咖啡中赭曲霉毒素A研究进展

综述了咖啡中赭曲霉毒素A的污染情况、检测方法及预防措施等,为进一步研究咖啡中赭曲霉毒素A的污染提供了参考。     

赭曲霉毒素A无毒ELISA检测

[目的]研究赭曲霉毒素A毒素的替代ELISA检测.[方法]采用噬菌体展示技术筛选赭曲霉毒素A模拟表位,得到赭曲霉毒素A(OTA)模拟表位序列为IR(V)PMV(L)XX(X为任意氨基酸),化学合成法体外合成OTA模拟表位肽,通过化学交联法将OTA模拟表位肽与BSA连接,做成无毒抗原,建立无毒OTA间接竞争ELISA检测方法,同样通过化学交联法将OTA多肽-BSA与HRP相联,建立OTA无毒直接竞争ELISA检测方法.[结果]OTA多肽-BSA间接竞争ELISA检测50％抑制浓度(IC50)为5 ng/ml,OTA多肽-BSA-HRP一步直接竞争ELISA检测法IC50为2.5 ng/ml,二步直接竞争ELISA检测法IC50为2ng/ml.[结论]OTA模拟表位多肽能用于代替OTA毒素作为检测抗原使用,并建立无毒ELISA检测方法.     

赭曲霉毒素的毒理学试验

用含2.569mg/kg赭曲霉毒素A (Ochratoxin A.以下称OA)的饲料,对40日龄左右的星波罗肉用鸡进行了饲喂试验试验鸡表现为精神沉郁,食欲不振、肠炎、贫血、极度消瘦等症状,于喂后13～18天,先后衰竭死亡,剖检发现肾、肝和肠道等都有明显的病理变化。经用高效液相色谱仪(HPLC)测定,肾脏,肝脏内OA的残留量分别为0.179mg/kg和0.1302mg kg。用从饲料中提纯的OA对孵化5日龄的鸡胚进行了气室内接种。根据接毒后记录的鸡胚死亡数和死亡率。计算出半数致死量为0.128μg。     

赭曲霉毒素A中毒鸡肝脏超微结构的观察

用OA中毒鸡肝脏进行超薄切片,然后电镜观察其超微结构,发现:肝细胞核膜增厚,线粒体肿胀溶解,内质网减少,胞浆内有大量异物及自吞噬泡,肝糖原积聚,肝细胞溶解。说明OA中毒能阻止蛋白质合成,抑制肝糖原的分解,它是一种肝脏毒。还发现;星状细胞毒害严重而溶解,其数量显著减少,证实了OA中毒首先毒害星状细胞。     

猪饲料中赭曲霉毒素A的危害及防控措施

近年来,猪发生赭曲霉毒素中毒的病例呈上升趋势,在黄曲霉毒素之后,赭曲霉毒素引起了从业者的广泛关注。为了保障养猪业的健康发展和人们的身体健康,将从赭曲霉毒素A的一般概况、猪饲料中OTA的污染现状、检测技术方面进行分析,并提出有效的防控措施。     

赭曲霉毒素A对BHK细胞毒害作用的研究

以叙利亚仓鼠肾细胞(BHK cell)为模型,用噻唑兰(MTT)法检测赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)对细胞活力的影响,用单细胞凝胶电泳法和DNA梯形条带法检测OTA对细胞DNA的损伤,用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活力的变化,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞培养液中MDA的含量.结果显示:OTA对BHK细胞活力的影响呈现时间和剂量依赖性的抑制作用.染毒12 h后,2.5、5、10、20和40 μg·mL-1 OTA剂量组BHK细胞的活力均显著降低(P＜0.05),至染毒24 h,40 μg·mL-1 OTA染毒剂量组细胞活力下降达90%.OTA对BHK细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂量效应关系,与对照组相比,除2.5 μg·mL-1剂量组外,其余各剂量组的彗尾DNA含量和拖尾率差异极显著(P＜0.01),40 μg·mL-1剂量组的细胞拖尾率是对照组的80倍.40 μg·mL-1 OTA处理BHK细胞24 h后检测到特征性的凋亡梯形条带,而对照组则未检测到.OTA作用于BHK细胞使细胞内SOD活力显著降低(P＜0.05),细胞培养液中MDA含量则显著升高(P＜0.05).OTA染毒24 h后,40 μg·mL-1 OTA剂量组细胞内SOD活力降低至对照组的25%,培养液中MDA含量较对照组增高了500%.上述结果表明:OTA对BHK细胞活力的影响与细胞内过氧化物的大量生成和抗氧化酶活力下降有关,且对细胞DNA造成损伤,引起细胞凋亡.     

