一株银杏内生真菌代谢产物抗菌活性初步研究

从浙江长兴采集的银杏茎中分离到一株内生真菌,编号为1028。本文对其产生的代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,生测结果表明:离体条件下发酵液对番茄早疫病菌、黄瓜枯萎病菌、菜豆炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌均有较强的抑制作用,对不同病原菌的抑制率分别为:66.7%、48.3%、64.6%、36.5%、57.1%、23.0%。抑菌活性成分在80℃以下趋于稳定,pH为7～8时抑菌效果最强。     

当归内生真菌抗植物病原菌的活性研究

[目的]从当归内生真菌中筛选抗小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、水稻纹枯病菌等植物病原菌的有益菌株,并筛选代谢产物中的抑菌活性部位.[方法]采用平板拮抗法对抗性菌株进行初步筛选,采用抑制菌丝生长法以及抑制孢子萌发法筛选有益内生真菌代谢产物中的抑菌活性部位.[结果]抗小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌的内生真菌较多,分别占24.3％和28.6％.对小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌以及水稻纹枯病菌生长抑制作用较强的内生真菌包括5个属8个菌株,其中6个菌株只对1种病原菌菌丝生长有抑制作用.此外,对4种植物病原真菌孢子萌发具有抑制作用的内生真菌超过20％,其中内生真菌Myxormia sp.2和Myxormia sp.4的提取物对4种植物病原真菌孢子萌发的抑制作用显著,抑制率达到90％以上.通过对有益内生真菌代谢产物的分析表明,乙酸乙酯提取部位对植物病原真菌菌丝体和孢子萌发的抑制作用相对较强.[结论]具有抗菌活性的当归内生真菌及其次生代谢产物具有丰富的多样性.     

南方红豆杉内生真菌的抗菌活性

从南方红豆杉中分离到549株内生真菌,以终极腐霉Pythiumultimum、立枯丝核菌Rhizocto-niasolani为靶标菌进行抗菌活性的筛选。结果表明,对终极腐霉、立枯丝核菌的半抑制稀释倍数(ID50)在10以上的活性菌株分别为20株(占总菌株的3.6%)和15株(占总菌株的2.8%)。其中矮棒曲霉Aspergillusclavatonanicus菌株F0028对这两种病原菌的活性最高(对终极腐霉、立枯丝核菌的ID50分别为278±15.0、108±18.6)。进一步研究表明,F0028发酵液在pH值为1.0~7.0之间均有较强的抑菌活性;经高温高压处理后抑菌活性仍达到了对照的(65±3.8)%。发酵液经高效液相色谱纯化得到5种化合物,活性测定表明,5种化合物对终极腐霉、立枯丝核菌均有不同程度的抑制作用,半抑制浓度(EC50)在7.0~45μg/mL之间。     

茶树叶面真菌与内生真菌群落结构的比较

采用常规真菌分离法对健康茶树叶片叶面真菌和内生真菌进行分离,比较了叶面真菌和内生真菌的种群和数量差异。结果表明：从茶树品种黄旦（HD）共分离得到叶面真菌26个形态型,内生真菌18个形态型;从铁观音（TGY）共分离获得叶面真菌16个形态型,内生真菌15个形态型：分离所得真菌大多数为半知菌和子囊菌,少数为担子菌。采用稀释平板法和叶片组织黏附法两种不同的真菌分离方法,获得叶面真菌优势种的种类基本一致,但各种菌的数量差异明显;对黄旦和铁观音两品种比较,采用叶片组织黏附法分离所得叶面真菌的数量没有差异,但采用稀释平板法所获不同真菌的数量差异明显。真菌分离结果表明在茶树叶片表面和内部组织中生长有显著不同的真菌群落。     

