结球甘蓝一套初级三体的选育及细胞学鉴定

【目的】创建甘蓝初级三体是其基因染色体定位等遗传研究的基础。【方法】以结球甘蓝自交系-9601为试材，采用根尖细胞、花粉母细胞的染色体计数及核型分析等方法，从其三倍体与二倍体的回交子代中分离和鉴定初级三体。【结果】从回交子代中鉴定分离出了多个2n+1和2n+2等非整倍体植株，经核型分析、染色体联会行为及植株外部形态的观察，初步获得了结球甘蓝一套初级三体（Tr-1～Tr-9），其中从2n+1植株中得到了Tr-2、Tr-3、Tr-5、Tr-6、Tr-7、Tr-8和Tr-9初级三体，从2n+2植株中得到了Tr-1和Tr-4初级三体，各初级三体在株高、株型、叶形、花蕾大小和开花期等特征特性上表现出一定差异。【结论】三倍体与二倍体回交分离结球甘蓝初级三体是方便快捷的有效途径。     

菜薹部分初级三体的选育与细胞学鉴定

 将菜薹同源三倍体与二倍体相互杂交 ,获得了大量杂交种子。其中 3x× 2x的结籽率为 34.78% ,2x× 3x的结籽率为 2 6 .17%。经染色体数目检查 ,杂交子代植株绝大多数为非整倍体 ,其中三体植株占 33.3% (3x× 2x)和4 0 .70 % (2x× 3x)。经细胞学鉴定和核型分析 ,从三体植株中初步鉴定出三体 3、三体 7、三体 8和三体 9等 4种初级三体。     

结球甘蓝叶色（紫/绿）的遗传分析和基因定位

 【目的】明确结球甘蓝叶色（紫/绿）的遗传方式及其基因所位于的染色体。【方法】以普通结球甘蓝‘9601’及其系列初级三体为母本分别与紫甘蓝‘紫阳’杂交;结合形态学观察和染色体数目鉴定从各F1群体中选出三体（2n+1）植株进行测交;采用双体和三体遗传分析及χ2测验法对叶色基因进行染色体定位。【结果】双体遗传分析表明,结球甘蓝‘9601’和‘紫阳’的叶色（紫/绿）受2对独立遗传基因控制,紫红色对绿色为显性并表现加性效应;三体遗传分析显示,控制其叶色的两对基因分别位于3号和8号染色体上。【结论】结球甘蓝‘9601’和‘紫阳’的叶色（紫/绿）受2对独立遗传的基因控制并表现加性效应,两基因分别位于3和8号染色体。     

不同基因型甘蓝耐热性的灰色决策与聚类分析

对高温胁迫下12份不同基因型结球甘蓝幼苗的7个生理生化指标和4个相关农艺性状进行灰色决策和聚类分析,结果表明,10个性状与壮苗指数的关联度值从大到小依次为:GSH含量、SOD活性、POD活性、单株重、地上干重/地下干重、MDA含量、Vc含量、相对膜透性、Pro含量和地上鲜重/地下鲜重.强夏-1-2的综合效果测度值是1....     

结球甘蓝AUX/IAA家族基因BoIAA2与BoIAA19的克隆与表达分析

为了探究AUX/IAA家族基因在结球甘蓝叶片与茎尖发育过程中的功能,筛选出对甘蓝叶片与茎尖发育具重要影响的相关AUX/IAA基因。试验以结球甘蓝品系"519"为材料,通过对莲座期叶片与茎尖,结球期叶片与茎尖的转录组比较分析,筛选出在两个组织中均表达差异显著的2个AUX/IAA基因,分别为BoIAA2与BoIAA19。采用PCR技术分别获得基因BoIAA2与BoIAA19的编码序列,其CDS(coding sequence)全长分别为519 bp、585 bp,编码172、194个氨基酸;进一步序列分析发现BoIAA2、BoIAA19分别与大白菜BrIAA2、油菜BnIAA19氨基酸同源相似性均达99%,且均具有AUX/IAA蛋白的DomainⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ特异性结构域。利用荧光定量PCR分析表明BoIAA2和BoIAA19在叶片、茎尖中的表达量均呈现出结球期高于莲座期的变化趋势,与转录组分析结果相符;对其结合蛋白基因BoTIR1和BoARF8进行表达分析,结果显示二者与BoIAA2、BoIAA19在叶片、茎尖中不同时期的表达量变化趋势一致;由此,推测BoIAA2和BoIAA19可能通过与BoTIR1和BoARF8的结合影响生长素信号转导,进而调控结球甘蓝叶片及茎尖的生长发育。     

