应用cpSSR和EST-SSR标记进行柑橘特异种质资源遗传背景研究

将叶绿体SSR 和EST-SSR 标记用于揭示柑橘及其近缘属的系统发育关系,并阐明保存在重庆国家果树种质柑橘圃内一些特异种质资源的遗传背景。其中50 份材料和44 份材料分别用cpSSR 和EST-SSR 分析。22 对cpSSR 引物产生146 个多态性条带,平均检测到6.64 个多态性条带,平均Shannon’s多样性指数为0.32;18 对EST-SSR 引物产生240 个多态性条带,平均检测到 13.3 个多态性条带,平均多态信息含量（PIC）为0.73,平均期望杂合度为0.78。根据cpSSR 和EST-SSR 分析,结合形态学证据,阐明一些特异柑橘种质资源的遗传背景,同时证明莽山野橘、元橘、宜昌橙有较近的亲缘关系。     

陕南药用柑橘资源枳雀的特性及栽培现状调查

<正>陕南位于陕西省秦岭以南,西接甘肃,南连四川,东、北分别与湖北和本省的宝鸡、西安接壤,行政区划包括:汉中市、安康市、商洛市三个地级市。陕南北靠秦岭,南屏巴山,汉江横贯东西,形成著名的汉江南北谷地冲积平原(俗称汉中盆地)。受北方冷气团和东南季风的影响,具有北亚热带向暖温带过渡的特征,且有三面环山的天然屏障,蕴育了独特     

基于cpSSR分子标记的香蕉种质资源分类

应用cpSSR分子标记来研究香蕉种质资源分类,用筛选到的16对多态性引物对42份香蕉材料进行扩增．共检测出86个多态性条带,每对引物产生的多态性条带为2～8,平均为5．5,多态信息含量为0．1889～0．7805。在相似系数为0．76时,供试的42份香蕉材料分成3大类群：类群Ⅰ为M.acuminata的全部亚种和供试的...     

枳属种质遗传多样性及其与近缘属植物亲缘关系的SSR和cpSSR标记分析

 应用核基因组SSR和叶绿体基因组SSR,分析了枳属28份枳及枳杂种种质的遗传多样性及其与近缘属植物的亲缘关系。核基因组SSR分析表明普通枳的遗传差异明显,22个SSR位点的平均多态性信息含量（PIC）为0.51,平均期望杂合度为0.52,表明中国枳种质资源具有较丰富的遗传多样性。在遗传距离约0.16时,22份普通枳可以分成4个类型。叶绿体基因组SSR分析则发现普通枳间基本无差异,表明以母系遗传为特征的枳叶绿体基因组相对保守。富民枳与普通枳无论是在核基因组还是在叶绿体基因组上均存在较大差异,支持富民枳种的地位。SSR和cpSSR结合使用可比较准确地鉴定枳杂种。     

‘瑞阳’和‘瑞雪’苹果及其亲本果实中主要营养成分的比较分析

【目的】对苹果新品种‘瑞阳’和‘瑞雪’及其亲本果实中主要糖酸、酚类、矿物质及维生素类物质的含量进行差异分析,为完善新品种的果实评价体系和推广提供理论依据。【方法】以‘瑞阳’和‘瑞雪’及其亲本‘秦冠‘’富士’和‘粉红女士’果实为材料,采用高效液相色谱(HPLC)技术对果实中主要糖酸、酚类和维生素类物质的组成与含量进行分析,使用原子吸收分光光度计对果实中矿物质含量进行测定。【结果】在成熟期‘,瑞阳’和‘瑞雪’及其亲本果实中所含主要糖酸、酚类、维生素类及矿物质的组分一致,但含量差异显著‘。瑞阳’果皮中酚类物质总量显著高于其亲本‘富士’和‘秦冠’,其中根皮苷和绿原酸含量显著高于‘富士’‘;瑞雪’果皮中酚类物质总量接近‘富士’,低于‘粉红女士’,介于双亲之间,其中表儿茶素和儿茶素含量显著高于‘富士’。5个参试品种中钾、钙、镁含量相对较高,铁、锌含量较低‘,瑞阳’果实中Ca含量接近‘富士’,显著高于‘秦冠’‘,瑞雪’果实中Ca、Zn含量显著高于‘富士’。冷藏期间,5个参试品种中糖酸、酚类和维生素类物质的变化趋势相近,但在不同的品种间存在稍微差异。【结论】‘瑞阳’果实中酚类和矿物质明显优于‘秦冠’,接近‘富士’,最佳食用期为冷藏60 d左右‘;瑞雪’果实继承了‘粉红女士’的诸多优点,果实中苹果酸、维生素C、矿物质Ca含量显著高于‘富士’,最佳食用期为冷藏90 d左右。     