侧柏内生真菌Chaetomium globosum ZH-32抗菌活性成分研究

采用生物活性追踪法,从侧柏内生真菌Chaetomium globosum ZH-32发酵液中分离得到1个具有抑菌活性的化合物——WH-01,经紫外光谱、核磁共振及质谱等鉴定为球毛壳菌素A。抑菌活性测定结果表明:WH-01对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和大肠埃希氏菌Escherichia coli有强烈的抑制作用,其最低抑制浓度(MIC)分别为3.13、3.13、1.56和3.13μg/mL;对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea和油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum菌丝生长的抑制中浓度(EC50)分别为5.36和12.19μg/mL。     

枸骨内生真菌抗菌代谢产物的鉴定及活性研究

对一株枸骨内生真菌哈茨木霉Trichoderma harzianum抗菌活性成分的分离、鉴定及其抗菌生物活性进行了研究。该真菌发酵液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶和ODS-反相色谱分离纯化得到一单端孢霉烯化合物,经红外、质谱和核磁分析,鉴定为:4β-乙酰基-12,13-环氧-9-单端孢霉烯(trichodermin),这是首次从哈茨木霉菌代谢产物中分离出该化合物。Trichodermin对蕃茄早疫病和黄瓜立枯病病原菌的离体抑制活性EC50值分别为3.35和3.59 mg/L;活体测定结果表明,在 100 mg/L的剂量下对两种病的保护效果分别为97.8% 和98.1%,治疗效果为96.7%和97.3%。     

内生真菌ZJUF0986代谢的抗菌活性物质特性

内生真菌紫杉木霉ZJUF0986菌株产生的活性代谢产物Ⅰ对植物病原真菌具有广谱抑菌活性。通过紫外吸收、薄层色谱、捷克八溶剂系统纸色谱、pH纸色谱及不同pH和温度处理手段,研究了该活性代谢产物Ⅰ的部分理化性质。结果表明,活性代谢产物Ⅰ的最大紫外吸收峰为199nm;以石油醚∶ 乙酸乙酯=95∶ 5为展开剂薄层层析时,样品斑点的Rf值为0.58;捷克八溶剂系统纸色谱和pH纸色谱图谱与已知各类抗生素纸图谱相比较,活性代谢产物Ⅰ是一类低极性、弱酸性、非水溶性的抗生素;活性代谢产物Ⅰ在酸性至弱碱性和低于100℃的条件下相当稳定,在pH＞10和121℃下活性物质不稳定。     

苦楝内生真菌及其代谢产物的杀虫活性

在对290株苦楝内生真菌分离纯化鉴定的基础上,研究了30株具有代表性的内生真菌及其代谢产物的杀虫活性。结果表明其中5个菌株对马尾松毛虫5d校正死亡率大于60%,杀虫活性最强的KL042菌株经鉴定为球孢白僵菌。球孢白僵菌作为内生真菌,在国内尚未见报道。进一步选取杀虫活性较强的9株内生真菌,研究其代谢产物的胃毒和触杀活性,结果表明拟青霉KL017菌株发酵液10倍浓缩液对柳蓝叶甲胃毒活性最强,48h校正死亡率达90.09%。球孢白僵菌KL042、拟青霉KL017和交链孢KL062发酵液10倍浓缩液点滴马尾松毛虫前胸背板后,48h校正死亡率分别为76.67%、56.67%和53.33%。     

除虫菊内生真菌Y2菌株的分离鉴定及其发酵产物抑菌活性初步研究

在对从除虫菊中分离到的内生真菌进行抑菌活性系统筛选的基础上,对其中活性较高的Y2菌株进行了初步的鉴定和活性物质的分离。经形态学初步鉴定该菌株为镰孢属真菌Fusarium sp.,其发酵液粗提物高抑菌活性馏分集中在丙酮、乙酸乙酯等中等极性馏分段。Y2菌株发酵液10倍稀释液对玉米大斑病菌Exserohilum turcicum等6种供试植物病原真菌菌丝生长的抑制率在80.41% ~93.26%之间,其5倍稀释液对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea和苹果炭疽病菌Glomerella cingulata孢子萌发的抑制率均大于80%。活体生测结果表明,该发酵液对番茄灰霉病和黄瓜霜霉病的保护效果大于50%,治疗效果不明显。     