春结球甘蓝裂球分级新标准

参考植物病害分级方法,进行春结球甘蓝栽培试验,并且对裂球甘蓝裂口的长、宽、深进行测量,计算裂口弧长与叶球的中部最大周长比、裂口宽与球高比、裂口深与1／2球宽比（0〈x〈t）,并作为参数,以这3个参数的和（用∑来表示）将甘蓝裂球的严重程度划分为6个等级标准,0级为∑=0,1级为0〈∑≤20％,3级为20％〈∑≤50％,5级为50％〈∑≤100％,7级为100％〈∑≤180％,9级为∑〉180％。     

甘蓝抗枯萎病SCAR标记的开发

 【目的】开发与甘蓝枯萎病抗性基因紧密连锁的SCAR标记,利用该标记对甘蓝抗枯萎病基因跟踪、鉴定,为甘蓝抗枯萎病分子标记辅助选择奠定基础。【方法】以高抗枯萎病的甘蓝自交系8024与感病自交系6A为亲本构建F2代分离群体和相应F3代家系,通过F3代家系抗病性分离表现确认F2代单株的基因型,选择10株纯合基因型显性抗病单株和10株纯合基因型隐性感病单株,利用BSA法构建甘蓝抗感基因池,筛选出与甘蓝枯萎病抗性基因紧密连锁的AFLP标记,克隆测序后根据序列差异将其转化为SCAR标记,通过142株F2代分离群体连锁验证该标记与甘蓝枯萎病抗性基因的连锁关系,并利用两个不同的抗感分离F2群体共100株对SCAR标记的通用性进行验证。【结果】获得了1个以相斥相连锁的SCAR标记S46M48199,该标记在感病亲本中扩增出199 bp的单一条带,而在抗病亲本中无扩增条带,142株F2代分离群体连锁分析表明,其遗传距离为2.78 cM,在F66和C1两个F2群体中的通用性验证结果,与抗性鉴定结果的吻合率分别为81%和83%。【结论】开发的SCAR标记可用于甘蓝抗枯萎病的分子标记辅助育种。     

Studies on the Formation and Transmission of n ＋ 1 Gametes of Cabbage Primary Trisomics

The transmission rate of n ＋ 1 gamete is an important parameter for the genetic analysis of trisomics. To correctly use the trisomics of the cabbage to carry out gene orientation and other genetic studies, the n ＋ 1 gamete transmission rates by female parent and by male parent were determined. The results showed that the n ＋ 1 gamete transmission rates were 15.28% for tri-1, 12.68% for tri-2, 12.31% for tri-3, 30.51% for tri-4, 22.81% for tri-5, 7.46% for tri-6, 5.36% for tri-7, 42.37% for tri-8, and 9.23% for tri-9 by female parent, and were 12.12% for tri-1, 12.33% for tri-2, 7.81% for tri-3, 4.76% for tri-4, 8.93% for tri-5, 10.94% for tri-6, 1.54% for tri-7, 2.94% for tri-8, and 13.04% for tri-9 by male parent. The main factors affecting the male n ＋ 1 gamete formation and transmission were the rate of trivalent formation at prophase Ⅰ, the rate of 9-9-10-10 division at anaphase Ⅱ, and the pollen viability.     

结球甘蓝的离体快繁技术研究

以结球甘蓝无菌苗的胚轴和子叶为材料 ,几乎不生长愈伤组织 ,分化出不定芽。不定芽在添加 6 -BA的MS培养基上增殖很快 ,适宜的生根培养基为 1/ 2MS IBA0 5mg/L NAA0 1mg/L。通过增加培养基中糖和琼脂粉的用量 ,提高培养时的光照强度等有效控制了玻璃苗的产生     

芥蓝×甘蓝F2群体的2个RAPD标记转化为ERPAD标记的研究

在对芥蓝C100-12×甘蓝秋50-Y7杂交组合构建F2作图群体进行RAPD检测的基础上,分别对4个O12,R13,Q14,P17进行了延长1个碱基的研究,其中O12和P17能将部分特异RAPD标记转化为稳定性更强的ER-PAD标记,但对R13和Q14随机引物未找到相应的ERPAD标记。     