广西地方柑橘资源的ISSR分析

【目的】了解和研究广西地方柑橘资源的亲缘关系和遗传多样性。【方法】以10份外省野生和地方柑橘种质为参照,采用ISSR分子标记技术对10份广西地方柑橘种质和8份姑婆山野生柑橘资源的遗传多样性及其亲缘关系进行分析和评价。【结果】从100条ISSR引物中筛选出12条引物对供试材料进行多态性分析。获得总条带67条,其中多态性条带62条,多态位点百分率为92.54%。聚类结果显示28份资源可分为7个组,其中广西资源分布于6个组,姑婆山野生柑橘被聚为同一组,进而可划分为2个亚组。【结论】ISSR标记能较好地区分广西地方柑橘资源,且广西柑橘地方资源遗传多样性丰富。     

基于胚抢救技术的枳雀×枳杂交群体创建及鉴定

【目的】新资源获得是开展育种的前提和基础,通过两种砧木杂交,创造出聚合两种砧木优良性状的新型砧木资源材料。【方法】以枳雀为母本、枳为父本进行杂交实验,结合胚抢救技术获得子一代植株,利用形态学观察及SSR分子标记技术对子一代进行鉴定。【结果】三年胚抢救实验共接种3 146粒种子,获得胚抢救幼苗1250株,成苗率为39.73%。其中通过形态学鉴定出41株杂种苗,共筛选出8对SSR引物来对父本母本进行区分,其中的CS014RCS014F、CS065R-CS065F引物组合可以准确地鉴定出杂种后代,通过SSR分子标记鉴定出20株有性杂种植株。所获得的61株杂种资源为将来深入开展柑橘砧木育种研究工作奠定了材料基础。【结论】以多胚性柑橘为母本的杂交组合获得的成熟种子,难以通过直接播种的方式获得杂种苗。将胚拯救与分子鉴定相结合,通过SSR分析,找到可靠的SSR引物对鉴定杂交后代,为柑橘砧木育种的进一步研究奠定了物质基础。     

柑橘新品种‘黔阳冰糖脐橙’的选育

‘黔阳冰糖脐橙’是从普通冰糖橙芽变选育的冰糖橙新品种。果实圆球形,纵径75.6 mm,横径72.0 mm,果形指数1.05,单果质量192 g,果皮厚5.1 mm,果面橙色且较光滑,果脐闭合。果肉黄色,囊壁较薄,果肉质地脆嫩,化渣性好,香气清淡,可溶性固形物含量(w,后同)为12.67%,可滴定酸含量为0.71%,维生素C含量为61.6 mg·100 mL~(-1),出汁率52.79%,可食率高,无种子。果实11月下旬成熟,耐贮性中等。抗病性与普通冰糖橙相似,易感溃疡病和衰退病;有一定的抗寒性和抗旱性。采用SSR标记对‘黔阳冰糖脐橙’进行遗传鉴定,表明其与普通冰糖橙在DNA水平存在差异,具有遗传特异性。该品种适合在甜橙产区推广栽培。     

柑橘新品种‘桂夏橙1号’的选育

‘桂夏橙1号’是从‘阿尔及利亚夏橙’芽变中选育的柑橘新品种。果实圆球形或椭圆形,果皮橙黄色,果面较粗糙,果顶圆,果肉橙黄色,味酸甜,多汁,有香气;果大,单果质量197.8~259.7 g,果实横径71.0~80.3 mm,纵径68.6~80.1 mm,果形指数0.94~1.03;种子数平均1.68粒,一般1~3粒。可食率70.28%~76.47%,果汁率44.99%~54.39%,可溶性固形物含量(ω)10.2%~13.3%,每100 m L果汁中含维生素C 45.96~55.04 mg,柠檬酸0.68~1.20 g,全糖7.18~9.65 g,固酸比9.92~15.07;果实较化渣,品质好。果实生育期320~380 d,在桂林灵川3月下旬至5月中下旬成熟。适合广西省桂林以南及生态条件相似地区栽培,盛果期每hm2产量可达60 000 kg,丰产性好。     

