桃(Prunus persica (L.) Batsch.)品种核心种质的构建与评价

为构建桃品种核心种质,通过对56份桃(Prunus persica(L.) Batsch.)初级核心种质的形态农艺性状数据(MOR)和SSR等位基因数据的分析,研究了不同聚类取样方法和完全随机取样方法下9种取样比例的遗传多样性指数、保留比例及各频率段等位基因的丢失比例。结果表明:聚类取样的方法优于完全随机取样,并以在80%的取样比例下MOR结合SSR数据聚类取样的效果最好,利用此方案构建的桃品种核心种质共包括45份材料,该核心种质的基因遗传多样性指数最高,保留了初级核心种质100%的形态农艺性状和96.6%的SSR等位基因,在出现频率低于0.05的等位基因中共丢失了2个等位变异,保留了出现频率在0.05~0.10的所有等位基因;利用6个数量性状对所构建的核心种质的代表性检测表明所构建的核心种质很好地代表558份桃原始种质的遗传变异。     

桃树叶片气孔形状与大、小气孔分布的研究

为探讨桃叶片气孔形状与桃属植物进化的关系,以桃亚属6个种139份材料为试材,观察了桃树叶片气孔形状和大、小气孔的分布。结果表明:桃气孔形状有3种,即近圆形、细长形和近椭圆形。野生种都为细长形,栽培种中近椭圆形的最多,占65.07%,近圆形和细长形分别占到12.95%和17.99%。野生种无大、小气孔的分布,栽培种有大、小气孔的分布,其分布情况可以分为4类,第Ⅰ类:无大、小气孔的分布,气孔大小一致;第Ⅱ类:有大气孔分布,但无小气孔的分布,大气孔主要分布于梢脉顶端;第Ⅲ类:仅有小气孔,无大气孔;第Ⅳ类:既有大气孔,又有小气孔,大气孔分布于梢脉顶端,而小气孔则分布于普通气孔之间。气孔变圆及大、小气孔的分化是进化的标志。光核桃气孔细长,无大小气孔分化,是较原始的类型。没有发现光核桃与栽培种有直接的关系。     

桃实生树不同节位叶绿素、可溶性蛋白质的动态变化

对大久保桃的2年生自然实生树不同节位叶片的叶绿素含量、叶片和韧皮部可溶性蛋白质含量进行测定。结果表明:46~50节叶片叶绿素和韧皮部可溶性蛋白含量均发生明显变化,是桃实生树生理状态发生变化的临界点,大久保桃实生树的童期结束于46~50节,成年营养生长期开始于51~55节。     

桃幼胚子叶不定芽发生的初步研究

以奉化‘玉露'和‘湖景蜜露'桃为试材,分别在盛花后45 d和55 d采集桃幼胚,以MS+2% 蔗糖+0.75% 琼脂为基本培养基,其中加入不同浓度配比的NAA和BA为调节激素.并置培养基于(26±1) ℃,光照强度2000～3000 lx,16 h/8 h光暗周期的环境下,研究激素配比、品种、取样时间对桃子叶再生能力的影响,并对不定芽发生部位进行了观察.结果表明:NAA 0.25 mg/L+BA 5.0 mg/L、NAA 1.0 mg/L+BA 5.0 mg/L、NAA 0.50 mg/L+BA 10.0 mg/L 3种激素配比有利于桃子叶再生;‘玉露'的再生能力较高于‘湖景蜜露',盛花后55 d的幼胚子叶比花后45 d的幼胚子叶稍易再生;桃幼胚子叶不定芽可产生于子叶的背茎面、向茎面等各部位.     

