溴氰菊酯胁迫下罗非鱼组织中过氧化氢酶和单胺氧化酶的变化

以罗非鱼Tilipia为试验鱼类,采用人工水族箱培养法,研究了其暴露于不同浓度溴氰菊酯后组织中过氧化氢酶CAT和单胺氧化酶MAO活性的动态变化。结果表明,罗非鱼肌肉和肝脏组织中的CAT正常值分别为(8.56±0.2)U.mg-1prot和(15.48±0.1)U.mg-1prot,MAO的正常值分别为(0.045±0.002)U.h-.1mg-1prot和(0.465±0.010)U.h-.1mg-1prot,均是肝脏组织高于肌肉组织。采用不同浓度的溴氰菊酯处理罗非鱼25d,除了1.0μg.L-1浓度组罗非鱼体内CAT和MAO与对照组相比无显著差异外,其余各浓度组的CAT和MAO均发生了明显的变化,两者的变化趋势正好相反。CAT的变化规律为先降低后升高,即溴氰菊酯对罗非鱼体内的CAT具有一定的抑制作用,可使鱼体内的CAT失活,且这种变化幅度肝脏比肌肉大。MAO的变化规律为先升高后降低再恢复,即溴氰菊酯对罗非鱼体内的MAO具有诱导和激活的作用,这种变化的幅度肝脏比肌肉小一些。研究表明,1.0μg.L-1以下的溴氰菊酯对罗非鱼没有生化毒性影响,罗非鱼组织中的CAT和MAO可作为生物标志物来评价农药对鱼类的生化毒性。     

单胺氧化酶的制备及活性测定

利用经改良的低温差速离心法,从老龄雄性大鼠肝组织内提取单胺氧化酶.通过该方法所制备的肝组织抽提物中被证实含有单胺氧化酶,且酶活达到30.7 U/mg.在益生菌抗衰老的研究中,可以此酶作为靶位酶建立相关的体外测定模型.     

菠菜胆碱单氧化酶(CMO)基因的克隆及在大肠杆菌中的诱导表达

甘氨酸甜菜碱是一种非毒性的渗透调节物质 ,在植物体内是以胆碱为底物 ,经两步氧化而合成的 .菠菜中 ,催化第一步反应的酶为胆碱单氧化酶 (CholineMonooxygenase ,CMO) .为了研究胆碱单氧化酶基因的功能以及转基因植物的抗逆能力 ,在 30 0mmol L高盐浓度 (n(NaCl)∶n(CaCl2 ) =5 7∶1)的条件下 ,作者分离纯化了菠菜mRNA ,经RT PCR得到全长 (1.3kb)胆碱单氧化酶 (CMO)cDNA ,与已经报道的基因序列相比较 ,同源性为 99% .根据其核苷酸序列推导得到了氨基酸序列 .将PCR纯化产物与pET 30a+ 连接 ,构建了重组表达载体pETCMO ,并转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导获得高效表达 .     

单胺氧化酶B单核苷酸多态性与幼犬工作行为性状的关联分析

测定了204条德国牧羊犬、拉布拉多犬、史宾格犬二月龄幼犬对人依恋性和服从性、衔取、争夺游戏和胆量等行为性状,同时用PCR-RFLP方法检测各犬单胺氧化酶B(MAOB)基因型.用χ2检验MAOB基因多态性的基因型和基因频率在品种间的分布,发现基因型和基因频率在犬品种之间差异极显著(P＜0.01).构建一般线性模型分析MAOB基因型与行为性状的关系,发现MAOB基因型对幼犬的衔取行为有显著影响(P＜0.05).TC基因型犬的衔取得分值均高于TT型(P＜0.01).这些结果表明,MAOB基因可能是影响犬衔取行为的主效基因或与主效基因紧密连锁的标记基因,可用于建立选择犬衔取性状的基因标记辅助选择方法.     

