海刺猬体腔液凝集素的纯化、性质及其色氨酸的化学修饰

通过DEAE-纤维素52离子交换层析、Sephadex G-200凝胶层析,从海刺猬体腔液中分离纯化海刺猬Glyptocidaris crenularis凝集素(简称为GCL),并对其部分性质和色氨酸的化学修饰进行了研究。结果表明:在还原与非还原SDS-PAGE上,GCL都显示单一蛋白质条带,其相对分子量为94 462;GCL对人O型、兔、鸡、狗红细胞均具有血凝活性,对兔和狗红细胞的血凝活性最强,但对人A、B、AB型及鲫红细胞无血凝活性;GCL血凝活性在温度为4～33℃时最高,经36℃热处理10 min后,GCL对兔红细胞的血凝活性保留25%,经48℃加热10 min后,其血凝活性完全丧失;GCL血凝活性在pH为7.5～8.5时最高;Ca2+对GCL血凝活性无抑制作用,EDTA和Mg2+对其血凝活性有抑制作用;GCL血凝活性不被所测试的α-乳糖、D-果糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和γ-球蛋白所抑制,但被蔗糖和麦芽糖所抑制,最小抑制浓度分别为40 mmol/L和20 mmol/L;用N-溴代丁二酰亚胺(NBS)对GCL分子中的色氨酸(Trp)残基进行化学修饰,有5.1个Trp残基被修饰,修饰后其血凝活性丧失75%,表明Trp残基是GCL血凝活性的重要组成部分。     

遮蔽行为对海刺猬摄食、生长和性腺性状的影响

海胆遮蔽行为对于海胆的生长和发育的影响目前还不清楚,在实验室条件下,研究了遮蔽行为对海刺猬(Glyptocidaris crenularis)摄食、生长和性腺性状的影响.实验设两个对照组和一个处理组:对照组为无任何遮蔽条件的空白组和以堆积砖块创造的黑暗空间来满足海胆的掩蔽行为的掩蔽组,遮蔽组则以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)的贝壳作为遮蔽物来满足海胆的遮蔽行为.结果显示:遮蔽组的海胆周摄食量要显著大于掩蔽组(P＜O.05),而空白组与遮蔽组和掩蔽组之间的差异不显著(P＞0.05);各组海胆的存活率没有显著差异(P＞0.05);空白组和遮蔽组海胆的壳径、壳高、体重要显著大于掩蔽组(P＜0.05),而空白组和遮蔽组之间没有显著性的差异(P＞0.05);空白组和遮蔽组的性腺湿重、性腺干重、性腺指数、壳湿重、壳干重、亚氏提灯湿重、亚氏提灯干重要显著大于掩蔽组(P＜0.05),而空白组和遮蔽组之间没有显著性的差异(P＞0.05);空白组的提灯指数要显著小于遮蔽组和掩蔽组(P＜0.05),而遮蔽组和掩蔽组之间没有显著的差异(P＞0.05).结果证明,遮蔽和掩蔽行为对海刺猬生长及发育的影响是有差别的,掩蔽行为对海刺猬的生长与发育造成了负面影响,而遮蔽行为在一定的生活环境条件下不会对其生长造成影响.研究表明,海刺猬的遮蔽行为反映了其对外界不利环境条件的一种适应性,且这种行为对其生长和发育的影响与掩蔽行为有所不同.至于海刺猬遮蔽行为的进化选择压力,目前的研究还不足以下定论,需要进一步深入的研究.     

不同实验生态环境对海刺猬遮蔽行为的影响

研究了较长时间生活在3种不同实验遮蔽条件下海刺猬(Glyptocidaris crenularis)的遮蔽行为特点.结果表明:不同生活环境下海刺猬都保持着遮蔽行为.生活在以贝壳作为遮蔽材料环境下(遮蔽组)和以砖块作为掩蔽材料环境下(掩蔽组)的海刺猬初次遮蔽耗时要显著短于生活在无遮蔽(或掩蔽)材料环境下(空白组)的海刺猬(N=3,P＜0.05).3组海刺猬用于遮蔽的贝壳总数和有遮蔽行为的海刺猬总数都呈现先增加后趋于平稳的趋势.掩蔽组有遮蔽行为的海刺猬总数要显著多于遮蔽组和空白组(P＜0.05),后两者差异不显著.3组海刺猬用于遮蔽的贝壳总数差异不显著(P＞0.05).海刺猬遮蔽时对两种贝壳(菲律宾蛤仔和贻贝)存在显著的选择差异(P＜0.05).生活环境中一段时间内遮蔽物的缺失并不会使其失去这种行为,但是会在一定程度上影响该行为的强度.因此,光照很可能是海刺猬遮蔽行为的一个进化压力,该行为也许只是作为一种避光策略.海刺猬对遮蔽材料具有显著的选择性,这可能与遮蔽材料自身特征和海刺猬的生理状态相关.     