结球甘蓝体细胞无性系变异的RAPD分析

以结球甘蓝强力50原生质体再生植株和无菌苗下胚轴再生植株为材料,利用RAPD分子标记技术对结球甘蓝再生过程中产生的体细胞无性系变异进行了分析检测。结果表明：从50条随机引物中筛选出条带清晰、多态性丰富、表现稳定的引物14条,在此基础上共扩增出DNA片段253条,其中具多态性的73条,表现为新增加带和缺失带,多态率为28.85%,每对引物平均扩增的多态位点为5.21个。各植株间遗传相似系数的计算使用聚类分析软件NTSYS210e完成,采用非加权类平均法（UPMGA）对统计数据进行聚类分析,结果表明：各再生植株与母本间平均遗传相似系数为0.9304,植株之间存在遗传变异。     

甘蓝显性核基因雄性不育与胞质雄性不育系的选育及制种

 利用甘蓝显性核基因雄性不育材料DGMS79-399-3(79-399-3Ms)和引进的CMSR3625等改良胞质雄性不育材料作不育源,以优良自交系作转育父本,育成了一批不育性稳定、生长发育正常、配合力好的雄性不育系,配制出中甘16等6个甘蓝新品种。用雄性不育系进行规模化制种,每667m2生产杂交种种子40～50kg。不育系亲本可在隔离网棚用蜜蜂授粉繁殖,成本较低。杂交率比用自交不亲和系制种的高5%～8%。     

低温预处理和取材部位对甘蓝花药愈伤组织诱导的影响

以B475、B476、B323和B523 4个不同类型的甘蓝自交系为试材,研究了低温预处理、取材部位对甘蓝花药愈伤组织诱导培养的影响。结果表明,在花药培养前对花蕾进行4℃低温预处理0、1、2、3、4、5 d共6个处理中,4个甘蓝基因型均在低温预处理3 d时愈伤组织的诱导率较高,分别为42.77%、59.40%、71.80%和54.06%;对4个材料在同一生长时期不同部位的花蕾进行培养,花药愈伤组织诱导无显著差异。     

不同结球甘蓝自交系氮效率的分析

试验研究了在3个氮处理水平上对12个结球甘蓝自交系的氮效率。结果表明,不同结球甘蓝自交系的产量、氮吸收效率、氮生理利用效率、氮效率和氮响应度存在显著的差异。据氮效率分析,把供试结球甘蓝自交系划分为4个类型:92-1041,96-1047,96-1013,606-12-21属于双高效型;96-1025-1,96-1028属于低氮高效型;96-1038-8,92-1023,97-1126属于双低效型;96-1012-3-11,97-1018,PR1-3-6属于高氮高效型。     

耐低温弱光结球甘蓝种质资源评价

为了筛选适宜在冬春低温弱光设施条件下栽培的结球甘蓝种质资源,选取了79份种质材料,在江苏省徐淮地区进行了筛选和评价。通过调查田间生物学性状,剔除掉20份材料,其中包括8份先期抽薹的材料、6份抗病性差的材料(材料S78既抗病性差又先期抽薹)、2份熟性偏晚的材料、2份外叶数偏多的材料和3份外叶质量超过球质量50%的材料。随后对剩余59份材料进行了光合生理指标分析。分析结果表明:材料S2和S3光合能力最强,S27光合能力最弱;S11净光合速率(Pn)和胞间CO2浓度(Ci)都最小,光合能力低于平均水平;S26蒸腾速率(Tr)最小,对水分的利用率最高。光合生理指标之间及其与生物学产量的相关性分析结果表明,不同材料4个光合生理指标[Pn、气孔导度(Gs)、Tr、Ci]之间的相关性存在较大差异,总体来说,对生物产量的影响大小依次为PnTrCiGs。     

利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝SCR与SRK胞外域片段间的相互作用

[目的]利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域.[方法]以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的全长SCRB3、SCRB3-1、SCRB3-2的重组诱饵质粒;以pGADT7为载体的全长eSRKB3、eSRKB3-1、eSRKB3-2的重组激活域(AD)质粒.用PEG/LiAc法将上述重组诱饵质粒转化感受态酵母菌Y2HGold,重组AD质粒转化感受态酵母菌Y187;Y2HGold[pGBKT7-SCRB3-s]、Y187[pGADT7-eSRKB3-s]两两融合培养,观察交配菌在SD/-Trp-Leu/x-α-ga1/AbA(DDO/x/A)、SD/-Trp-Leu-Ade-His/x-α-gal/AbA(QDO/x/A)平板上的生长情况.[结果]酵母双杂交重组表达载体构建成功,且无毒性和自激活作用产生;9个试验组中只有SCRb3-1、SCRb3-2与eSRKBb3-1、eSRKb3-2重组表达质粒转化子两两组合的4个融合株在QDO/x/A平板上出现蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C MEL1、HIS3、ADE2.[结论]酵母双杂交系统适用于SCR与SRK蛋白相互作用的研究,初步确定了SCR与eSRK存在相互作用,SRK跨膜域的存在与否对其相互作用的研究没有影响.     