赭曲霉毒素A和T-2毒素组合对肉鸡免疫病理的影响

研究旨在探讨赭曲霉毒素A(OTA)和T-2毒素组合对肉鸡免疫病理的影响。将481日龄的肉鸡随机分为4组,每组4个重复,每个重复30只鸡。4组在接下来的4周饲喂以下饲粮:第1组饲喂基础饲粮(对照组,霉菌毒素自由添加);第2组饲喂基础饲粮+2000mg·kg-1的真菌剂,第3组饲喂基础饲粮+0.25mg·kg-1的OTA+0.5mg的T-2;第4组饲喂基础饲粮+0.25mg·kg-1的OTA+0.5mg·kg-1的T-2+2000mg·kg-1的真菌剂。饲喂OTA和T-2毒素的饲粮,抗新城疫病毒抗体滴度下降了14%。对肉鸡的脂多糖进行PCR检测,结果表明,在一定程度上,饲喂OTA和T-2毒素降低了白细胞介素-2和干扰素细胞因子mRNA的表达水平,但无显著差异(P0.05)。OTA和T-2毒素的结合,显著降低了白细胞介素-2和干扰素-血清的浓度(P0.05)。病理学组织研究表明,OTA和T-2毒素的结合引起了胸腺、法氏囊、脾脏、肝脏的异常。赭曲霉素A和T-2的毒性可以被部分真菌抵消,但无显著差异(P0.05)。本次研究中,OTA和T-2毒素的浓度采用的是加拿大食品检验局规定的最大耐受水平之下。试验明确提出了这些毒素的去毒方法,建议我们应该减少饲料中OTA和T-2毒素的最高允许剂量,以提高动物食品链健康和安全。     

UPLC-MS/MS法测定生咖啡中的赭曲霉毒素A

建立了生咖啡中赭曲霉毒素A的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。样品用甲醇提取后,直接在BEH C18色谱柱上以乙腈-0.1%甲酸水为流动相分离,采用多离子监测模式(MRM)进行测定。赭曲霉毒素A的线性范围为5.0～200.0 ng/mL,相关系数大于0.99,检出限为0.5μg/kg。4个水平的添加回收率在84.3%～109.2%,相对标准偏差小于7.35%。本方法灵敏度高、准确性好、成本低,适用于生咖啡中赭曲霉毒素A的检测。     

黑茶茶汤中赭曲霉毒素A的提取与检测方法

日常饮茶中,茶叶若因加工或贮藏不当污染了一定量霉菌毒素,同时对于冲泡过程中的浸出率及实际的摄入量,仍欠缺深入了解。为建立茶汤中赭曲霉毒素A（OTA）的提取方法,为饮茶所摄入生物毒素的安全评估提供更合理的分析方法,研究使用乙腈作为提取溶剂提取茶汤中的OTA,然后加入盐离子使乙腈和水相分层,去除杂质后,以高效液相色谱法（HPLC）分析检测,通过对比4种不同方法的准确度、线性、精密度、灵敏度等指标,选择最合适于茶汤的检测方法。结果表明,方法M4通过用含0.1%甲酸酸化乙腈提取,用氯化钠和硫酸镁使乙腈和茶汤分层,在准确度、精密度、灵敏度等指标上,均优于其他3种方法。方法M4在茶汤中OTA添加浓度为1～45 µg·L^-1时回收率为82.5%～99.8%,标准偏差为1.4%～7.3%;该方法添加回收的回归方程相关系数为0.9971。在日间和日内验证试验中,高浓度毒素组日内回收率为90.9%,相对标准偏差为2.2%,日间回收率为87.5%,相对标准偏差为3.2%;低浓度毒素组的日内回收率为91.9%,相对标准偏差为5.2%,日间回收率为92.4%,相对标准偏差为6.7%;该方法的定量限为1.1 µg·L^-1,检出限为0.33 µg·L^-1。不同类型黑茶茶汤验证实验发现,该方法的回收率均高于88.65%。对比这4种方法,方法M4在分析结果上均好于其他3种方法,适合用于茶汤中OTA的检测,该方法对于OTA在茶水冲泡过程中浸出情况及安全风险评估有重要的参考意义。     