Molecular Identification and Cultivar Fingerprints of Prunus persica （L.） Batsch Germplasms

[Objective] The aim was to study the molecular identification and cultivar fingerprints of Prunus persica （L.） Batsch germplasms.[Method] Sixty peach genotypes,representing China common local cultivars and European samples were screened by microsatellites （simple sequence repeats,SSRs） and Inter-Simple Sequence Repeat （ISSR） markers.[Result] 26 reproducible bands were amplified by Nine SSR primers,and 24 of which were polymorphic; 236 bands were amplified by 30 ISSR primers,and 113 of which were polymorphic.31 genotypes were discriminated with 1-3 distinct polymorphic bands generated from the primers ISSR and SSR.Seven cultivar-specific ISSR fragments and two SSR unique alleles obtained from this study were available to be converted into Sequence Characterized Amplified Region （SCAR） markers.The genetic similarity coefficient （GS） estimated from these molecular data averaged were 0.939 （ranged from 0.856 to 0.983） for ISSR and 0.646 （ranged from 0.240 to 1.000） for SSR,respectively.The combined grouping association indicated that most local Chinese peach cultivars and exotic accessions were clustered together.This could be related to the mode of introduction and maintenance of the peach cultivars involving limited foundation germplasm,exchange of cultivars between plantations,and periodic development of new recombinant cultivars following sexual reproduction.[Conclusion] The results obtained in this work would help to improve the conservation,molecular identification and management of peach germplasm in breeding.     

Molecular Identification and Cultivar Fingerprints of Prunus persica (L.) Batsch Germplasms

[Objective] The aim was to study the molecular identification and cultivar fingerprints of Prunus persica (L.) Batsch germplasms.[Method] Sixty peach genotypes,representing China common local cultivars and European samples were screened by microsatellites (simple sequence repeats,SSRs) and Inter-Simple Sequence Repeat (ISSR) markers.[Result] 26 reproducible bands were amplified by Nine SSR primers,and 24 of which were polymorphic; 236 bands were amplified by 30 ISSR primers,and 113 of which were polymorphic.31 genotypes were discriminated with 1-3 distinct polymorphic bands generated from the primers ISSR and SSR.Seven cultivar-specific ISSR fragments and two SSR unique alleles obtained from this study were available to be converted into Sequence Characterized Amplified Region (SCAR) markers.The genetic similarity coefficient (GS) estimated from these molecular data averaged were 0.939 (ranged from 0.856 to 0.983) for ISSR and 0.646 (ranged from 0.240 to 1.000) for SSR,respectively.The combined grouping association indicated that most local Chinese peach cultivars and exotic accessions were clustered together.This could be related to the mode of introduction and maintenance of the peach cultivars involving limited foundation germplasm,exchange of cultivars between plantations,and periodic development of new recombinant cultivars following sexual reproduction.[Conclusion] The results obtained in this work would help to improve the conservation,molecular identification and management of peach germplasm in breeding.     

桃(Prunus persica L.)茎尖培养技术的研究

筛选出了适合于桃品种‘北农早艳’茎尖(0.2 mm 和0.5 mm)培养的培养基为:G培养基附加 IBA 0.25 mg/L+BA 0.5 mg/L+GA_3 1.0 mg/L+LH 500.0 mg/L。茎尖用聚氨酯海绵作支撑物的液体培养比琼脂培养成活率高2～5倍,且生长迅速。获得了0.2 mm 长茎尖的生根植株。     

桃光合特性的研究

对桃9个品种叶片光合特性的研究表明,在晴天自然条件下,净光合速率日变化旱典型的双峰曲线,第一次高峰出现在上午10时,光合"午休"现象比较明显,第二次高峰出现在下午16时.日平均净光合速率多在5-9CO2·mol·m2·s-1之间,肉蟠桃的最高,艳光的最低,除天津水蜜与深州离核水密之间无显著差异外,其他品种之间均有极显著差异.另外,环境因子对光合速率有很大的影响,以光合有效辐射、温度、二氧化碳浓度的影响最大,因此可以通过育种和改善外界条件来提高果树的产量和品质.     

