mg/L of hygromycin for the selection of hpt. Yangmai 158 and Yangmai 10 with high tissue culture response and good agronomic characteristics were screened from 25 potential Chinese wheat cultivars. The concentration changing of selectable agent in selection medium was helpful to obtain enough regeneration plantlets with strong root system.     

IPT基因遗传转化谷秆两用稻的研究

采用农杆菌介导的方法,将嵌合基因PSAG12-IPT导入谷秆两用稻201幼胚诱导的胚性愈伤组织中,经潮霉素筛选,抗性愈伤分化成苗,共获得46个抗性愈伤克隆,126株转基因植株.对这些植株进行PCR检测和GUS染色分析,确定其中80株为阳性植株.     

苹果转化细胞的悬浮培养及植株再生

以试管苗叶片为外植体,将绿色荧光蛋白基因（GFP）转入苹果品种昌红中,研究发现抗生素筛选压对苹果转化效率的影响主要表现为对转化细胞再生植株的抑制作用。虽然降低筛选压（10或20 mg/L卡那霉素）可获得较高频率（分别为62.0%和57.8%）的转化愈伤组织,但其对转化细胞再生植株的抑制仍然明显。通过建立转化细胞悬浮培养系,在无筛选压下获得大量的由悬浮转化细胞增殖形成的愈伤组织,该愈伤组织再转到无筛选压的再生培养基上,6周以后15.8%的愈伤组织可再生转化植株。研究结果显示,可通过建立悬浮培养系的方式消除抗生素筛选压的抑制作用,快速大量获得苹果转化植株,为进一步开展苹果转化基因的整合机制与表达特性研究,推动苹果转基因育种的应用奠定基础。     

冬种马铃薯试管苗壮苗技术研究

【目的】建立冬种马铃薯试管苗高效生产技术体系。【方法】在不同植物生长调节剂、光强和昼夜温差、培养器皿和封口材料、固液体MS和1．5MS培养基条件下对马铃薯试管苗进行壮苗培养。【结果】在MS培养基中添加B9和CCC，均对马铃薯试管苗壮苗培养有促进作用，但以B9的效果最佳、最持久；当光照强度为3000lx、昼夜温差为8℃左右时，即培养温度在18～26℃时壮苗培养效果较佳。与固体培养基相比，1．5MS液体培养基对试管苗的壮苗效果更明显；与试管和250mL罐头瓶相比，透光、透气性好的150mL三角瓶带塑料封口膜更有利于马铃薯试管苗壮苗培养，且操作方便，试管苗生长较好。【结论】在光照强度3000lx、温差为8℃条件下，在带塑料封口膜的150mL三角瓶中采用添加既的1．5液体MS培养基对马铃薯试管苗进行壮苗培养，可获得较好的培养效果。