鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定

从湖北省某鸡场疑似传染性法氏囊病的病鸡法氏囊内分离到一株病毒,根据临床症状、病理变化、病毒分离、动物回归、血清学检测及病毒核酸提取和部分序列的测定与分析结果,证明分离物为传染性法氏囊病病毒(IBDV),并且该病毒具有超强毒株的特征。     

一例鸡传染性法氏囊病病毒强毒株的分离与鉴定

采用鸡胚接种法从江苏省海安县某发病鸡群中分离出一株病毒,通过琼脂扩散试验等确定该病毒为传染性法氏囊病病毒.将该分离毒株接种到4周龄健康鸡后第2天即开始发病,第3～5天出现死亡高峰,死亡率达80％.免疫保护性试验结果表明,用该毒株制成的灭活苗对鸡的保护力达100％.     

鸡传染性法氏囊病病毒福建株的分离与初步鉴定

从临床表现胸腿肌出血、法氏囊肿大出血为主要特征的病死鸡肝脾和法氏囊中分离到1株病毒（IBDV—FJ）。结果表明,该分离病毒无血凝性,在琼脂扩散试验中能与抗IBDV特异性血清出现1条清晰的白色沉淀线;人工感染28日龄雏鸡出现与临床一致的病变。并回收到病毒;应用针对IBDVVp3基因的特异性引物进行RT—PCR,能扩增到长度为1041bp的特异性目的片段;序列分析发现分离毒vp3基因与IBDv超强毒和经典毒株的核苷酸同源性分别为97．7%-98．2％和95．2％。初步鉴定该分离毒为鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株。     

一例鸡传染性法氏囊病病毒的分子鉴定

发现一例疑似鸡传染性法氏囊病,利用SPF鸡蛋将传染性法氏囊病料进行病毒增殖,使用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白vp3基因。测序分析结果表明,IBDV vp3长为831 bp,推导其编码277个氨基酸;其与超强毒株日本OKYM和超强毒株香港HK46同源性较高,在核苷酸水平上为98.9%与97.5%,在氨基酸水平上为96.9%和96.2%;对该IBDV进行遗传进化树分析,结果显示,与超强毒株日本OKYM和超强毒株香港HK46位于同一进化分支。因此,从分子水平说明该病毒属于IBDV。     

传染性法氏囊病毒HN株的分离鉴定及应用免疫荧光检测IBDV

河南郑州地区某养鸡场的三黄肉鸡出现精神沉郁,拉水样白色粪便,剖检可见法氏囊水肿、出血;肾脏出血肿大,有尿酸盐沉淀,呈花斑状;腿肌、胸肌有出血斑点;腺胃与肌胃交界处出血。经病毒分离、鸡胚接种、琼脂扩散试验和细胞接种试验,最后确诊为传染性法氏囊病。同时,采集病料,制备冰冻切片,建立一种检测病料中的IBDV免疫荧光检测方法。     

鸡传染性法氏囊病病毒dsRNA的提纯与应用

用传染性法氏囊病病毒（IBDV）攻击4周龄的非免疫鸡，以超速离心法从感染鸡法氏囊组织中分离、纯化IBDV，应用蛋白酶K消化和Trizol（异硫氰酸胍－酚－氯仿法）处理2种方法从纯化的IBDV中抽提dsRNA。通过低熔点琼脂糖割胶－酚－氯仿抽提可获得纯化的dsRNA，研究发现应用蛋白酶K消化获得的纯化RNA产量高，用其作模板进行RT－PCR可扩增IBDV基因组全长cDNA A片段和B片段、VP2基因和VP2－4－3基因。     