桃基因组中R类抗病基因同源序列的克隆与序列分析

许多抗病基因均具有核苷酸结合位点(NBS)和富含亮氨酸重复区(LRR)。根据已知的NBS-LRR型抗病基因蛋白质的保守序列,设计简并引物,用以扩增桃基因组中的抗病基因同源序列。获得一条大小约500 bp的扩增片段,克隆测序后得到4个NBS-LRR类抗病基因同源片段(PNBS1、PNBS2、PNBS3、PNBS4)。推导的氨基酸均具有P-loop(激酶1a)保守区和中间的激酶2a、激酶3a保守区,除PNBS4外,均具有3端疏水结构域。它们与已克隆的N、L6、PRS2 等抗病基因在核苷酸水平上的同源性为21 1%~58 8%;在氨基酸水平上的同源性为18 8%~41 4%。这些抗病基因同源片段(RGA)可做为分子标记筛选桃的抗病候选基因。     

雨花2号桃离体微繁殖技术研究

以桃品种雨花2号春季嫩梢茎段为外植体,通过外植体消毒方法的筛选,以及腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养基的筛选,以建立该品种的快繁体系,并解决桃离体快繁过程中常见的玻璃化和黄化问题.研究结果表明:最佳的外植体消毒方法为先以75.00%酒精浸润20 s,再用0.10% HgCl2 0.01%吐温对外植体表面消毒8 min;LP 6-BA 0.80 mg/L IBA 0.30 mg/L最利于腋芽萌发;LP 6-BA 1.50 mg/L IBA 0.20 mg/L的继代增殖培养基上4周芽增殖倍数达3.5～4.0,且植株健壮;适宜生根培养基为MS IAA 1.50 mg/L.同时,研究发现,在继代培养基中添加0.20 mg/L GA3可使黄化苗转绿,培养基中Ca2 浓度增加至0.729 mmol/L可以有效地抑制和消除玻璃化现象,培养基中使用6.50 g/L琼脂粉也可抑制玻璃化苗的产生.     

桃叶绿体全序列微卫星分布规律研究

对桃叶绿体基因组全序列中微卫星的分布规律进行了全面分析.结果发现,cpSSR主要分布在大单拷贝区和小单拷贝区,以完全重复为主.单碱基重复最多,占总数的75.68％,二碱基重复占21.62％,单碱基重复主要以(A)n和(T)n为主,二者共占总数的67.57％,二碱基重复主要是(AT)n或(TA)n,占总数的20.47％.单碱基重复(A)n和(T)n的重复次数分别以11次和10次最多,而二碱基重复(AT)n、(TA)n和(TC)n的重复次数均为5～6次.研究结果为开发桃李属植物叶绿体通用引物提供了理论依据.     

桃单果重与6个物候期性状的遗传关联分析

【目的】关联分析作为传统连锁分析方法的有效补充,可以鉴定果树的数量性状位点（Quantitative Trait Loci, QTLs）。本研究通过关联分析定位桃单果重及6个物候期性状的QTLs,以研究性状间的遗传相关,为提高桃品质育种的效率奠定理论基础。【方法】以来源于中国6个生态群的104份桃地方品种为试材,利用分布于桃8条连锁群上的53对SSR（Simple Sequence Repeats）引物,用STRUCTURE 2.3.3和TASSEL 2.0.1软件分别对群体结构和全基因组SSR位点间的连锁不平衡（Linkage Disequilibrium, LD）状况进行分析。在结合单果重和6个物候期性状表型数据后进行关联分析,以定位各性状的QTLs。【结果】群体结构显示供试的104份桃地方品种基于数学模型可以分为5群;LD分析表明在53个SSR位点组成的1378个成对组合中,23个成对位点存在着显著LD且得到统计概率支持。虽然相关性分析表明单果重只与展叶期显著相关,但关联分析却显示单果重不仅与盛花期、展叶期、果实成熟期和落叶期均具有相同的关联位点;而且桃单果重的关联位点与不同连锁群上盛花期、果实发育期和落叶期的关联位点也存在显著的LD现象。对单果重具有最大增效表型效应的等位变异UDP96-013-206同时具有提前花期1.46 d、延迟果实成熟期13.77 d、延迟落叶期2.17 d的表型效应。【结论】本研究得到27个与桃单果重及6个物候期性状关联的QTLs,部分位点与前人定位的连锁群相同。关联分析表明单果重与盛花期、展叶期、果实成熟期、果实发育期和落叶期确实存在遗传相关,主要表现为这几个性状可能受到基因多效性调控或者受连锁群内及连锁群间存在连锁或关联关系的基因调控。     

