一株纤维素降解菌的筛选、鉴定及对饲料粗纤维降解效果的研究

通过筛选高活性纤维素酶产生菌,为微生物纤维素酶制剂的开发提供理论依据。采用刚果红染色法从绵羊粪便中分离筛选纤维素降解菌,用DNS法测定酶活力,根据酶活力复筛后,分离得到一株能够产生高活力纤维素酶和β-葡萄糖苷酶的目的菌B5。通过形态学观察和16S rDNA序列测定,对B5菌株进行种属鉴定;应用B5菌株对四种纤维性饲料进行消化降解实验,探究菌株B5降解饲料粗纤维的特性。形态学观察确定B5菌落符合放线菌的特征;分子学鉴定其16S rDNA序列全长1 585 bp,在进化关系上与链霉菌属(Streptomyces sp.)聚成一簇,同源性高达99%。鉴定B5菌株属于链霉菌属成员。B5菌株对饲料粗纤维降解效率与酶活力显著相关,对饲料粗纤维降解效率与饲料中纤维素含量相关性不明显。     

纤维素分解菌的分离筛选及特性研究

试验旨在从鹅粪便中分离纤维素分解菌用于动物微生态制剂、生物堆肥及生物除臭剂的研究。试验采用刚果红染色法和摇瓶发酵法从鹅粪便中分离筛选出能高效降解纤维素的细菌,并用革兰氏染色法和16S rRNA基因比对法对其进行鉴定,然后研究该菌的耐热、抑菌及除臭特性。结果表明:从鹅粪便中分离到了1株D/d值为4.8(即透明圈直径为2.4 cm、菌落直径为0.5 cm)以及羧甲基纤维素酶活为0.37 U/mL的纤维素分解菌;经鉴定,该菌为芽孢杆菌属的甲基营养型芽孢杆菌,命名为Bacillus methylotrophicus G-6;该菌耐高温,在75℃时其存活率达到80%以上,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定抑制作用,对鸡粪中H2S和NH3的去除率分别达到57.81%和29.26%。     

金针菇菌糠纤维素降解菌的分离、生物学特性及酶活性分析

[目的]分离筛选金针菇菌糠来源的纤维素降解菌,研究其生物学特性和所产纤维素降解酶活性,为菌糠资源的饲料化利用提供技术支撑。[方法]采用稀释涂布法接种金针菇菌糠样品,采用硝酸纤维素钠培养基进行纤维素降解菌的分离培养,利用刚果红培养基初步分析分离菌株的纤维素降解能力;通过16S rDNA测序分析和生物安全性预测挑选候选菌株,然后进行生理生化特性分析、不同温度下生长曲线测定以及纤维素降解酶活性动态分析。[结果]样品经硝酸纤维素钠培养基筛选培养后获得30个独立菌落,所有菌株在刚果红培养基上都能形成明显的透明圈,部分菌株具有较强的纤维素降解能力。16S rDNA测序分析显示,30株分离菌被鉴定为韩国假单胞杆菌、明斯特小陌生菌、深红沙雷菌等9个菌种;结合生物安全性预测及纤维素降解能力初筛结果,选取韩国假单胞菌（Pseudomonas koreensis,编号：JK-32）、明斯特小陌生菌（Advenella mimigardefordensis,编号：JK-52）、深红沙雷菌（Serratia rubidaea,编号：JK-56）、马葡萄球菌（Staphylococcus equorum,编号：J...     