柑橘新品种‘阿香2号’的选育

‘阿香2号’是从‘南丰蜜橘’芽变中选育的柑橘新品种。该品种树势强,适应性好,早结果,丰产,稳产。果实为扁圆形,果面橙黄色或橙色,风味浓郁,单果质量25～45 g,无核或少核。可溶性固形物含量(w,后同)12.8%,可滴定酸含量0.51%,维生素C质量浓度37.04 mg·100 mL-1,化渣性好,综合性状优良。在湖南安化11月上旬至中旬果实成熟。采用SSR分子标记对‘阿香2号’的遗传鉴定表明‘,阿香2号’与‘南丰蜜橘’在DNA水平上存在一定的差异,具备成为新品种的遗传基础,是一个稳定变异‘。阿香2号’适合在湖南省宽皮柑橘产区栽培,盛果期产量可达37 500 kg·hm-2。     

柑橘锈螨为害‘沃柑’果皮的结构变化和挥发油成分分析

柑橘锈螨广泛分布于世界各大柑橘产区,为害柑橘果实后形成黑皮果。以‘沃柑’正常果和锈螨为害果为试验材料,采用扫描电镜、顶空固相微萃取-气质联用等技术分析2种试验材料在微观结构和挥发油成分方面的差异。结果表明:柑橘锈螨为害‘沃柑’果皮引起表皮出现龟裂,果皮微观结构被破坏。‘沃柑’正常果皮共检测出75种成分,包括萜烯烃类(65.89%)、醇类(6.94%)、酯类(3.59%)、醛类(2.89%)、烷烃类(1.02%)、酸类(0.40%)、酮类(0.58%)、酚类(0.29%),分别有20、19、15、8、4、3、3、3种成分;柑橘锈螨为害果共检测出79种成分,其中萜烯烃类(59.86%)、酯类(4.04%)、醇类(3.59%)、醛类(2.61%)、烷烃类(1.58%)、酸类(0.76%)、酮类(0.33%)、醚类(0.07%)、酚类(0.03%)分别有18、21、18、8、2、1、7、3、1种成分,2种试验材料的挥发油成分在种类及含量上存在差异。表明柑橘锈螨为害造成柑橘果皮结构和成分差异,可为研究柑橘果实抗黑皮果机理提供理论参考。     

苹果新品种‘瑞阳’及其亲本果实组织结构的比较分析

【目的】苹果新品种‘瑞阳’由‘秦冠’和‘富士’杂交选育而成。感官评价‘瑞阳’肉质明显比‘秦冠’细脆,略差于‘富士’,本研究从组织结构方面分析‘瑞阳’与亲本果实质地差异的原因。【方法】本实验以‘瑞阳’及其亲本果实为研究对象,在成熟期测定果实的基本质地指标(硬度、脆度等),并采用半薄切片和扫描电镜技术对3个品种果实的组织结构进行比较,分析3个品种之间的微观差异。【结果】通过半薄切片观察,‘瑞阳’和‘富士’与‘秦冠’相比,果肉细胞平均面积大,细胞间隙小,细胞间排列紧密,圆度小,细胞纵横比大。‘瑞阳’与‘富士’相比,果肉细胞平均面积、周长、圆度等指标相近,而细胞间隙略大。通过扫描电镜观察果肉的纵切面,可知‘瑞阳’和‘富士’细胞排列整齐、紧密,而‘秦冠’细胞排列混乱,成簇分散排列,细胞间隙大;观察果肉的断裂面可得,‘瑞阳’和‘富士’均以细胞内断裂为主,且断口光滑、平齐,而‘秦冠’以细胞间和细胞内断裂为主,断口粗糙,具有毛状细丝。【结论】通过对3个苹果品种微观形态的比较分析,表明苹果的组织结构特征与质地有一定关系,从果实组织结构方面为苹果新品种选育提供理论依据。     