柠檬桉内生真菌的分离及其提取物的抗细菌活性

采用组织块分离法分离柠檬桉中的内生真菌,通过菌落观察和分子生物学相结合的方法对分离到的内生真菌进行鉴定;进一步采用薄层层析-生物自显影法测定了柠檬桉内生真菌次生代谢产物的抗细菌活性。从柠檬桉中共分离鉴定得到10株内生真菌,主要分布于附球菌属Epicoccum、镰刀菌属Fusarium、炭疽菌属Colletotrichum、Rhytidhysteron、半壳霉属Leptostroma、Campylocarpon、Neofusicoccum、白腐菌属Phlebia和Dinemasporium等9个属中。抗细菌活性的测定结果表明,内生真菌Ecf-4(Rhytidhysteron sp.,MK211261)和Ecf-1(Epicoccum sp.,MK211258)表现出最强的抑菌活性,两菌对桉树青枯病菌的抑菌斑最大直径均大于10 mm;依据其R_f值的范围和抑菌斑的最大直径,内生真菌Ecf-4的抗菌活性高于Ecf-1,表现出更强的抗细菌活性,可作为候选菌株,进一步分离和鉴定其中的活性成分。     

干旱区不同品种苹果树叶片内生真菌群落组成和功能特征

分析新疆典型干旱区轮台国家果树资源圃不同品种苹果树叶片内生真菌的分布特征及差异,为病害防治、品种选育和筛选功能微生物菌株提供参考。利用ITS基因高通量测序技术对6个品种苹果树叶片内生真菌进行测序,并比较其群落组成和功能特性。研究表明,苹果树叶片蕴含着丰富多样的内生真菌资源,共检测到真菌序列566453条,鉴定到5个门、15个纲、30个目、42个科及43个属。不同品种间内生真菌群落多样性存在一定差异,野苹果叶片内生真菌的多样性指数和丰度指数均较高。在门水平上的优势真菌菌群为子囊菌门(85.22%～98.68%),不同品种间差异不大。在纲和属上不同品种间有一定的差异,子囊菌门中的锤舌菌纲和座囊菌纲为优势纲,相对丰度分别在17.48%～69.69%和28.21%～67.59%之间;可归类的优势真菌属包括小粉孢属(17.47%～69.68%)、链格孢属(13.36%～39.35%)、枝孢霉属(2.94%～8.80%)和隐球菌属(0.20%～2.36%)。不同品种苹果树叶片真菌共有属的OTU数有42个,占各样品相对丰度的99%以上,而独有属的丰度各品种均低于1%。由于长期适应干旱区环境,在属水平...     

Significant in vitro antagonism of the laurel wilt pathogen by endophytic fungi from the xylem of avocado does not predict their ability to control the disease

The ascomycete Raffaelea lauricola causes laurel wilt, a lethal vascular disease of avocado, Persea americana, and other members of the Lauraceae plant family. Few effective control measures for laurel wilt exist and new measures are needed. In this study, biological control of the disease with endophytic fungi from avocado was examined. Thirty‐two endophytes (24 operational taxonomic units or OTUs) isolated from the xylem of healthy trees (the infection court of R. lauricola) were evaluated against R. lauricola with in vitro dual‐culture assays. Nine OTUs that showed strong in vitro antagonism of the pathogen were tested in planta against laurel wilt. In three greenhouse experiments, grafted avocado plants of Simmonds or Russell cultivars, which are both susceptible to laurel wilt, were inoculated with endophytes and, after 10–16 days, inoculated with the same isolate of R. lauricola that was used in the in vitro assays. Within 14 days of inoculation with R. lauricola, laurel wilt developed in plants that were not treated with endophytes (positive controls) but also developed in endophyte‐treated plants to the extent observed in the positive controls (P = 0.05). The pathogen colonized plants rapidly and systemically, but endophytes generally did not colonize xylem more than 2 cm above the point at which plants were inoculated. Although the tested endophytes strongly antagonized the pathogen in vitro, this did not translate to an ability to reduce development of laurel wilt. The management of laurel wilt and other plant diseases with fungal endophytes is discussed.     