降解纤维素菌株筛选及其鉴定

筛选高效降解纤维素菌株,为秸秆饲料的生产工艺优化奠定基础。以玉米秸秆为主要研究对象,通过降解纤维素菌株的富集培养、分离提纯及玉米秸秆的降解率和CMC酶活性测定方法,对采自新疆的26个土样在25℃±1进行富集培养30 d,初步得到能以秸秆为唯一碳源生长的34株霉菌,并对其进行分离提纯,得到14株霉菌,通过CMC酶活实验选出酶活最强的四株霉菌（M3〉M42〉M6〉M21）,并对其作出形态学初步鉴定。结果为：M6和M42属于青霉属,M3和M21属于曲霉属。试验表明筛选得到的菌株都具有较强的降解玉米秸秆所需要的酶系,并有较好的玉米秸秆生物降解的研究价值。     

纤维素降解菌的分离筛选及其酶活研究

从腐烂的秸秆、树叶、玉米地土壤及内蒙古农业大学动物科学与医学学院畜粪址掷氲?株降解纤维素能力强的菌株,培养7 d时直径分别达到3 920.8,808.8,541.8和5110.56μm;在pH值分别为6.0和6.5时降解率最高;酶活最高分别可达203,301,262和276 U.     

肉牛粪污中纤维素降解菌的分离筛选

为了获得有效降解肉牛粪污中纤维素的细菌,采用以羧甲基纤维素钠为碳源的方法对牛粪及其自然堆肥样品进行纤维素降解菌的分离,对已分离菌株进行形态学和分子生物学鉴定,再结合纤维素刚果红水解圈测定和滤纸条降解试验做进一步研究。结果表明,以羧甲基纤维素钠为碳源,初步分离得到牛粪样品及堆肥中32株纤维素降解菌,进一步筛选得到有刚果红水解圈菌株4株,分别为XQ-1、XQ-2、XQ-3、XQ-4,其对滤纸条具有一定的降解能力,经16S rDNA鉴定,4株菌株分别为大肠埃希菌（Escherichia coli）、黏质沙雷菌（Serratia marcescens）、雷氏普罗威登斯菌（Providencia rettgeri）和费格森埃希菌（Escherichia fergusonii）。     

羊粪中纤维素降解菌的筛选、鉴定及评价

为发掘优良纤维素降解菌株,筛选羊粪堆肥发酵菌剂菌种资源,本研究以滤纸条为唯一碳源,从新鲜羊粪中分离出26株具有纤维素降解能力的菌株。通过测定其纤维素酶活力与秸秆降解率,筛选出7株优良纤维素降解菌株,并对7株菌进行16S rDNA序列比对,确定其分类学地位。利用线性拟合和多元回归解析菌株产酶活力与秸秆降解率之间的关系。结果表明,7株菌的全酶活性为1.03～2.83 U·mL^-1、外切酶为3.42～5.78 U·mL^-1、内切酶为1.24～3.25 U·mL^-1和β-葡萄糖苷酶为1.09～2.259 U·mL^-1。经鉴定分别为山原申氏菌(Shinella yambaruensis)、鸡眼草申氏菌(Shinella kummerowiae)、土地鞘氨醇盒菌(Sphingopyxis terrae subsp)、植物内生成对杆菌(Dyadobacter endophyticus)、潮湿纤维单胞菌(Cellulomonas uda)、水原假黄单胞菌(Pseudoxanthomonas suwonensis)等...     

湿地土壤中纤维素降解菌的分离筛选研究

为了得到更高效地分解堆肥中纤维素成分的细菌,以羧甲基纤维素钠为碳源,从土壤样品中初步分离能降解纤维素的细菌,对其进行革兰染色和16S rDNA序列分析;通过纤维素刚果红水解圈测定、滤纸条降解试验和纤维素酶活力测定对已分离保存的菌株做进一步筛选。结果表明,以羧甲基纤维素钠为碳源,初步分离得到土壤中纤维素降解菌41株,进一步筛选到具有刚果红水解圈菌株6株,6株菌中可以更好地降解滤纸条的有3株,分别为XQ-8、XQ-10和XQ-11,经16S rDNA鉴定该3株菌中有2株为吉氏纤维素菌（Cellulomonas gilvus）,1株为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）,且该3株菌的纤维素酶活力分别为（28.95±1.48）、（54.70±1.56）、（58.85±3.75）U/mL。该研究从土壤中筛选得到了3株具有较高纤维素酶活力的细菌,可以作为有效降解纤维素的潜力菌株进行粪污堆肥发酵剂的研制。     