基于SSR标记的浙江地方柚类种质资源遗传关系分析

【目的】对浙江地方柚类种质资源进行遗传多样性分析,为其搜集保护和合理利用提供参考。【方法】利用23对SSR引物进行遗传多样性分析并构建种质鉴定图。【结果】23对引物共检测到91个等位变异位点,变异范围为2~7,平均每对SSR引物可检测到4.0个等位位点;23个SSR位点的观察杂合度、期望杂合度和多态性信息含量分别为0.51、0.54和0.47。UPGMA聚类结果显示:18份供试材料在遗传相似性系数为0.71时分成A1~A3、B1、C1和D1共6个组群,其中A1组包括‘四季柚’‘红肉四季柚’和‘佛香柚’等7份种质,A2组包括‘永嘉红心柚2号’‘青田红心柚’和‘木兰柚’3份果肉颜色为粉红色的种质,A3组包括‘处红柚’‘永嘉红心柚1号’‘古磉柚’和‘官南红柚’4份果肉颜色为红色的种质,‘官南土柚’和‘文成红心柚’自成B1和C1组,‘常山胡柚’和‘槾文柑’2个杂种柚类型聚为D1组。【结论】浙江地方柚类种质资源有丰富的遗传多样性,基于AG14、CAG01、CMS-16和CMS-26 4对引物组合构建浙江地方柚类资源的种质鉴定图,可将18份柚类种质进行区分。     

早熟砂梨‘苏翠1号’与其亲本‘翠冠’‘华酥’成熟果实差异代谢产物及差异基因比较分析

‘苏翠1号’梨因其极早熟、汁多味甜、肉质细脆而深受广大消费者喜欢。为了解‘苏翠1号’成熟果实主要代谢产物及代谢通路相关基因表达情况,探究其果实优异性状形成的物质和分子基础,对‘苏翠1号’及其亲本‘翠冠’和‘华酥’成熟果实样本进行代谢组和转录组测序分析。代谢组分析发现,3个品种间,前25个差异代谢产物主要包括有机酸、碳水化合物、氨基酸、甘油磷酸脂、脂肪酸和绿原酸。HPLC测定表明,蔗糖含量在‘苏翠1号’中最高,葡萄糖含量在‘翠冠’中最高,果糖含量在‘苏翠1号’和‘翠冠’中相似,略高于‘华酥’,山梨醇含量在‘苏翠1号’和‘华酥’中均显著低于‘翠冠’;苹果酸含量在‘苏翠1号’中最高,柠檬酸含量在‘华酥’中最高,‘苏翠1号’和‘华酥’总酸含量相近,均高于‘翠冠’。氨基酸含量分析表明,‘苏翠1号’的氨基酸总含量及天冬氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸含量显著高于‘翠冠’和‘华酥’。转录组GO和KEGG分析表明,相较于‘翠冠’和‘华酥’,‘苏翠1号’有机底物分解过程、脂质代谢、有机酸生物合成、羧酸生物合成、多糖代谢等生物学过程及代谢途径显著富集。进一步挖掘差异基因发现,糖代谢中的SPS、山梨醇代谢中的S6P...     

柑橘新品种‘桂野生山金柑’的选育

‘桂野生山金柑’是在广西壮族自治区东兴市发现的金柑属柑橘新品种。果实近圆形,成熟时果皮黄色,果面光滑,有蜡层,肉质紧密,风味显酸,平均单果质量4.5 g,果形指数0.98,种子1~7粒,卵形,深绿色,单胚。果实可食率87.1%,果实可溶性固形物含量10.6%,每L果汁中含可滴定酸45 g和维生素C 374 mg。该品种在广西东兴地区11月初成熟,花单生或簇生,萌芽力和成枝力弱,抗逆性和抗病性中等。适合广西地区栽培,幼树第2年可开花坐果。     

柑橘新品种‘桂橘一号’的选育

‘桂橘一号’是从‘蜜广橘’芽变中选育的早熟柑橘新品种。果实扁圆形,果皮橙黄色,果面光滑,有光泽,果肉橙黄色,化渣,味清甜;平均单果质量46.77 g,最大单果质量63.3 g,果形指数0.72;每果实含种子0.85粒,单胚,子叶淡绿色。可食率78.01%,果汁率61.31%,可溶性固形物含量12.29%,全糖11.02%,可滴定酸0.64%,固酸比19.85,维生素C含量212.0 mg·g-1;品质上等。果实生育期160 d,在桂林兴安10月上中旬成熟。桂北地区及柳州都能栽培,适宜南丰蜜橘种植的区域,第3年结果,丰产性好。     