玉米大斑病拮抗内生真菌筛选与鉴定

选用不同地区原生境下野生大豆不同器官分离的内生真菌,采用平板对峙法,鉴定了40株野生大豆真菌对玉米大斑病的抑制作用。结果表明,供试的40株菌株间菌落形态差异较大;光滑程度显示,36份菌落表面不光滑,3份表面光滑并显浅黄色;菌落颜色分析显示,正面白色为主,其次是黄色和粉色,反面则以紫色为主,其次为黑色和绿色;菌落生长形态分析,大多数菌落呈白色絮状突起或羊毛状菌丝;鉴定和筛选出6株野生大豆内生真菌的抑菌率变化在62.5%~82.4%之间,抑菌率从高到低依次为Y4-S(Ⅰ)、Y6R-15-1、Y5-r(Ⅱ)-1、Y6S-26、Y5R18-2-1、Y5r-12。最强拮抗菌株Y4-S(Ⅰ)、Y5-r(Ⅱ)-1、Y6R-15-1显微形态相似,呈枝状,有隔,初步判断可能来源同一属。     

苹果树皮内生真菌的分离及其对腐烂病的生物防治潜力

为了明确苹果树皮中内生真菌的种类及其对苹果树腐烂病菌的抑制作用,对25年生富士苹果健康树皮中的内生真菌进行了分离和初步鉴定,并通过室内抑菌试验和田间保护作用试验测定其内生真菌对苹果树腐烂病菌的抑制作用。分离到的126株内生真菌分属于13个属,主枝中分离到的内生真菌的种类和数量较多;对峙试验中对苹果树腐烂病菌的抑菌率在40%以上的有24株,其中87.5%的菌株为链格孢属真菌。Al 6的培养滤液对腐烂病菌菌丝生长抑制作用较强,抑制率为83.76%;Al 58对其孢子萌发抑制作用较大,抑制率为82.42%;Al 67产生的挥发物质对腐烂病菌菌丝生长的抑制作用较大,为24.41%。田间试验结果显示,用拮抗性内生真菌预先占位接种苹果树枝干,能有效抑制腐烂病菌的侵入和病斑的扩展,Al 107的抑制作用最强。     

进境苇状羊茅和多年生黑麦草种子携带内生真菌带菌率的研究

苇状羊茅内生真菌和多年生黑麦草内生真菌曾给一些国家的畜牧业造成巨大损失.为防止内生真菌随进境草籽传入我国并在中国扩散危害,我们对该2种进境草籽内生真菌的带菌率进行了研究.首先通过分离培养,得到了苇状羊茅内生真菌和黑麦草内生真菌,然后采用染色法对1998年以来收集到的从天津口岸进境的部分苇状羊茅和黑麦草种子进行了初步检验,经检验,37份苇状羊茅样品中有18个品种带菌,34份多年生黑麦草样品中14个品种带菌,带菌率最高可达86.7%.早熟禾、剪股颖等其它禾本科草籽目前尚未发现带有内生真菌.     