单胺氧化酶B单核苷酸多态性与幼犬工作行为性状的关联分析

测定了204条德国牧羊犬、拉布拉多犬、史宾格犬二月龄幼犬对人依恋性和服从性、衔取、争夺游戏和胆量等行为性状,同时用PCR-RFLP方法检测各犬单胺氧化酶B(MAOB)基因型.用χ2检验MAOB基因多态性的基因型和基因频率在品种间的分布,发现基因型和基因频率在犬品种之间差异极显著(P＜0.01).构建一般线性模型分析MAOB基因型与行为性状的关系,发现MAOB基因型对幼犬的衔取行为有显著影响(P＜0.05).TC基因型犬的衔取得分值均高于TT型(P＜0.01).这些结果表明,MAOB基因可能是影响犬衔取行为的主效基因或与主效基因紧密连锁的标记基因,可用于建立选择犬衔取性状的基因标记辅助选择方法.     

QSA的mRNA在人和小鼠各组织中表达规律

从基因水平上检测精子中新基因QSA的表达规律及时空分布,并推测其可能的生物学作用.采用RT-PCR和原位杂交法检测QSA在人和小鼠多种组织中的表达.RT-PCR结果显示QSA在小鼠的睾丸、精子和受精卵中特异性表达,而在小鼠卵细胞、囊胚等组织中未检测到该基因的mRNA.原位杂交结果表明QSA在人的部分腺体组织(如:睾丸、...     

金刚健身液对老化相关酶超氧化歧化酶,单胺氧化酶的影响

金刚健身症（蚕公合剂）３个剂量均可明显提高老龄鼠超氧歧化酶活性及显著地降低老龄鼠单胺氧化酶含量。随剂量增强，作用增强，且呈剂量依赖性。小剂量金刚健液的作用与还精煎及西洋 参蜂皇浆相当，大、中剂量的作用优于还精煎及西洋参蜂皇浆。     

克氏原螯虾酚氧化酶原mRNA组织分布特性研究

酚氧化酶原系统是甲壳动物体内与免疫相关的重要功能系统之一,对于甲壳动物的防御反应具有重要作用。本研究针对克氏原螯虾酚氧化酶原基因保守序列设计引物,利用实时荧光定量PCR法对克氏原螯虾酚氧化酶原mRNA的组织分布进行了初步研究。结果表明,克氏原螯虾酚氧化酶原基因在血淋巴、肝胰腺、卵巢和精巢中转录水平较高;在肌肉、表皮和鳃中有较弱表达;而在肠和胃中几乎无表达。此种组织表达特性可能与酚氧化酶原基因在机体生命活动过程中的功能有关。     

半定量RT-PCR法检测SPRN基因在小鼠各组织中的mRNA表达

[目的]研究SPRN基因在不同组织中的表达水平和机制。[方法]选择3种不同品系的小鼠为试验材料,利用半定量RT-PCR方法,测定不同品系小鼠各组织中SPRN基因的mRNA表达水平,并对其循环次数进行研究。[结果]SPRN基因主要在脑组织中表达,在肺脏和胃中表达量较低,而在淋巴结和脾脏中仅有微量的表达;半定量RT-PCR体系的最佳扩增循环数为23。[结论]成功地建立了检测SPRN基因mRNA表达的半定量RT-PCR方法,该方法具有简便、快速、准确和精密度高等优点。     

小鼠CRBN基因mRNA的组织表达谱研究

为了研究CRBN基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟滞(ARNSMR)的关系,探讨小鼠CRBN基因mRNA在不同组织中的表达情况.应用Northern blot和Real-time PCR技术,研究小鼠CRBN基因在肺、肝、心脏、肾和大脑中的表达特点.结果表明,小鼠CRBN基因mRNA在肺、大脑中表达量较高,在心脏中表达量最低.说明小鼠CRBN基因在不同组织中广泛表达,除了与学习、记忆功能有关外,可能还与其他功能有关.     

添喂大豆蛋白酶解物对早期断乳仔猪免疫组织及器官的影响

本试验旨在研究添喂大豆蛋白酶解物对早期断乳仔猪免疫组织、器官及血清白介素-2水平的影响。将12头体重相近的三元杂交仔公猪分为对照组(28日龄断乳,饲喂早期断乳仔猪料)和处理组(21日龄断乳,在饲喂早期断乳仔猪料的基础上,每头每天添喂2 g大豆蛋白酶解物,连续10 d)。结果表明:与对照组仔猪相比,添喂大豆蛋白酶解物的仔猪胸腺的绝对和相对质量分别增高105.90%(P<0.01)和96.30%(P<0.01);脾脏的绝对和相对质量分别增高43.78%(P<0.01)和27.52%(P<0.05);腹股沟淋巴结的绝对和相对质量分别增高28.89%(P<0.05)和15.22%(P>0.05);血清白介素-2水平提高8.73%(P>0.05);脾脏的中央动脉周围淋巴鞘面积增大6.47%(P>0.05);回肠派伊尔结(Peyer′s patches)总个数增加4个(P>0.05),派伊尔结总面积减小0.700 3 mm2(P>0.05)。     