柑橘砧木新品种‘蒲江香橙’的选育

‘蒲江香橙’是从四川省蒲江县白云乡实生野生香橙中经过多年观察和试验比较选择育成的柑橘砧木新品种。作为砧木,该品种树势强健,树冠圆头形,植株高大,枝条较硬、直立而密生、伸展。果实椭圆近扁圆形,果皮橙黄色,单果质量78.1~112.8 g,单果种子数32~43粒,平均37.5粒,种子质量占果实的10.1%左右,盛年期每株树可产种子3.5~5.5 kg。用作柑橘砧木,嫁接亲和性好,接穗品种早结、丰产、稳产,果实品质优良,遗传性状稳定。抗寒、抗涝、耐碱性土壤。适合在四川柑橘主产区作砧木使用。     

脐橙品种‘赣南早’与‘纽荷尔’对柑橘溃疡病的抗性比较

【目的】比较分析‘赣南早’与其芽变前的‘纽荷尔’品种叶片气孔及表皮形态特征、叶片解剖结构及对柑橘溃疡病的抗病性,为生产中合理布局早晚熟脐橙品种,推广‘赣南早’品种提供科学依据。【方法】通过离体叶片针刺接种检测‘赣南早’与‘纽荷尔’品种对柑橘溃疡病的抗性反应、电镜扫描及石蜡切片等技术观测2个品种叶片解剖结构,测定2个品种接种溃疡病菌后植株体内5种与抗性相关防御酶活性的变化,分析柑橘溃疡病菌对2个品种的诱导抗性。【结果】接种试验表明侵染‘纽荷尔’品种感病所需的柑橘溃疡病菌最低浓度为1.0×106CFU·m L-1,小于‘赣南早’所需最低浓度1.0×107CFU·m L-1,溃疡病菌在‘纽荷尔’品种上比在‘赣南早’品种上易于扩展和形成病斑;两个品种在气孔密度、叶片厚度、栅栏组织和海绵排列紧密度上均存在差异,酶活性测定表明接种溃疡病菌后2个品种体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)等相关防御酶活性均有不同程度的提升,但2个品种间相关酶活性变化程度差异不显著。【结论】通过对‘赣南早’和‘纽荷尔’2个品种抗病性测定及叶片解剖结构特征发现‘赣南早’品种对柑橘溃疡病的抗性强于其芽变前的‘纽荷尔’品种。     

柑橘CAPS 标记和AS-PCR 引物的开发

 以从GenBank中下载的93 955条甜橙[Citrus sinensis（L.）Osbeck]EST序列为源序列,利用QualitySNP软件包从中挖掘出1 521个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）候选位点。进一步利用酶切位点查找软件WatCut进行分析,发现其中125个SNP为酶切扩增多态性序列（cleaved amplified polymorphic sequences,CAPS）位点。随机挑选40个CAPS候选位点设计引物,对12个含多种类型的柑橘品种进行分型,以此验证各标记的有效性。同时,还挑选了25个经生物信息学预测可导致其编码蛋白氨基酸序列改变的SNP位点,分别设计出一组等位基因特异PCR（allele specific PCR,AS-PCR）引物,以6个不同类型柑橘品种的DNA为模板进行PCR扩增,扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳进行检测,筛选多态性引物。结果显示,40个CAPS候选位点中有26个位点具有酶切扩增多态性,且分型结果稳定,可作为CAPS标记。此外,还筛选获得15组在不同柑橘品种间检测到多态性的AS-PCR引物,重复性好,可有效用于柑橘品种的SNP分型。     

枳感染柑橘衰退病病毒后的应答基因分析

 枳（Poncirus trifoliata L.）高抗柑橘衰退病病毒（Citrus tristeza virus,CTV）,但相关抗性机理仍不为人所知。以嫁接健康枝条的无毒枳作为对照,用Affymetrix柑橘基因芯片分析了感染CTV后枳叶片中基因的表达变化情况。结果共检测到表达量差异倍数≥ 2的基因295个,其中216个表达上调,79个表达下调。BLAST2GO分析发现,差异表达的基因中与抗逆反应相关的基因最多,乙烯、茉莉酸、赤霉素、脱落酸、生长素、水杨酸等植物激素代谢和调节相关基因为数不少,一些编码细胞壁形成或组分相关蛋白的基因差异表达明显。本研究可为揭示枳抗CTV的机理提供了转录组学线索。