ICA-HPLC检测枸杞中赭曲霉毒素A提取方法的比较

对免疫亲和柱-高效液相色谱法(ICA-HPLC)测定枸杞中赭曲霉毒素A(OTA)的提取方法进行研究。对4种提取液[0.1 mol/L正磷酸∶甲醇∶水(1∶10∶4),0.1 mol/L正磷酸∶甲醇(1∶10),甲醇∶水(4∶1),2%Na HCO3∶15%Na Cl(1∶1)]提取下枸杞干果中OTA含量的回收率进行对比和差异性分析,对最佳方法做准确度和精密度试验,并用此方法检测宁夏市场枸杞OTA污染情况。结果显示,0.1 mol/L正磷酸∶甲醇(1∶10)为最佳提取液,回收率为61.5%~77.19%,变异系数为2.22%~2.83%;以0.1 mol/L正磷酸∶甲醇(5∶50)为提取液、ICA-HPLC法测定枸杞干果中OTA方法稳定、可靠;宁夏市场枸杞OTA检测结果显示不存在污染。     

赭曲霉毒素A,B的提取,分析与鉴定

用赭曲霉菌(也称棕曲霉菌)生产菌株,接种于无菌的混合饲料中培养。培养物用乙腈—石油醚—氯仿提取,用碳酸氢钠水溶液进行液液分配,水相酸化后再用氯仿萃取,经硅胶柱层析净化,用苯:冰醋酸(9:1)洗脱。紫外光下分别收集绿色萤光区带和兰色萤光区带,采用紫外分光光度计检测。选用波长333nm的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A.简称OA)和波长318nm的赭曲霉毒素B(Ochratoxin B.简称OB)收集液,分别将收集液(OA和OB)浓缩,然后结晶。OA产品为无色针状晶体;OB为淡黄色颗粒状晶体。OA和OB的UV最大吸收峰分别为333nm和318nm。萤光最大激发波长分别为335nm和320nm,最大发射波长分别为465nm和456nm,通过UV、HPLC、NMR、IR谱图及TLC的R_f值证明产品是赭曲霉毒素A和B。     

欧盟修订三聚氰胺以及赭曲霉毒素A的最大残留限量

2012年7月6日欧盟委员会发布(EU)No594/2012号法规,修订三聚氰胺及其类似物在婴儿配方奶粉以及其他食品中的最大残留限最,同时修订赭曲霉毒素A在谷物产品、调味料等产品中的最大残留限量。根据最新法规,欧盟将三聚氰胺在婴儿配方奶粉中的最大残留限量修订为1 mg/kg,在其他食品中的最大残留限量     

高效液相色谱法测定谷物及其制品中赭曲霉毒素A

针时谷物及其制品可能污染的霉菌毒素——赭曲霉毒素A,用免疫亲和柱净化高效液相色谱法进行了验证。     

赭曲霉毒素A促进PCV2复制的自噬机制研究

为研究赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)诱导自噬的信号通路机制,通过药物的特异性抑制信号通路中不同激酶的活性,探讨特异性激酶抑制剂在OTA诱导的自噬及猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)复制促进中的作用。结果表明:1)OTA能够抑制PCV2感染猪肾细胞株(PK-15)中的蛋白激酶B(AKT)和雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)的活性,从而增强自噬能力;2)胰岛素能够逆转OTA引起的AKT与mTOR磷酸化水平的降低,能够逆反OTA诱导产生的自噬以及PCV2的复制促进;3)OTA能够激活细胞外信号调节激酶1/2(extracellular regulated protein kinases, ERK1/2)信号通路;4)ERK1/2的抑制剂(U0126)通过降低ERK1/2的磷酸化水平,从而抑制了OTA诱导的自噬及PCV2的复制促进;5)U0126能够减少OTA引起的mTOR磷酸化水平降低的幅度。     