鸡传染性法氏囊病诊断

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease IBD)是由传染性法氏囊病毒(IBDV)引起的禽的一种淋巴组织坏死为特征的急性、接触性传染病.目前IBD在世界范围内呈广泛流行.近几年来在新疆地区时有流行,波及乌鲁木齐、昌吉、玛纳斯、克拉玛依、库尔勒、吐鲁番等地.1992年春,阿拉尔垦区某鸡场的小鸡突然大批发病,经临床症状、病理学、细菌学、病毒学等检查确诊为鸡传染性法氏囊病.1 发病情况及临床症状发病鸡大多在1月龄,个别鸡群1个半月龄.垦区13团某鸡场养殖40日龄鸡1100多只.发病300多只,发病率27%,死亡110只,死亡率10%,病鸡羽毛杂乱、蓬松、口渴、眼闭或半闭、战粟、脱水、眼窝凹陷,采食减少,精神萎顿.下痢,排水样稀粪.     

鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从江西省一以产蛋下降、呼吸道症状为特征的蛋鸡群中分离到一株病毒，经血凝试验、干扰NDV、鸡胚发育试验等，证实该分离毒株为鸡传染性支气管炎病毒。     

鸡传染性法氏囊病流行毒株的分离与鉴定

对洛阳、焦作、平顶山、南阳四地区鸡传染性法氏囊病的发病鸡群进行了病原分离，经AGP和Dot－ELISA法检测、鸡体回归试验、鸡胚传代及理化特性的测定，证明为IBD强毒，其中南阳株毒力稍弱于其它3株。四种野毒株的毒价分别为10-7．88、10-7．5、10-6．56和10-5．6ELD50／0．2ml。     

鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

[目的]为研究传染性支气管炎(IBV)的流行变异及其防治奠定基础。[方法]从辉县某大型养鸡场疑似IBV的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离和鉴定,并对分离病毒的M基因进行RT!PCR扩增。[结果]从鸡病料中分离到1株IBV,命名为IBV!HN05。经浓度1%胰酶、卵磷脂酶C和10%乙醚处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡、绵羊、人、小鼠和兔的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性。该分离株IBV-HN05和标准毒株IBVM41对NDVLaSota都有抑制作用。该病毒对9日龄鸡胚的致病变率达100%。通过鸡胚矮小试验和动物回归试验,发现该分离株能引起鸡胚和病鸡典型的临床症状和病理变化。PCR扩增结果进一步证实了该分离株为IBV病毒。[结论]该研究为SARS病毒的研究提供了动物模型。     

传染性法氏囊病毒安徽超强毒株的分离及分子鉴定

应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种﹑琼脂扩散试验、电镜观察,从临床病鸡的法氏囊组织分别分离到3株传染性法氏囊病病毒(IBDV)CH03、JG04和QJ04株,对4周龄未免疫鸡的攻毒致死率分别为92%、83%、67%,对鸡胚的半数致死量(ELD50)分别为10-6.8/0.2ml、10-5.4/0.2ml、10-4.6/0.2ml;应用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增的IBDVVP2基因高变区(vVP2)及其序列分析的结果表明,序列共有492个核苷酸,编码164个氨基酸。关键位点的氨基酸变化特征:第一亲水区P222A、疏水区的K249Q和S254G、N279D和T284A,与超强毒参考株UK661﹑HK46﹑OKYM和CH1-97极为相似,而与致弱株Cu-1)及变异毒株Var-E存在明显差异。研究结果表明,获得的3株IBDV分离株均属超强毒株。     

乌鸡传染性法氏囊病毒的分离鉴定与分子生物学特性研究

从一群精神不振、拉白色稀粪便为特征的乌鸡中分离到 1株病毒。经血清学试验、鸡胚接种试验、动物回归试验等鉴定为法氏囊病毒。该病毒与鸡法氏囊病毒的血清型无明显差异。根据IBDV的VP2基因序列设计了一对特异性引物 ,应用RT -PCR法从中扩增出了一条0 .72kb的VP2基因高变区片段。序列分析表明 ,片段长 0 .72kb ,编码 2 4 0个氨基酸 ,与其他毒株的VP2基因序列比较分析 ,该毒株符合IBDV超强毒的特征。虽然有 4处氨基酸发生了变化 ,但没有引起其抗原性的改变     