鹿粪纤维素降解细菌的筛选及堆肥应用

为解决鹿粪堆肥中纤维素难以降解的问题,提高鹿粪堆肥的发酵速度和发酵质量。通过羧甲基纤维素钠培养基和刚果红染色透明圈以及酶活测定的方法,筛选得到了纤维素降解能力较高的2株细菌A27和A36。A27的羧甲基纤维素酶(CMCase)活力和滤纸酶(FPA)活力分别为0.158 IU/mL和0.073 IU/mL。A36的CMCase活力和FPA活力分别为0.151 IU/mL和0.042 IU/mL。经鉴定A27和A36分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus sonorensis)。菌株拮抗试验表明：A27和A36之间没有明显的拮抗作用,并以1∶1比例混合发酵时的纤维素酶活力最高,CMCase活力和FPA活力分别为0.196 IU/mL和0.100 IU/mL。因此,将A27和A36以1∶1的比例构建复合菌剂应用于鹿粪堆肥中,构建K组(不接种菌剂)、S组(接种复合菌剂)、D组(接种市售菌剂)3个堆肥组,结果表明：接种A27和A36的复合剂能够促进堆肥升温,延长嗜热期,提高堆肥质量。     

纤维素降解菌的筛选及在狼尾草青贮中使用效果评价

纤维素降解菌对改善牧草品质和提高动物对饲草的利用率具有重要作用。引进多种纤维素降解菌并从中筛选出酶活力较高的11,21和36号菌株。利用筛选出的3株菌株的发酵液,开展在青贮杂交狼尾草中的使用效果评价[设4个处理,处理1为未添加菌液的对照组(CK),处理2,3,4分别添加11,21,36号菌株菌液]。结果表明,添加纤维素降解菌能提高青贮牧草乳酸含量,处理2,3,4的乳酸含量比CK提高了19.42%(P<0.05),38.35%(P<0.05)和4.85%(P>0.05);添加纤维素菌液进行青贮的3个处理的中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和半纤维素(HC)的含量均低于CK和青贮前,其中处理3的NDF、ADF和HC含量最低,表明筛选出的3种纤维素降解菌菌株均能改善青贮品质,不同程度地降解了牧草纤维素的含量,其中处理3(21号菌株)降解纤维素的效果最为明显,青贮料营养品质最好。     

几种禾草内生固氮菌的分离及固氮活性测定

从13种禾草组织中分离内生细菌,研究比较不同禾草品种,不同组织中内生细菌的菌群密度和分布特点;筛选内生固氮菌菌株,经乙炔还原法测定其固氮酶活性.结果表明,不同禾草品种的内生细菌菌群密度有较大差异,菌群密度为8.70×104～8.06×106CFU/g鲜重.根组织中菌群密度高于叶.采用CCM培养基结合无氮选择性培养基筛选获得21株内生固氮菌菌株,其固氮酶活性在8～2865 nmol/h·mL.研究结果证明从禾草中可分离到具有高固氮酶活性的菌株,具有开发应用的潜力.     

尾菜青贮乳酸菌的分离筛选及其青贮菌剂制备

从市售泡菜中分离筛选适合尾菜青贮的乳酸菌,筛选获得产酸能力强、青贮效果好的2株菌株,通过细菌形态学、API 50CH试剂条检测,鉴定SD2为植物乳杆菌,SD4为发酵乳杆菌。对两株菌株在5 L立瓶中分别进行培养,确定了各自的培养最适收获期和两株菌株配比,制备的尾菜青贮菌剂总活菌数大于1.0×109cfu/mL。     

一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

以鸡肠道和泡菜为分离源,采用常规微生物学方法分离乳酸菌,筛选到一株产酸性能良好的菌株W7。结合对菌株的形态观察、生理生化试验以及16S rRNA基因序列分析,对菌株进行鉴定,并对W7进行特性试验研究。结果表明,W7为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,在培养22h时,活菌数最高;耐酸效果好,在pH值为2.0时,存活率仍然为100%;在胆盐浓度为0.30%时,仍然可以生长;抑菌效果较好;黏附率为79.9%。     

