细菌DNA紫外线辐射损伤和DNA修复系统的实验探究活动

目的探究玉米顶腐病病原细菌——成团泛菌(Pantoea agglomerans) C3菌株对不同环境的适应性。方法通过稀释涂板法测定成团泛菌在不同温度、水质和寄主植物中的存活动态。结果C3菌株对紫外线辐射较为敏感,照射40 s后致死率达到100%;相较于37 ℃,4 ℃和20 ℃有利于C3菌株生存,灭菌自来水、水沟水和自来水中的菌体数量高于臭水沟水和池塘水;另外,C3菌株可在多种植物叶片上定殖,定殖密度表现为玉米>烟草>棉花>三叶草>稗草。结论成团泛菌具有很强的环境适应性,能够在不同的环境中进行生存和繁殖。     

橡胶树胶孢炭疽病菌CgBASP2基因敲除突变体构建及其致病力分析

在前期对橡胶树胶胞炭疽病菌分泌蛋白组进行预测的基础上,通过RT-PCR的方法克隆了1个候选分泌蛋白基因并命名为Cg BASP2(Biotrophy-associated Secreted Proteins 2 of Colletotrichum gloeosporioides)。该基因编码100个氨基酸,相对分子质量约为9.85×103。生物信息学分析结果表明,该蛋白含有1个18氨基酸的信号肽序列,不含任何跨膜结构域。氨基酸序列比对结果表明,Cg BASP2与草莓胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Nara gc5)、西瓜炭疽菌(Colletotrichum orbiculare MAFF)、玉米炭疽菌(Colletotrichum graminicola)、菜豆炭疽菌(Colletotrichum higginsiaum)和稻瘟菌(Magnaporthe oryzae 70-15)的BASP2同源,同源性分别为100%,90%,87%,87%和67%。为了研究该基因的功能,本研究通过同源重组技术构建了橡胶树胶孢炭疽病菌Cg BASP2基因的敲除突变株ΔCg BASP2。进一步的分析发现,与野生型菌株相比ΔCg BASP2突变菌株不能对橡胶树叶片产生致病性,由此可见,Cg BASP2基因在胶胞炭疽病菌的致病过程中起重要作用。     

玉米苗期室内菌土接种丝黑穗病菌侵染条件的优化

研究以高感丝黑穗病玉米自交系黄早四为材料,模拟大田环境在室内研究温度、土壤湿度、菌土浓度等因素对玉米苗期丝黑穗病菌侵染效果的影响。采用正交试验设计,借助PCR检测技术分析9种不同条件下病菌侵染率,通过多重比较筛选出最优侵染条件;在优化的侵染条件下室内接种已知不同抗性级别的20份玉米自交系,并移栽到田间验证侵染效果。结果表明,室内接种丝黑穗病菌最佳侵染条件为土壤湿度20%,菌土浓度1%,20℃光照培养8 h和15℃暗培养16 h变温培养;20份玉米自交系室内接种后移入田间发病率均高于历年田间直接接种发病率,两者呈极显著正相关。研究优化并验证玉米苗期丝黑穗病菌室内侵染条件,可为研究该病室内快速鉴定方法奠定基础。     

肺炎克雷伯菌药物外排泵mdtl的克隆及分析

[目的]探讨肺炎克雷伯菌ATCC 49790（KP）耐药的分子机制。[方法]以KP基因组DNA为模板来扩增mdtl基因,将mdtl基因扩增产物进行DNA测序及同源性分析;将扩增产物与载体连接后转化到大肠埃希菌KAM32感受态细胞中,对转化子进行药敏分析。[结果]KP的mdtl基因扩增产物与已报道的mdtl基因核苷酸序列同源性达到99%,这个转化子对红霉素、氯霉素和卡那霉素具有很高的耐药性,这种高耐药性能被外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙和维拉帕米逆转。[结论]克隆到了KP一多药外排基因。     

蟒蛇肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

亚洲岩蟒主要栖息在热带与亚热带森林,具有较高的药物、营养和经济价值,人工养殖中常因肺炎而死亡.为调查该病病因,对海南省养殖场发病蟒蛇进行心脏穿刺采集血样、细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA基因序列测定和BLAST分析等方法寻找病原,结果表明,分离菌株为肺炎克雷伯氏菌.     

牛源皮特不动杆菌对小鼠的致病性分析

为探究来源于牛呼吸道疾病综合征发病牛的皮特不动杆菌对小鼠的致病性,对其进行相关毒力基因的检测和小鼠致病性试验,试验内容主要包括临床症状观察、病理剖检、组织病理学观察,以及半数致死量(LD50)和各器官载菌量的测定.结果显示,牛源皮特不动杆菌ZZCNC1807-6和ZZCSF1807-9菌株对小鼠均具有较强的致死性,对小...     

