一种由5种细菌抗原和2种免疫原组成的新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗安全性和效价检测

牛细菌性呼吸道疾病是造成犊牛高死亡率和巨大经济损失的最严重问题之一。由于没有多价疫苗,牛细菌性呼吸道疾病疫苗接种程序很复杂。本研究研发了新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗,并进行了安全性和效价检验。新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗由5种细菌抗原和2种免疫原组成,其中细菌抗原包括A型溶血性曼氏杆菌菌素、多杀性巴氏杆菌菌素、睡眠嗜血杆菌菌素、牛支原体菌素、化脓性隐秘杆菌菌素;免疫原包括A型溶血性曼氏杆菌白细胞类毒素、多杀性巴氏杆菌外膜蛋白。与没有接种疫苗的猪相比,接种5种细菌抗原的几内亚猪的ELISA抗体滴度升高。在本研究中,新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗对犊牛和妊娠牛是安全的。用溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌对犊牛攻毒,和没有接种疫苗的犊牛相比,接种疫苗的犊牛平均日增重和抗体滴度明显增加（P〈0.05）,呼吸道症状极显著减轻（P〈0.01）,治疗频率极显著减少（P〈0.01）。有趣的是,溶血性曼氏杆菌白细胞类毒素和牛支原体抗体滴度与呼吸道症状减轻有密切相关性。接种新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗将会是防制牛细菌性呼吸道疾病的一种经济有效的措施。     

牛呼吸道疾病两种细菌性病原研究进展

牛呼吸道疾病(BRD)给北美乃至世界养牛业造成巨大的经济损失,是引起舍饲牛发病的主要原因,具有高发病率和高病死率的特点,是仅次于新生犊牛腹泻的第二大疾病.引起BRD的主要细菌性病原体包括溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌,掌握两种细菌的生物学特性、免疫逃避和致病机制、耐药性与耐药现状及多重耐药的遗传机制是制定科学防控措施的...     

牛呼吸道感染细菌病原的致病机理与防控研究进展

牛呼吸道疾病综合征(BRDC)是一种急性呼吸道疾病,其主要细菌性病原有多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌和昏睡嗜血杆菌,常见于断奶、运输等应激后牛群。该病呈世界性分布,可经呼吸道感染,严重影响肉牛及泌乳牛的品质,给养牛业造成巨大的经济损失。国内关于BRDC的研究仍比较匮乏,且尚无可预防BRDC细菌性病原的疫苗,为更好地防控BRDC,现就国内外BRDC细菌性病原的致病机理和防控研究进展做一综述。     

牛呼吸道疾病综合征的主要病原

近年来,国内外奶牛呼吸系统疾病频发,国外学者将由多种病毒或细菌引起的牛肺炎、运输热、支气管炎等统称为牛呼吸道疾病综合征(Bovinerespiratory disease complex,BRDC).该病在世界范围内普遍存在,据统计,养牛业中65％的疾病与牛呼吸道疾病相关,感染率达100％,死亡率可达35％或更高.尤其是当病毒性和细菌性病原体相互作用时常会使牛呼吸系统疾病病情加重,导致严重的肺炎.引起BRDC的病毒包括牛传染性鼻气管炎病毒,牛呼吸道合胞体病毒,牛副流感病毒3型等;细菌包括溶血性曼氏杆菌、睡眠嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、化脓性隐秘杆菌等.     

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗对小鼠的保护性研究

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病（bovine respiratory disease,BRD）的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica,Mh） Mh422株和牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm） PmCQ2株作为疫苗菌株,分别制备了2种菌体浓度的Mh和Pm单价灭活菌苗及3种菌量配比（1∶1、2∶1和3∶1）的Mh-Pm二联灭活苗,以小鼠为模型,皮下多点免疫（0.2 mL）,加强免疫2次,免疫剂量均为首免的一半。首免后第7天及其后每隔5 d,小鼠尾静脉采血分离血清,ELISA方法检测抗体效价,三免后第20天,分别以Mh422或PmCQ2进行腹腔攻毒测定免疫保护效果。结果显示,所有小鼠接种疫苗均无不良反应,二免后第10天抗体达较高水平,三免后抗体水平持续升高,第15天到达高峰,其后25 d维持高水平,后缓慢下降。Mh单菌苗的2种免疫剂量对Mh422株攻毒的免疫保护率均为0,而Pm单菌苗的2种免疫剂量对PmCQ2株攻毒的免疫保护率全为100%;Mh和Pm间无交叉免疫保护作用;3种菌量配比的Mh-Pm二联疫苗对Mh422株和PmCQ2株攻毒的各自免疫保护率分别为53%～71%和100%。该研究结果表明,所制备的Mh422单菌苗对同型攻毒无免疫保护作用,在诱导机体抗体产生方面,Mh和Pm间无相互抑制作用,PmCQ2株具有促进Mh422株灭活疫苗对Mh422的免疫保护作用,这为牛溶血性曼氏杆菌和牛多杀性巴氏杆菌二联疫苗的进一步研究提供了理论基础。     

牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌多重PCR快速检测方法的建立

本试验旨在建立一种可同时鉴别牛支原体、巴氏杆菌A型和化脓隐秘杆菌的多重PCR方法。分别针对多杀性巴氏杆菌A型特异的hyac-hvaD基因区段、化脓隐秘杆菌的16SrRNA基因上保守区段和牛支原体的UvrC基因设计特异性引物,多重PCR的最佳扩增条件确定为：95℃ 10min预变性;95℃ 1min,56℃ 50s,72℃ 1min,循环30次;72℃ 210min延伸。结果表明,该多重PCR方法可同时扩增出以上三种致病菌的特异性片段,不能扩增出其他病原菌的相关片段;对多杀性巴氏杆菌A型、化脓隐秘杆菌和牛支原体的最低检测浓度分别为8×10^5CFU／mL、8×10^5CFU／mL和4×10^6CFU／mL。同时用该方法检测了牛支原体肺炎患牛的鼻拭子与肺组织,发现12h预增菌后,肺组织检测与牛支原体培养的阳性符合率为92％。对临床样本进行牛支原体分离培养需要3-4d时间,而采用多重PCR方法检测12h预增菌则能在24h内出结果。该多重PCR方法显著加快了临床诊断速度,具有推广应用价值。     

牛源多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌双重PCR检测方法的建立与应用

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是栖息于牛呼吸道的2种常见细菌,可引发牛的呼吸道疾病,对养殖业产生一定经济损失。为提高这2种细菌所导致疾病的临床诊断效率,本研究根据Pm的Kmt1基因、Mh的Lkt基因序列分别设计了特异性引物,建立了一种同时检测2种细菌的双重PCR检测方法。结果显示,建立的双重PCR方法对其他牛源细菌及病毒检测结果均为阴性,Pm、Mh病原基因组DNA的检测下限分别为1.57×10⁵,1.98×10⁶ copies/μL,表明该方法具有较好的特异性和敏感性。应用此双重PCR方法对宁夏地区118份临床样品进行了检测,结果显示Pm的检出率为57.63%(68/118),Mh的检出率为30.51%(36/118),混合感染检出率为24.58%(29/118),而且双重PCR检测结果与单一PCR检测结果一致,表明该方法可用于临床检测。Pm和Mh 2种病原双重PCR检测方法的建立,为牛呼吸道疾病的临床诊断提供了一种方便、快捷和准确的检测...     

牛多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及致病力评估

牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease, BRD)是牛场中重要的疾病之一,给我国养牛业造成了严重的经济损失。多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是与BRD相关的主要细菌性病原。为分离纯化到目前Pm和Mh流行的优势毒株,建立合适的小动物攻毒模型,给BRD疫苗研制提供有效的疫苗候选株。本研究首先从患BRD牛的病料中进行Pm和Mh的检测、分离鉴定,确定基因型且评估分离株对小鼠的致病性,筛选合适的疫苗候选株。结果显示,本研究在2022年11-12月从我国3个省份的6个牛场采集到48份患有BRD的牛鼻拭子,PCR检测结果显示Pm的检出率为47.9%(95%CI:33.3～62.8),Mh的检出率为37.5%(95%CI:24.0～52.6),Pm/Mh共感染的检出率为18.8%(95%CI:8.9～32.6)。在阳性样本中分离纯化得到12株Pm,经血清型鉴定均为A型多杀性巴氏杆菌(PmA);分离到11株Mh,其中7株为A1型,4株为A6型,且在同一头牛的鼻拭子中同时分离...     

新疆牛源溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性和毒力分析

为鉴定新疆石河子地区某规模化牛场表现呼吸道感染症状荷斯坦病牛的细菌性病原及其分离株的血清型、耐药基因和毒力基因携带情况,本研究无菌采集病死牛病变组织,采用常规细菌分离培养及PCR方法鉴定细菌,采用PCR方法检测其血清型、耐药基因和毒力基因携带情况,采用K-B纸片法检测其耐药表型。结果显示,从病变组织样品中分离了4株荚膜A1型的溶血性曼氏杆菌(Mh-1、Mh-2、Mh-3、Mh-4);耐药表型显示4株Mh对β-内酰胺类(青霉素)、氨基糖苷类(链霉素)和糖肽类(替考拉宁)药物耐药;耐药基因仅检测到β-内酰胺类基因blaTEM;分离菌株Mh-1携带8类9种毒力基因中的5种(LKT-C、gs60、fbp A、gapA、ptfA),Mh-2携带其中的4种(LKT-C、plpB、dnaN、ptfA),Mh-3携带其中的7种(LKT-C、plpB、gs60、fbp A、gapA、dnaN、ptfA),Mh-4携带其中的6种(LKT-C、 plpB、 gs60、 fbp A、 gapA、 ptfA)。同时分离出1株荚膜A型,脂多糖L3型的多杀性巴氏杆菌(Pm-1);Pm-1仅对克林霉素耐药;Pm-1携...