毛桃对盐胁迫的光合、抗氧化和离子响应

在盆栽及温室条件下,对毛桃[Prunus persica(L.)Batsch]实生苗进行不同浓度盐(NaCl)胁迫处理,测定其叶片的光合作用、抗氧化防御体系及无机离子浓度,探讨毛桃在盐胁迫下的一些生理生化响应。结果表明,在盐胁迫下毛桃叶片光合速率、气孔导度、水分利用率下降,而蒸腾速率上升。随着NaCl浓度的升高,毛桃叶片过氧化氢和超氧阴离子自由基浓度明显升高,膜脂过氧化产物丙二醛含量增加,表明叶片受到伤害。酶防御系统中SOD快速响应,在盐胁迫后迅速升高;非酶防御系统中可溶性蛋白和还原性抗坏血酸受到盐胁迫的抑制。100mmol/LNaCl处理对叶片还原型谷胱甘肽的含量没有影响,但200mmol/L的NaCl处理则显著促进了还原型谷胱甘肽的含量。在盐胁迫下,毛桃叶片Na+和Cl-浓度升高;K+、Mg2+、Ca2+受盐胁迫刺激后也升高;其他离子与Na+的比值在盐胁迫下减小。     

短时高温打破早露蟠桃花芽休眠效应研究

以4年生早露蟠桃的1年生枝条为试材,研究40℃、45℃、50℃3个梯度高温短时间处理对早露蟠桃花芽萌芽率以及花芽和枝皮内O2-含量、MDA含量的影响,探讨短时高温处理对桃花芽自然休眠的调控作用。结果表明:12月21日各短时高温处理,均不同程度的解除花芽休眠,早露蟠桃枝皮及花芽内O2-含量、MDA含量的影响,因处理温度和处理持续时间长短的不同而异。其中50℃3 h处理效果最好,其枝皮和花芽内MDA含量以及O2-含量均极显著高于对照。     

桃基因组ACC合成酶基因的分离及其生物信息学分析

根据桃(Prunus persica L．Batch)品种Hakuho中与成熟相关的ACC合成酶基因cDNA序列,设计了两对特异引物,从新白花水蜜桃基因组DNA中,利用PCR方法扩增得到两个片段,经过拼接获得了ACC合成酶基因的完整序列(GenBank accession：AY994054),并对其进行了生物信息学分析。该序列全长2496bp,包括4个外显子和3个内含子,4个外显子共长1479bp。桃ACC合成酶基因编码区与蔷薇科梅(Prunus mume)和梨(Pyrus communis)的同源性分别为98％和84％,除终止密码子外,编码492个氨基酸,其中有SLSKDMGLPGLR共12个氨基酸残基的保守区,被认为是ACC合成酶的活性中心,位于274至285氨基酸残基处。推测其酶蛋白分子量为55kDa,pI为8．26。     

肥城桃果实不同发育时期的香气组分及其变化

以21年生‘白里’肥城桃为研究材料,运用气–质联用技术(GC–MS),对肥城桃果实绿熟期、白熟期和完熟期的香气组分及其含量变化进行研究。结果表明,在果实中共检测到63种香气成分,这些香气物质主要为醛类、醇类、酯类和内酯类化合物。醛类物质主要为C6醛类和芳香醛类化合物;醇类物质主要为C6醇类和C5醇类化合物,芳香醇类化合物含量极少,C6醇类化合物含量随果实成熟逐渐降低。随果实的成熟,酯类物质的含量迅速上升,这主要是由乙酸乙酯含量增加所致。γ–己内酯、γ–庚内酯、δ–辛内酯仅在白熟期和完熟期能检测到。己醛、(Z)–3–己烯醛、(E,E)–2,4–己二烯醛、2–环己烯–1–醇是未成熟果实的特征香气成分;(E)–2–己烯醛、乙酸乙酯、γ–己内酯、γ–庚内酯、δ–辛内酯是成熟果实的特征香气成分。     