兽医临床肺炎克雷伯菌的流行现状及防治措施研究

肺炎克雷伯菌作为一种人畜共患的病原菌,广泛分布于自然界,是人和动物呼吸道、肠道的致病菌。肺炎克雷伯菌可在动物机体各部位发生感染,对养殖业造成较大的经济损失。鉴于此,对肺炎克雷伯菌的形态特征、致病性及流行现状进行了探讨,并提出了其防治措施。     

侵染莴苣的莴苣花叶病毒（LMV）研究

１９９３年４月从杭州市郊菜田中表现花叶、矮化的莴苣植株上，分离到病毒分离物Ｌ－６．汁液摩擦接种６科２４种植物，可侵染其中的４科８种植物．Ｌ－６的钝化温度为５５～６０℃，稀释限点为１０－２～１０－３，体外保毒期２～３ｄ．可由桃蚜以非持久性方式传播．病毒粒体线形，长约７５０ｎｍ，病叶组织中有风轮状内含体．血清学试验证明，Ｌ－６与莴苣花叶病毒（ＬＭＶ）有密切的血清关系．因此，Ｌ－６分离物被鉴定为莴苣花叶病毒．田间测定表明，ＬＭＶ在莴苣上发生较为普遍     

副猪嗜血杆菌血清5型分离株生长曲线与致病力研究

本文对副猪嗜血杆菌血清5型生长曲线进行了研究.结果表明:种子液接种后6h开始进入对数生长期,培养24h后活菌数达到最高峰,20～30 h活菌数维持在同一个水平,进入稳定期,30 h后活菌数呈现下降趋势,进入衰退期.该曲线提供了副猪嗜血杆菌生长规律,为疫苗研制提供了理论基础.     

1株克氏原螯虾肺炎克雷伯菌的分离鉴定及药物敏感性分析

从湖北潜江患病克氏原螯虾肝胰腺内分离到1株致病菌,经过生理生化特征测定、16S rRNA序列分析和进化树构建对该菌株进行鉴定,并通过琼脂扩散法检测该分离株的药物敏感性,通过肉汤微量稀释法测定抗菌药物的最小抑菌浓度.结果发现,该菌株具有与肺炎克雷伯菌一致的生理生化特征,16 S rRNA测序和进化树分析发现该分离株与肺炎...     

硫酸铈铵对玉米根尖细胞的遗传毒性研究

通过不同梯度质量浓度的叠氮化钠与硫酸铈铵对玉米根尖进行处理,研究其对玉米根尖细胞的遗传毒性。结果表明,硫酸铈铵对玉米根尖细胞的微核和有丝分裂的影响存在一定的剂量关系。当用叠氮化钠处理玉米根尖时,微核率先升后降,迭氮化钠为20 mg/L时微核率最高,有丝分裂指数随质量浓度升高递减;当用硫酸铈铵处理玉米根尖时,微核率随质量浓度升高而升高,浓度为20 mg/L时微核率显著升高,有丝分裂指数随质量浓度升高而降低,说明硫酸铈铵对玉米根尖细胞具有一定的遗传毒性,但毒性比叠氮化钠要缓和一些。     

绿僵菌对菠萝粉蚧的室内致病力测定

[目的]筛选对菠萝粉蚧有高毒力的菌株,为菠萝粉蚧的田间防治提供科学依据。[方法]以菠萝粉蚧为目标昆虫,从自然感病虫体和土壤中分离获得3株绿僵菌菌株,在室内用喷雾法测定这3株绿僵菌对菠萝粉蚧的致病力。[结果]在室温下,用绿僵菌MA4、J813、J86C接种后,菠萝粉蚧的的死亡率随着绿僵菌孢子浓度的增加而逐步提高。在同一孢子浓度(108,107,106)中,绿僵菌3个菌株对菠萝粉蚧的致病力顺序均为J813(MA4(J86C。感病的粉蚧行动迟缓,死亡2~3 d后,形成僵虫。僵虫经保湿培养3~4 d后,虫体表面长出绿色的粉状孢子。[结论]绿僵菌J813菌株在室内对菠萝粉蚧有强致死力,拥有良好的田间应用前景。     

玉米C型胞质不育恢复基因Rf4的RFLP定位

采用田间育性鉴定和RFLP分子标记的方法对玉米C型胞质不育的恢复基因进行了研究 .田间育性结果表明 ,玉米C型胞质不育有两对重叠恢复基因 ,通过对A192近等基因系和 (CMS C2 37×A6 19)BC1分离群体的RFLP分子标记 ,将玉米的C型胞质不育恢复基因Rf4定位在第 8染色体短臂上 ,与RFLP探针npi2 2 0和csu2 9连锁     

12株牛源肺炎克雷伯菌ESBLs类抗生素的耐药性与耐药基因检测

为了解重庆地区12株牛源肺炎克雷伯菌的超广谱β-内酰胺酶耐药性及ESBLs基因型分布情况,该试验采用纸片扩散法对12株肺炎克雷伯菌进行超广谱抗菌药物的敏感性检测,通过PCR方法检测其所产生的耐药基因类型.结果表明:12株菌对阿莫西林、氨苄西林的耐药率均为100%,头孢噻吩和先锋霉素Ⅴ的耐药率为17%,头孢曲松的耐药率为0%.产ESBLs菌株3种耐药基因TEM,SHV,CTX-M的检出率分别为100%,42%,67%,以TEM的检出率最高.     