海刺猬和中间球海胆性腺的组织学和组织化学

对海刺猬Glyptocidaris crerularis和中间球海胆Stronylocentrotus intermedius性腺的组织学和组织化学进行了比较研究。结果表明,两者性腺结构均为滤泡型,滤泡由生殖细胞和营养细胞组成,随着生殖细胞的发育成熟,营养细胞中颗粒逐渐减少,当生殖细胞排放后,营养颗粒的数量逐渐增加,且中间球海胆的营养颗粒数量较海刺猬多。观察和分析了海刺猬和中间球海胆的雌、雄生殖细胞、营养颗粒、滤泡细胞的DNA、RNA、多糖、蛋白质和结合脂类的分布、数量及其变化,发现中间球海胆滤泡中营养颗粒的多糖和蛋白质含量比海刺猬高,其它指标两者都很相近。     

草鱼体表粘液凝集素制备及其性质研究

以草鱼体表粘液凝集素为研究对象,经PBS提取粗提物后,通过离子交换层析DEAE-52对该凝集素进行初步纯化,得到一种具有凝集鸡血细胞的凝集素.该凝集素在20～40℃及pH 7～8条件下表现出较好的凝集活性,且凝集活性不依赖Ca2+的存在.依据凝血活性糖抑制试验结果,推测草鱼体表粘液凝集素可能为半乳糖结合凝集素.     

条斑紫菜凝集素的提取及其性质研究

[目的]研究条斑紫菜（Porphyra yezoensis）凝集素的提取及分离纯化条件,并测定凝集素的性质。[方法]以比活力为指标,研究了缓冲体系、固液比、温度及时间等条件对条斑紫菜凝集素提取效果的影响。采用DEAE-Sepharose FF离子交换层析技术进行分离,确定了分离的最佳条件。以血凝集活性为指标,测定了凝集素的糖专一性、2价阳离子依赖性、温度及酸碱稳定性等性质。[结果]固液比为1∶5的Tris-HCl（25 mmol/L,pH值7.5）缓冲液在40℃条件下提取20 h得到的提取液具有最高比活力。条斑紫菜凝集素在50℃条件下加热30 min后活性保持不变,表现出一定的热稳定性,最适作用pH值为7～9。该凝集素能够与麦芽糖、半乳糖、阿拉伯糖及木糖结合,其中与麦芽糖的结合最强,凝集活性依赖Ca2＋、Mg2＋等2价阳离子。[结论]为阐明条斑紫菜的免疫机制及其高效综合利用提供了理论依据。     

刀豆凝集素的血凝活性及其性质研究

[目的]为进一步研究刀豆凝集素提供依据。[方法]从豆科植物刀豆属(Canavalia)中Canavalia ensiformis(L.)DC的干燥成熟种子中提取刀豆凝集素(Concanavalin A,简称ConA),进行血凝活性测定,并对其部分性质作了初步研究。[结果]结果表明:采用胰蛋白酶修饰人血(A型)红细胞来检测ConA凝集活性时,发现其活性提高了8倍。ConA对人A、B、O、AB型及供血动物(兔,鸡,鸭,鸽,鲤、鲫鱼)的血红细胞都具有一定程度的凝集活性,无供体细胞专一性或血型专一性;D-葡萄糖和D-甘露糖是ConA的专一性结合糖。ConA是一种对热较稳定的凝集素,40℃以下时ConA很稳定,80℃以上保温20 min后,血凝活性完全丧失。在pH值范围5.8~8.3,ConA的凝集活性较高,在pH>11.9时,凝集活性完全丧失。变性剂脲浓度达到0.4 mol/L以上时,ConA的凝集活性可完全丧失。[结论]该研究对今后系统阐明其生物学作用,扩大应用范围具有重要意义。     

草菇凝集素VL-2的分离纯化及其凝血活性研究

以草菇子实体为材料,通过PBS浸提、硫酸铵沉淀、DEAE-52纤维素离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等步骤,分离获得草菇凝集素单一成分VL-2。在此基础上,开展了VL-2对仓鼠、小白鼠、猪、狗、猫、驴、鸭、鸽子、兔、蛙、蛇、鸡等12种动物血红细胞的凝血活性试验,结果发现VL-2对上述前11种动物凝血活性的效价分别为1 024、1 024、512、4 096、4 096、1 024、64、64、128、64、2 048 U/mg,而对鸡血红细胞没有凝血活性。     

菲律宾蛤仔凝集素的分离纯化及抑菌活性研究

采用Cellulose DE52离子交换层析、Sephadex G- 100分子筛层析及TSK G3000PWXL凝胶色谱柱HPLC从菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum中分离纯化出具有N-乙酰半乳糖酰胺(N- acetyl- D- galactosamine,GaINAc)和猪胃黏蛋白(Mucin from porcine stomach,PSM)特异性的菲律宾蛤仔凝集素(简称为MCL-T).SDS-PAGE分析结果表明,MCL-T的相对分子量为148000,含有62000和36000的亚基.抑菌试验结果表明,MCL-T对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis有较高的抑菌活性.对MCL-T中Trp残基、-S-S-、-SH以及Tyr残基进行化学修饰后,MCL-T对金黄色葡萄球菌的抑菌活性丧失;对其-S-S-进行化学修饰后,MCL-T对枯草芽孢杆菌的抑菌活性影响不大,而对其-SH、Trp残基和Tyr残基进行化学修饰后,MCL-T对枯草芽孢杆菌的抑菌活性丧失.研究表明,MCL-T 肽链上的氨基酸残基状态与其抑菌活性有关.     