桃分子遗传图谱构建及红肉性状基因定位概述

红肉桃果肉颜色鲜艳,富含酚类物质和花色苷,抗氧化能力强,营养与保健价值高,成为目前研究热点之一。利用先进的分子标记技术辅助育种是加快红肉桃育种进程的重要手段,而构建高密度的遗传连锁图谱是红肉桃性状快速、定向改良的前提。对近年来国内外桃分子遗传图谱构建及红肉性状基因定位的研究进展进行了综述,并对今后的研究方向提出了建议,旨在为红肉桃品质改良和分子育种提供参考依据。     

桃SERK2 的克隆及其在不同状态愈伤组织中的表达分析

【目的】 分离克隆桃（Prunus persica L.）体细胞胚胎发生相关类受体蛋白激酶（somatic embryogenesis receptor-like kinases,SERKs）基因SERK2 ,检测其在不同状态桃愈伤组织中的表达差异,分析SERK2 与胚性愈伤组织发生的关系,为揭示组织培养困难树种桃胚性愈伤组织产生的分子机理奠定基础。【方法】 采用同源克隆法获得PpSERK2 的cDNA全长序列,运用TMPred、DNAMAN和MEGA 5.0等生物信息学软件对序列进行分析;以‘秋蜜红’花药为外植体,接种至添加2.0 mg·L ^-1 6-BA和1.0 mg·L ^-1 2,4-D的NN69培养基诱导愈伤组织;将获得的不同状态愈伤组织制作石蜡切片并进行组织细胞学观察;通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对PpSERK2 在4种不同状态愈伤组织中的表达进行分析。 【结果】 克隆获得‘秋蜜红’PpSERK2 的cDNA全长序列1 881 bp,编码626个氨基酸,其蛋白质理论分子量为68.99 kD,理论等电点为5.38,具有完整的SERK蛋白的保守结构域,与牡丹（Paeonia suffruticosa ）等物种的同源性为67.88%—92.71%,且与秘鲁番茄（Solanum peruvianu ）和温州蜜柑（Citrus unshiu ）的相似性最高。在与其他物种的SERK蛋白构建的系统进化树中,PpSERK2与SpSERK1、CitSERK1和PsSERK2等聚在一起,与同源性比对结果一致。以‘秋蜜红’花药为外植体诱导获得4种不同状态的愈伤组织,组织细胞学观察发现黄色疏松状（球形胚出现）、绿色紧实状（心形胚出现）和浅黄色透明状（尚未完全形成的鱼雷形胚结构出现）的3种状态的愈伤组织细胞小、排列紧密;而黄白色水渍状愈伤组织细胞体积大、排列不规则,细胞质稀且染色浅。根据形态学和组织学的鉴定结果,可知黄色疏松状、绿色紧实状和浅黄色透明状的3种状态的愈伤组织均为胚性愈伤组织,而黄白色水渍状愈伤组织为非胚性愈伤组织。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明,PpSERK2 在‘秋蜜红’3种状态的胚性愈伤组织中的表达量显著高于非胚性愈伤组织,且在3种胚性愈伤组织中的表达量有差异,其中在黄色疏松状愈伤组织中表达量最高,绿色紧实状次之,浅黄色透明状中最低。【结论】 克隆获得PpSERK2 的cDNA全长序列,其在3种状态的胚性愈伤组织中的表达量明显高于非胚性愈伤组织,且在黄色疏松状胚性愈伤组织中的表达量最高,PpSERK2 在桃体细胞胚发育的早期发挥作用。     

喷施沼液对温室油桃叶片营养元素及果实品质的影响

以日光温室栽培4年生油桃品种‘艳光'为试材,通过叶面喷施不同浓度的沼液,研究了沼液对温室油桃叶片营养元素及果实品质的影响.结果表明:喷施沼液对‘艳光'油桃叶片营养及果实品质都有促进作用,其中以喷施75%的沼液处理效果最好.当用75%的沼液连续处理4次后,油桃叶片营养元素含量N、K、Fe、B、Mn、Zn、P分别较CK增加...