红茶菌中乳酸菌的分离与生物学特性

红茶菌是酵母菌、醋酸菌和乳酸菌的共生物。为进一步研究红茶菌中乳酸菌的生物学特性,从红茶菌中分离纯化出4 株乳酸菌（HC、HD、HQ、HL）,以形态和生理生化鉴定、产酸情况、生长性能、耐盐性、耐酸性和耐胆盐性测定综合评价红茶菌中4 株乳酸菌的生物学特性。结果表明：4 株菌均为植物乳杆菌;4 株乳酸菌的最适生长温度均为30 ℃,在14 h后均处于稳定期;菌株HC、HD、HQ和HL的最适接种量（体积分数）分别为4%、4%、6%和6%;4 株乳酸菌均有一定的耐盐性,耐酸和耐胆盐性均较好,其中HQ以最佳。     

不同退化程度柽柳灌丛的土壤理化和生物学特性

为揭示柽柳灌丛在退化过程中土壤特性的变化,采用时间代替空间的生态学研究方法,测定和分析了民勤湖区绿洲-荒漠过渡带不同退化程度灌丛沙堆土壤的理化性质、酶活性和微生物数量等15个指标值的变化特征及相关性。研究结果表明:1)随着退化程度加剧,容重增大,有机质和阳离子代换量呈先增大后减小,土壤含水率、全盐含量和电导率减小,pH值保持平稳;随土层深度的加深,容重增大,土壤含水率、有机质、阳离子代换量减小,全盐含量和电导率5～10cm土层较大。2)微生物数量与酶活性随退化程度的加剧呈减少或降低趋势,随深度的加深而减少或降低,而且除个别土层外,整体都呈显著性变化。3)除土壤含水率和pH值与其余指标间的相关性不显著外,土壤理化性质间均呈显著性相关,土壤生物学特征之间也呈显著性相关,土壤理化性质和土壤生物学特性间的相关性除个别指标间相关性不显著外,其余均显著相关。研究区的柽柳在退化灌丛沙堆的土壤理化性质和生物学特征基本都出现衰退现象,建议在构建综合评价体系和选择恢复保育措施时要将植被与土壤综合考虑。     

Silage fermentation and ruminal degradation of stylo prepared with lactic acid bacteria and cellulase

In order to improve the silage fermentation of stylo (Stylosanthes guianensis ) in tropical areas, stylo silages were prepared with commercial additives Lactobacillus plantarum Chikuso‐1 (CH 1), L. rhamnasus Snow Lact L (SN ), Acremonium cellulase (CE ) and their combination as SN +CE or CH 1 + CE , and the fermentation quality, chemical composition and ruminal degradation of these silages were studied. Stylo silages treated with lactic acid bacteria (LAB ) or cellulase, the pH value and NH ₃‐N ? total‐N were significantly (P  <  0.05) decreased while the ruminal degradability of dry matter (DM ), crude protein (CP ), neutral detergent fiber (aNDF om) and acid detergent fiber (ADF om) were significantly (P  <  0.05) increased compared to control. Compared to LAB or cellulase‐treated silages, the DM , CP contents and relative feed value (RFV ), and the ruminal degradability in LAB plus cellulase‐treated silages were significantly (P  <  0.05) higher, but the aNDF om content was significantly (P  <  0.05) lower. CH 1 + CE treatment was more effective in silage fermentation and ruminal degradation than SN +CE treatment. The results confirmed that LAB or LAB plus cellulase treatment could improve the fermentation quality, chemical composition and ruminal degradation of stylo silage. Moreover, the combined treatment with LAB and cellulase may have beneficial synergistic effects on ruminal degradation.     