海刺猬消化腺褐藻胶裂解酶的制备及其酶学性质的研究

以海刺猬Glyptocidaris crenularis为原料,利用丙酮沉淀法制备褐藻胶裂解酶,并对其酶学性质进行分析。结果表明:最佳提取条件为原酶液与丙酮体积比为1∶1.4;酶反应的最适温度和pH为30℃和8.5。酶促反应结果表明:此酶的热稳定性及耐酸碱性较强,受多种金属离子的影响;EDTA对酶活力的影响较小。酶促动力学曲线表明,vm ax=5.928 U/mL,Km=9.001 mg/mL。     

海刺猬消化腺褐藻胶裂解酶的制备及其酶学性质的研究

以海刺猬Glyptocidaris crenularis为原料,利用丙酮沉淀法制备褐藻胶裂解酶,并对其酶学性质进行分析。结果表明:最佳提取条件为原酶液与丙酮体积比为1∶1.4;酶反应的最适温度和pH为30℃和8.5。酶促反应结果表明:此酶的热稳定性及耐酸碱性较强,受多种金属离子的影响;EDTA对酶活力的影响较小。酶促动力学曲线表明,vm ax=5.928 U/mL,Km=9.001 mg/mL。     

大豆籽粒尿囊素酶的变性和化学修饰

大豆籽粒尿囊素酶对十二烷基磺酸钠、尿素、盐酸胍变性处理较不敏感．十二烷基磺酸钠、尿素变性处理的尿囊素酶可通过稀释而恢复活力，但一经盐酸胍变性后却难以通过稀释而恢复活力．酶蛋白质氨基酸残基化学修饰结果表明，巯基、赖氨酸残基、酪氨酸残基不是构成酶分子活力中心的必需基团，色氨酸残基是酶活性中心的必需基团．甘油醛、异烟肼不影响酶反应，而乙酰氧肟氧肟酸抑制酶活力３９．６％     

裙带菜凝集素的分离及性质研究

裙带菜（Undaria pinnatifida)经Tris-HCl缓冲液粗抽提，然后进行硫酸铵分级实验，测定盐析范围为50％硫酸铵饱和度，经50％硫酸铵饱和度分级后，裙带菜凝集素（UPL）纯化倍数为7．7，总活力回收为167％，UPL粗抽提液中糖的质量分数为5．72％。该凝集素在pH为4．0－10．14时均为活性，但在pH为5．0－9．51时活性较高，pH等于4．0时活力保留25％，pH等于10．14时活力保留50％，该凝集素不被D－果糖，葡萄糖，γ－球蛋白所抑制。     

中间球海胆体腔液提取物对HEPG_2细胞的脂质过氧化作用

研究了不同浓度中间球海胆Strongylocentrotus intermedius体腔液提取物对人肝癌细胞HEPG2的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量的影响。结果显示：用中间球海胆体腔液提取物处理HEPG2细胞24 h后,SOD、CAT、GSH-Px的活性随加入提取物浓度的增加而降低,MDA含量随加入提取物浓度的增加而增加,呈现剂量依赖关系。说明中间球海胆体腔液提取物破坏了HEPG2细胞抗氧化系统的动态平衡,可引起人肝癌细胞HEPG2脂质过氧化损伤。     

中间球海胆体腔液提取物对HEPG_2细胞的脂质过氧化作用

研究了不同浓度中间球海胆Strongylocentrotus intermedius体腔液提取物对人肝癌细胞HEPG2的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。结果显示:用中间球海胆体腔液提取物处理HEPG2细胞24 h后,SOD、CAT、GSH-Px的活性随加入提取物浓度的增加而降低,MDA含量随加入提取物浓度的增加而增加,呈现剂量依赖关系。说明中间球海胆体腔液提取物破坏了HEPG2细胞抗氧化系统的动态平衡,可引起人肝癌细胞HEPG2脂质过氧化损伤。     

海南菠萝蜜凝集素的分离纯化及其生物学特性初探

采用常规蛋白提取法、亲和层析法、体外凝集反应以及^3H—TdR掺入法；从菠萝蜜种子中提取凝集素，并探讨其生物学特性。试验发现，纯化的凝集素(JL)由两个亚基以非共价健结合，分子量分别为12．0kDa和14．5kDa；JL可凝集人、猫、兔和鼠的新鲜红血球；促进体外培养的小鼠胸腺细胞、L929细胞增殖，但它却抑制了小鼠3T3细胞的增殖。