二花脸猪Smad4基因的克隆与卵巢组织mRNA的表达水平

[目的]了解二花脸猪Smad4(common-mediator Sma4)基因的序列特征和组织表达特征,分析二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA表达水平的差异.[方法]采用克隆测序技术获得二花脸猪Smad4基因cDNA序列,利用生物信息学方法分析二花脸猪Smad4基因的序列特征和蛋白的理化性质、高级结构,RT-PCR检测其组织表达特征,并采用real-time PCR技术检测二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA的表达水平.[结果]二花脸猪Smad4基因编码区序列全长1 659 bp,编码一个含有5 52个氨基酸残基的蛋白质,氨基酸序列与其它哺乳动物的同源性均在98％以上;二花脸猪Smad4也包括3个典型的结构域(MH1、SAD和MH2).二花脸猪Smad4基因在所检测的组织中均有表达,且卵巢组织中mRNA的表达水平极显著高于商品猪(P＜0.01).[结论]二花脸猪Smad4基因可能拥有其它哺乳动物Smad4基因相同的功能及其可能与猪高繁殖力间有一定相关.     

棉花多酚氧化酶基因GhPPO1的克隆及在棉铃虫取食诱导反应中的作用

【目的】克隆棉花多酚氧化酶基因（GhPPO1）全长cDNA序列,分析其序列特征,并研究其及多酚氧化酶系对棉铃虫（Helicoverpa armigera）的取食诱导反应,明确其在棉花防御棉铃虫取食中的作用。【方法】根据笔者研究组前期从棉花SSH文库中获得的对昆虫取食诱导响应明显的棉花PPO基因序列片段,设计5′RACE特异引物,进行5′端RACE反应,测序后进行序列拼接。拼接序列在NCBI棉花dbEST数据库中,用Blastn程序进行同源检索,获得一条EST（GenBank登录号：DR461072.1）与测序结果有410 bp重复。用DNAstar进行组装、电子延伸,获得一条棉花PPO基因序列,命名为GhPPO1。在GhPPO1序列两端设计引物进行全长验证,同时设计引物,以棉花基因组DNA为模板,进行PCR扩增测序,验证GhPPO1是否含有内含子。采用BLASTX在NCBI数据库中对验证后的GhPPO1序列进行同源序列分析;ClustalW软件进行多重序列比对;MEGA 4.0软件构建系统进化树;同时对推测的编码区氨基酸序列进行功能位点及理化性质的预测与分析,所用软件包括ANTHEPRO5.0、ExPASy、InterProscan等。利用实时荧光定量PCR方法测定机械损伤、棉铃虫取食和口腔分泌物处理后,棉花叶片中GhPPO1的mRNA表达量;并通过分光光度法测定棉花叶片中PPO酶系的活性变化趋势。【结果】 GhPPO1的cDNA序列全长为2 022 bp,推测该基因编码区（ORF）为1 797 bp,编码598个氨基酸,5′UTR 含102 bp,3′UTR含123 bp,预测其等电点为6.11,蛋白分子量约67.18 kD,无内含子。GhPPO1编码区氨基酸序列包含CuA和CuB结合位点、3个N-糖基化位点、8个N-豆蔻酰化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、8个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个依赖于cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点及1个酰胺化位点。GhPPO1的CuA和CuB离子结合区,有PPO蛋白关键氨基酸组氨酸和半胱氨酸。GhPPO1蛋白与其他植物的PPO蛋白序列最大相似度几乎均在50%以上,与其他植物PPO蛋白进化关系相对较远。机械损伤棉花叶片后,GhPPO1表达量呈现出先升高后下降的趋势,至6 h表达量最高,为无处理对照的3.29倍;1龄末期棉铃虫幼虫取食棉花后,叶片中该基因的表达量呈现先升高后下降,然后又升高的趋势,至12 h表达量最高,为无处理对照的6.04倍;棉铃虫取食3 h和6 h后的表达量低于机械损伤处理后相同时间的表达量。棉铃虫取食和机械损伤棉花叶片后,PPO酶活性均呈现出升高趋势,且机械损伤处理酶活性在各时间段均高于棉铃虫幼虫取食处理。与未做任何处理的正常叶片相比,机械损伤和清水共同处理的叶片GhPPO1表达量及PPO酶活性显著升高,而机械损伤和棉铃虫幼虫口腔分泌物共同处理的叶片GhPPO1表达量及PPO酶活性无显著变化,表明口腔分泌物对GhPPO1表达量及PPO酶活性有抑制作用。【结论】获得了GhPPO1的全长cDNA序列,证明GhPPO1是棉花防御棉铃虫取食的关键PPO基因,推测棉铃虫口腔分泌物中存在抑制棉花PPO酶活性升高物质,该物质在棉铃虫适应寄主植物产生的防御反应中发挥作用。     