两株铁皮石斛内生真菌对组培苗和原球茎生长的影响

在铁皮石斛内生真菌的研究中,获得了对组培苗的生长呈现不同影响的两株内生真菌DCN-1和DCN-3,为探究其对组培苗和原球茎生长的影响,首先对已分离纯化的菌株DCN-1和菌株DCN-3进行菌株形态和ITS1-5.8S-ITS2区段序列鉴定;采用孢子悬浮液注射和菌丝体附着伤口的方法对铁皮石斛组培苗和原球茎进行接种,观察组培苗的生长情况;参照柯赫氏法则对菌株进行重新分离,并结合切片观察结果验证侵染情况。结果显示:菌株DCN-1和菌株DCN-3分别与Myceliophthora verrucosa、G ibberella moniliformis的相似度最高,其中菌株DCN-1对组培阶段和移栽后的组培苗和原球茎的生长无明显影响,菌株DCN-3会导致组培阶段的植株苗枯萎甚至死亡而对移栽后的组培苗影响不大,但抑制原球茎的生长。徒手组织切片观察及二次分离结果分析显示:两株内生真菌均成功侵染植株体内,并确定相应植株的生长状况与该两株内生真菌的侵染相关。两株内生真菌在在营养较丰富的组织培养条件下对铁皮石斛组培苗和原球茎造成不同的影响,为探究其与铁皮石斛的相互作用和促进铁皮石斛植株生长及有效活性物质产生的复合型菌制剂提供了依据。     

手掌参内生真菌及根际土壤真菌的群落组成

为筛选促生菌,采用高通量测序技术对手掌参茎、叶、果荚和根4种组织内生真菌及根际土壤真菌的群落组成进行分析。结果表明:从手掌参所有组织样品及根际土壤中共获得4 192个操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU),其中茎中OTU数量最多,为1 096个,其次为根际土壤和叶中,分别为1 048个和983个,根中最少,为397个。所有样品中OTU注释后隶属于4门15纲,优势菌群为子囊菌门,相对丰度为47.25%～81.58%。属水平上主要菌群为枝孢霉属Cladosporium、粉褶蕈属Entoloma、背芽突霉属Cadophora和赤霉菌属Gibberella,分别为果荚、土壤、根、叶和茎中优势菌群。多样性指数表明茎中真菌群落的丰富度及多样性最高,而根部最低,不同样品之间真菌群落的多样性和丰富度差异显著。热图分析和主坐标分析均表明茎、叶和果荚中内生真菌的群落组成较相似,但与根部内生真菌和土壤中真菌的群落组成存在一定差异。     

红地球葡萄健康叶片内生细菌多样性分析

本研究利用平板分离方法和变性凝胶梯度电泳(DGGE)技术,分析了北京、成都、合肥、武汉等4个地区的红地球葡萄在开花期、成熟期和衰老期健康叶片中内生细菌的群落结构。平板分离培养结果表明不同地区葡萄叶片中的内生细菌数量在8.0×10~3~2.8×10~4CFU·g~(-1)之间,其中武汉地区最高;不同生长时期葡萄叶片中的内生细菌数量在0.8×10~3~1.5×10~4CFU·g~(-1)之间,其中成熟期数量最大。扩增16S rRNA基因序列鉴定,分离获得的内生细菌属于芽胞杆菌属、泛菌属、短小杆菌属、假单胞菌属和葡萄球菌属,芽胞杆菌属为常见菌群。DGGE分析结果显示,同一地区和同一生长时期的样品间相似性较高;不同地区以成都地区的内生细菌种类最丰富;不同生长时期以成熟期种类最多。对特征条带回收测序,结果显示不可培养细菌和未确认的海洋浮游细菌在葡萄叶片中大量存在。     

The interaction of some phytopathogenic fungi with plant tissue

The phytoalexin test of Müller was applied to various host/parasite combinations. The highest production was obtained when spores ofSclerotinia fructicola were on slices of potato tuber, and spores ofColletotrichum lindemuthianum in contact with bean pod tissue. During the period of incubation of the fungus on the host plant tissue substances were formed or excreted by the plant tissue. Several amino acids and carbohydrates (saccharose, glucose and fructose) could be demonstrated by paper chromatography. Most of these substances were found at much higher concentrations in the controls (i.e. drops of double distilled water incubated upon host tissue), than in the supernatant of the spore suspension after the incubation period. Drops of spore suspension and drops of double distilled water on glass cavity slides never contained these substances, or they were in such low concentrations as to be undetectable by paper chromatography. Inhibition of spore germination by a phenolic compound was not confirmed in the used test objects and host/parasite combinations.