固相萃取法萃取葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法研究

【目的】建立葡萄酒中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的固相萃取方法。【方法】分析了固相萃取小柱的活化方法、淋洗液、洗脱溶剂对萃取葡萄酒中OTA的影响,选择出最佳的参数后进行精密度与准确度试验。【结果】葡萄酒中OTA的固相萃取方法:C18固相萃取柱(简称C18-SPE柱)经5 mL甲醇、5 mL双蒸水活化后,进样10mL,先用1 mL双蒸水淋洗,充分干燥后,用5 mL乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液并真空旋转蒸发至干,1 mL流动相溶解残渣待测。【结论】得到了萃取葡萄酒中OTA的固相萃取方法,此方法的平均回收率为88.2%~100.9%,变异系数为0.93%~2.19%,且具有操作简单,成本低,分析速度快等优点。     

一株产菌核曲霉的生物学特性研究

从土壤样品中分离到81株曲霉,从中筛选出能够产生菌核的A1菌株。通过菌落形态、个体形态特征的观察和ITSr DNA序列分析,将A1菌株鉴定为日本曲霉原变种(Aspergillus japonicus)。结果表明,A1菌株形成菌核的最适温度是30℃,最适p H值为7,PDA和JM培养基为A1菌株产菌核较为适宜的培养基;培养基的碳氮源对A1菌株的菌核生物量有较大影响,葡萄糖是最好的碳源,硝酸铵是最好的氮源;JM培养基中的含碳量在14.00~28.00 g/L、含氮量在0.24~0.48 g/L时,A1菌株能产生大量菌核。     

基于侧向层析原理的赭曲霉毒素A快速检测试纸条的研制

针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素A单抗偶联物和赭曲霉毒素A-BSA偶联物（OTA-BSA）,开发了一种快速检测赭曲霉毒素A的方法。研究结果表明:①当OTA-BSA配制终质量浓度为4.8 g·L-1,质控线用羊抗鼠IgG配制终质量浓度为1.5 g·L-1,硝酸纤维素（NC）膜的包被量为1.0 μL·cm-1时呈现最清晰、最均匀的条带。②赭曲霉毒素A胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到1.0 μg·L-1,检测时间仅为5 min,非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短,灵敏度高,与传统的仪器和酶联免疫检测方法相比,在野外和临床检测中更具有推广应用价值。图5表1参12     

中国大麦中赭曲霉毒素污染现状初探

采用免疫亲和柱-液相色谱法测定我国大麦产区的15个大麦样品,方法灵敏度高,检测限可以达到0.25μg·kg-1,能满足我国赭曲霉毒素10μg·kg-1的限量要求,分析得出相关的初步性结论.     

赭曲霉毒素A诱导Caco-2细胞的细胞毒性及DNA损伤

【目的】研究不同浓度和时间处理下,赭曲霉毒素A(OTA)对人结肠癌细胞(Caco-2)的细胞生长抑制、氧化损伤以及DNA损伤的影响.【方法】采用0.32、1.6、8、40、200μmol/L OTA处理Caco-2细胞24、48、72h后,利用甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,利用活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内的自由基水平,利用彗星试验检测细胞的DNA损伤.【结果】在各个处理时间段内,OTA浓度大于0.32μmol/L时,OTA对细胞存活率都有显著的抑制作用(P0.05);细胞内ROS以及DNA损伤都随OTA浓度的增加而显著升高(P0.05),尤其在0~8μmol/L低浓度范围内,OTA显示了强烈的毒性.【结论】OTA可导致Caco-2细胞存活率降低,引起细胞氧化应激以及DNA损伤,其中ROS水平升高可能是OTA导致Caco-2细胞DNA损伤的原因.     

加工所解析了赭曲霉毒素合成分子途径

正近日,中国农业科学院农产品加工研究所刘阳团队发现一个负责赭曲霉毒素合成的基因簇,阐明了赭曲霉毒素合成步骤及两个关键调控基因。该研究对预防和控制赭曲霉毒素污染具有非常重要的意义。相关研究成果作为亮点文章在线发表在《应用与环境微生物