玉米不同品种(品系)对粗缩病的抗性鉴定

2008—2010年对普通玉米、甜玉米、糯玉米及自交系进行了抗粗缩病鉴定试验。结果表明,不同年份和不同品种间抗性存在显著差异。2010年在济宁、温岭和东阳等地各安排30个品种试验,结果表明,品种间抗性存在显著差异,同一品种在不同地区间抗性也存在差异,不同玉米类型对粗缩病抗性无显著差异。综合结果表明,甜玉米品种‘农甜3号’对玉米粗缩病表现较强耐病性。     

基于丽江新团黑谷的稻瘟病菌致病性分化

为明确普感品种丽江新团黑谷中稻瘟病菌致病性的分化情况,将分离的100个单孢菌株分别接种到7个中国传统鉴别品种和30个抗瘟单基因品系上,根据接种品种的抗感反应确定稻瘟病菌的优势小种类型、生理小种组成、致病力及其所含无毒基因等信息,并与从同一地区其他寄主品种分离到的稻瘟病菌种群的致病性比较。结果表明:从丽江新团黑谷上分离的稻瘟病菌与从整个区域不同品种上分离的病菌致病性分化情况相似,其中从丽江新团黑谷分离的菌株各种群组成为小种ZA占85.00%、ZB占13.00%、ZC占2.00%,优势小种为ZA1、ZA5、ZB13,菌株平均毒性频率为83.33%;从其他寄主品种分离的菌株各种群组成为ZA占53.85%、ZB占38.46%、ZC占5.77%、ZD占1.92%;优势小种为ZA1、ZB15、ZB13,菌株平均毒性频率为78.01%。     

4种甜瓜蔓枯病菌形态特征及其致病力比较

从江苏和海南甜瓜种植区的病株中分离得到4种甜瓜蔓枯病病原物,在25℃、16 h光照/8 h黑暗条件下,4种病原菌分离物在PSA上培养后进行形态观察.结果表明:4种病原菌在PSA培养基上菌落形状相似,初为圆形后转变为同心圆;气生菌丝起初均为乳白色,后期为青灰色或者黑色,气生菌丝生长旺盛;其中C的基内菌丝较其它3种发达,可以直接产生大量的分生孢子,其余3种只能形成极少分生孢子;4种病原菌产生的孢子大小、形态基本一致,无色无隔或单隔为主;4种病原菌的菌丝生长速度差异不显著;在12 h紫外灯/12 h黑暗周期下处理4～6 d,4种病原菌都能产生大量的分生孢子.此外,以感病品种白皮脆为供试材料,利用孢子悬浮液喷雾接种方法对这4种病原菌进行致病力的测定.结果表明,4种病原菌均具有较强的致病力,但它们之间的致病力差异不显著.     

养殖大菱鲆出血性败血症病原菌致病性的研究及鉴定

从全身弥漫性出血合并腹水的养殖大菱鲆Scophthalmus maximus的腹水、肝脏和肾脏中分离到3株菌落形态相同的优势菌,编号为L-49231、L-59231、L-59232。选用L-49231菌,通过注射、浸泡和灌喂3种途径分别对两种规格(全长(12±2)cm,体重(30±2)g;全长(18±2)cm,体重(125±5)g)的养殖大菱鲆进行人工感染试验,结果证实:此菌可经上述3种途径造成该病的发生,注射和浸泡方式的感染率均为100%,死亡率分别为100%和66.7%;灌喂方式未见死亡,感染率为85.7%。该菌经革兰氏染色为阴性,杆状,大小为2~3μm×1~1.2μm,周生鞭毛,兼性厌氧,接触酶为阳性,氧化酶为阴性,V.P试验为阴性。根据《常见细菌系统鉴定手册》所描述的爱德华氏菌属的生理生化特性,菌株L-49231为迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda。     

医院获得性肺炎中肺炎克雷伯菌分离株的耐药性及超广谱β-内酰胺酶检测

目的 了解医院获得性肺炎中肺炎克雷伯菌(KPN)分离株的耐药性及超广谱β-内酰胺酶(ESBL).方法 收集90株医院获得性肺炎KPN,采用全自动微生物分析仪检测抗菌药物敏感性和ESBL产生.结果 KPN对氨苄西林、头孢唑林、头孢他啶、头孢噻肟和四环素耐药率均超过50.0％.ESBL阳性KPN株占41.1％.ESBL阳性株对头孢唑林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星和左旋氧氟沙星耐药率明显高于ESBL阴性株(P＜0.05).结论 本地区医院获得性肺炎中KPN分离株耐药率和ESBL阳性率较高.