鸡传染性法氏囊病病毒Gt株感染性分子克隆的构建

 【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）拯救平台，为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签（A节段：EcoR V酶切位点；B节段：PstI酶切位点）。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构（HamRz）和丁肝病毒核酶结构（HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游，构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT，LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞，进行病毒拯救研究。 【结果】 构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P12等3种细胞上高效拯救出病毒。RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的IBDV，且存在分子标签。拯救毒在CEF上能产生特有的砂砾状CPE，且TCID50与亲本毒差异不显著，具有相似的生物学特征。【结论】构建的RNA聚合酶ⅢBDV拯救系统高效、稳定、简便、经济，且具有良好的细胞普适性。     

鸡传染性法氏囊病疫苗应用现状与研究进展

传染性法氏囊病是一种急性传染病,常常造成感染鸡群大量死亡或发病鸡群产肉、产蛋等生产性能下降,对世界养禽业造成了巨大的经济损失。作为传统疫苗,弱毒疫苗和灭活疫苗目前被广泛使用。但其本身亦具有一定的缺点,因此新技术与新型疫苗也在不断研究与开发。对传染性法氏囊病疫苗的应用现状及研究进展进行了综述,并对新型疫苗和新技术进行了展望。     

Study on Propagation of Chicken Infectious Bursal Disease Virus on Vero Cells Using Microcarriers in Fermentor

It was in flask optimization tests proved that 2% serum, pH 7.0, 5:10 000 inoculation concentration of infectious bursal disease virus (IBDV) and 108 hours cultivation for IBDV harvest after its inoculation were the optimal conditions when IBDV was propagated on Vero cells. 250 mi self-made spinner bottle and 5 L stirring fermentor tests proved that IBDV could maintain higher titers for a long time and the highest titers of IBDV in a spinner bottle and a fermentor were 8. 875 and 8.58 ( - lgTCID50/0.1 ml) respectively when IBDV was proliferated on Vero cells using 2 g/L microcarriers in a spinner bottle and a fermentor and was cultivated under the optimum conditions obtained from flask tests after Vero cells had developed a confluent monolayer on microcarriers, which were at least one titer higher than the highest titer in the traditional rolling bottle. All these results suggested that this technology could be applied to large scale production for IBDV.     

牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定及gD基因序列分析

[目的]从疑似牛传染性鼻气管炎病毒感染的牛鼻腔棉拭子中分离出1株病毒,对其进行鉴定和序列分析。[方法]从疑似牛传染性鼻气管炎病毒感染的牛鼻腔棉拭子中分离到1株病毒,将其命名为NM株。通过PCR、MDBK细胞病变观察、中和试验、动物回归试验、gD基因序列分析对其进行鉴定。[结果]确定该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒强毒株。NM株病毒能使MDBK细胞产生牛传染性鼻气管炎病毒典型性细胞病变。Reed-Muench法测定NM株病毒的TCID50为10-6.0/ml。NM株病毒与IBRV阳性血清发生中和反应,而与IBRV阴性血清不发生中和反应。NM株病毒能使8月龄IBRV抗体阴性牛致病,表现出牛传染性鼻气管炎的典型临床症状。gD基因序列鉴定结果表明NM株病毒与IBRV K22株的同源性最高。[结论]该研究可为IBR诊断试剂与疫苗的研制奠定基础。     

用ELISA检测传染性囊病病毒诱导的细胞凋亡

用５株传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）分别感染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测,试验结果显示,接毒组与对照组细胞的ＤＮＡ在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测各组细胞中降解ＤＮＡ量,发现感染ＩＢＤＶ７ｈ后,接毒组细胞降解ＤＮＡ量比对照组明显增加,且各接毒组间降解ＤＮＡ量有一定的差异,试验结果表明：各株ＩＢＤＶ均诱导ＣＥＦ发生细胞