二甲戊灵室内除草毒力测定

采用室内生物测定方法，研究了二甲戊灵对杂草的毒力和对甘蓝的安全性。结果表明，播后苗前在148．37～165．69g／hm^2的剂量下，采用土壤喷雾法施用二甲戊灵，可有效抑制稗、马唐生长，鲜重抑制率达90％以上；对甘蓝的安全性测定结果表明，二甲戊灵在甘蓝播后苗前施药对甘蓝安全。     

秋茬牛心甘蓝品种比较试验

引进6个牛心甘蓝新品种,以主栽品种中甘15号为对照品种,于漳浦县良种场基地进行秋茬牛心甘蓝品比试验,结果表明：综合表现较好的是渥美和日本川岛65,这两个品种抗逆性强、产量高、结球紧实、品质优,适宜在当地秋茬大面积推广。     

大白菜雄性核不育基因的染色体定位及AFLP分子标记筛选

 【目的】基因定位是遗传研究的重点内容,也是育种工作的重要基础。本研究以大白菜雄性不育两用系‘大阳AB系’和大白菜系列初级三体为材料,对决定大白菜雄性不育性的核基因（ms）进行染色体定位和分子标记筛选,旨在为其分子克隆和遗传利用奠定基础。【方法】基因的染色体定位采用初级三体遗传分析和χ2测验法,分子标记采用AFLP分析方法。【结果】大白菜‘大阳AB系’的雄性不育系（msms）×大白菜系列初级三体（Tri-1、Tri-2、Tri-3、Tri-4、Tri-5、Tri-6、Tri-7、Tri-8、Tri-9）的9个杂交组合中,F1均为可育株;从F1选出三体植株进行自交和测交,其自交子代（F2）和测交子代（Tc）中可育株与不育株的分离比例,只有Tri-4表现为15.5﹕1（F2）和3.24﹕1（Tc）、不符合孟德尔的单基因遗传分离比例（3﹕1和1﹕1）,其它三体在2.60﹕1～3.76﹕1（F2）和0.81﹕1～1.48﹕1（Tc）、均符合孟德尔的单基因遗传分离比例（3﹕1和1﹕1）,这表明该雄性不育性的遗传与Tri-4的遗传表现一致,即确定该雄性不育性的基因位于大白菜4号染色体上。基于染色体和染色单体分离的三体遗传分析表明,该雄性不育基因位于4号染色体的近着丝点区域,通过对124个AFLP引物组合的筛选,初步获得了一个与雄性核不育基因位点连锁的AFLP标记E34M49(398 bp),遗传距离约为1.2 cM。【结论】利用初级三体遗传分析首次将大白菜雄性核不育基因定位在第4号染色体上。     

结球甘蓝的组织培养与快繁研究

[目的]研究适合结球甘蓝组织培养与快速繁殖的最佳方法与培养基种类。[方法]以结球甘蓝无菌苗的胚轴和子叶为材料,以MS为诱导和增殖的基本培养基,以1/2MS为生根基本培养基,比较不同浓度及配比的生长调节物质对增殖及防止玻璃化苗的影响。[结果]接种于诱导培养基MS＋6-BA 3.00 mg/L＋NAA 0.10 mg/L中的子叶可长出愈伤组织,胚轴可直接分化不定芽;在增殖培养基MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 0.10 mg/L上生长的组培苗生长势强,玻璃化苗数最少,增殖率最高,平均增殖系数为3.8;接种于生根培养基1/2MS＋NAA 0.10 mg/L和1/2MS＋IBA 0.20 mg/L上的组培苗生根率最高,达100%。[结论]最佳诱导培养基为MS＋6-BA3.00 mg/L＋NAA 0.10 mg/L;最佳增殖培养基为MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 0.10 mg/L;最佳生根培养基为1/2MS＋NAA 0.10 mg/L和1/2MS＋IBA 0.20 mg/L。