仔猪副伤寒细菌分离与鉴定

 仔猪副伤寒是危害仔猪的慢性传染病,主要由猪霍乱沙门氏菌和肠炎沙门氏菌引起的。主要临床症状表现为腹泻,严重者可出现败血症经过。监测猪群的沙门氏菌感染,最常用的方法一般有2种,即病原的分离鉴定和血清学的鉴定。试验从疑似仔猪副伤寒病例病料中,采用常规分离鉴定法和商业用A-F多价O血清做凝集试验,对分离菌株进行鉴定,结果分离菌株为肠炎沙门氏菌,从而将此病例确诊为仔猪副伤寒。肠炎沙门氏菌具有广泛寄主谱,主要引起畜禽的胃肠炎及人类肠炎和食物中毒。因此肠炎沙门氏菌作为食品安全的污染源之一,以得到许多国家的公认。     

LEF1基因在巴什拜羊不同毛色皮肤组织中的DNA甲基化及mRNA表达水平分析

【目的】分析LEF1基因在红棕色与青灰色巴什拜羊皮肤组织中DNA甲基化与mRNA的表达水平。【方法】运用BSP(亚硫酸盐修饰后测序PCR)与RT-RCR(实时荧光定量PCR),检测不同毛色巴什拜羊皮肤组织LEF1基因启动子区的甲基化水平与mRNA表达量。【结果】在红棕色巴什拜羊皮肤组织中的LEF1基因启动子区的甲基化水平高于青灰色的甲基化水平,且二者甲基化CpG位点不同,二者呈显著的负相关(P< 0.05)。【结论】DNA甲基化水平对红棕色与青灰色巴什拜羊的毛色形成具有调节作用,可作为一个候选的巴什拜羊毛色遗传标记。     

猪Cathepsin B基因和Cystatin B基因mRNA表达的发育性变化及组织差异

 【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B（cathepsin B,CTSB）和半胱氨酸蛋白酶抑制素B（cystatin B,CSTB）在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分析CTSB和CSTB mRNA在两个品种猪的多个组织、多个发育时间点的表达量。【结果】RT-PCR结果表明,CTSB和CSTB mRNA表达量最高的组织为肾脏,心肌和骨骼肌中表达丰度低,股四头肌CSTB mRNA表达量极显著高于背最长肌。CTSB mRNA表达量在0～5月龄长白猪和梅山猪背最长肌中表现出先升高后降低的变化趋势,梅山猪峰值出现较早,并在4月龄后再次出现急剧上升。CSTB mRNA表达量在梅山猪中表现出生初期较高,随后逐渐降低的表达模式,长白猪的表达模式则为出生后表达量急剧升高,2月龄达到峰值,随后逐渐降低。2品种猪背最长肌组织CTSB和CSTB mRNA表达量表现出显著正相关。【结论】CTSB和CSTB mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,2基因mRNA表达量呈显著正相关。     

组织培养过程中PPO活性和总酚含量的研究

该文研究了阿月浑子、枣树和葡萄组织培养苗生长过程中多酚氧化酶（ＰＰＯ）活性和总酚含量的变化规律．结果表明：多酚氧化酶活性与组织培养材料的褐变指数相关性不明显,总酚含量与材料褐变指数有一定的相关性,即褐变严重、褐变指数高的材料多酚含量特别高．说明褐变发生的条件是复杂的,不只是多酚和多酚氧化酶直接作用的结果．