不同退化程度柽柳灌丛的土壤理化和生物学特性

为揭示柽柳灌丛在退化过程中土壤特性的变化,采用时间代替空间的生态学研究方法,测定和分析了民勤湖区绿洲-荒漠过渡带不同退化程度灌丛沙堆土壤的理化性质、酶活性和微生物数量等15个指标值的变化特征及相关性。研究结果表明:1)随着退化程度加剧,容重增大,有机质和阳离子代换量呈先增大后减小,土壤含水率、全盐含量和电导率减小,pH值保持平稳;随土层深度的加深,容重增大,土壤含水率、有机质、阳离子代换量减小,全盐含量和电导率5~10 cm土层较大。2)微生物数量与酶活性随退化程度的加剧呈减少或降低趋势,随深度的加深而减少或降低,而且除个别土层外,整体都呈显著性变化。3)除土壤含水率和pH值与其余指标间的相关性不显著外,土壤理化性质间均呈显著性相关,土壤生物学特征之间也呈显著性相关,土壤理化性质和土壤生物学特性间的相关性除个别指标间相关性不显著外,其余均显著相关。研究区的柽柳在退化灌丛沙堆的土壤理化性质和生物学特征基本都出现衰退现象,建议在构建综合评价体系和选择恢复保育措施时要将植被与土壤综合考虑。     

中药复方消毒剂对鸡舍内空气浮游菌杀灭和有害气体降解的实验研究

为了解国内某厂家生产的植物源中药复方消毒剂的对鸡舍现场的空气沉降菌和有害气体降解效果,试验重复3次,每次设计消毒前1h,消毒后1h、4h、10h和24h五个时间监测点,采用了细菌自然沉降法和有害气体检测仪对鸡舍内空气浮游菌含量和氨气、硫化氢等有害气体进行了检测,同时还挑选5个养殖工人对鸡舍内除臭效果感官判定。3个批次结果均显示,消毒剂按1:500和1:1000两个浓度稀释使用4h后,鸡舍现场有效除菌率就达到90%以上;消毒1h后与消毒前比较,对氨气和硫化氢的降解差异显著;消毒24h后,通过养殖工人感官评判,有显著除臭效果。结果表明,该实验设计的中药消毒剂对鸡舍内环境有显著改善作用。     

解淀粉芽孢杆菌复合菌剂对玉米秸秆的降解作用及表征

为获得能提高秸秆饲草品质的微生物发酵菌剂,本研究在前期获得2株具有木质素和纤维素降解能力的解淀粉芽孢杆菌菌株的基础上,将两者混配成复合菌剂,考察复合菌剂对玉米秸秆的降解作用,并通过傅立叶红外光谱(FTIR)、核磁共振氢谱(¹H-NMR)、扫描电镜(SEM)及气质联用色谱(GC/MS)等技术对玉米秸秆的微观结构及降解产物进行表征。研究发现,复合菌剂可以有效降解玉米秸秆中的木质纤维素。在发酵24 d时,玉米秸秆中木质素、纤维素和半纤维素的降解率分别达到48.4%,30.5%和41.4%。FTIR和¹H-NMR谱图中能观察到木质纤维素分子结构中主要连接共价键,如木质素单体间的β-O-4和β-β键、木质素与碳水化合物连接键以及碳水化合物中糖环内的价键等明显断裂,木质纤维素被部分降解;SEM扫描电镜图则显示发酵后秸秆的组织结构出现松散和破坏。发酵后秸秆中小分子物质的GC/MS分析结果显示,其中包含苯丙胺和苯丙酸等保留苯丙烷结构单元的木质素单体衍生物以及苄醇和苯甲酸酯类等木质素单体被进一步降解后的芳香族化合物。玉米秸秆中碳水化合物的GC/MS分析结果表明:复合菌剂可将玉米秸秆中的结构性多糖等大分子碳水化合物降解成葡萄糖、木糖、甘露糖及乳糖等还原性单糖。并利用这些还原性单糖生长代谢,进一步产生乙二醇、丙三醇及短链脂肪酸类等代谢产物。以上研究结果表明,解淀粉芽孢杆菌复合菌剂可有效降解玉米秸秆中的木质纤维素,在玉米秸秆饲草化利用中极具应用前景。