固相RIA法测定血浆孕酮监测黄牛产后卵巢机能

应用１２５Ｉ固相放射免疫分析法，对２２头鲁西母黄牛产后期血浆孕酮（Ｐ４）的变化作了测定，以监测黄牛产后卵巢机能。结果表明，产后（１３．６±４．４）ｄ以前，母牛血浆Ｐ４浓度仍处于基础水平〔（０．３４±０．０４）～（０．５５±０．０６）μｇ／Ｌ〕，随后，Ｐ４开始升高，出现卵巢活动。代表卵巢活动的Ｐ４曲线可分为４种类型：Ⅰ型，产后（１０．６±３．９）ｄ后，曲线呈现３个正常的黄体周期；Ⅱ型，产后（１３．６±４．４）ｄ后，首先出现１个８．５ｄ左右的短黄体周期，接着出现２个正常的黄体周期；Ⅲ型，于产后（１２．５±３．９）ｄ后，先出现１个正常的黄体周期，继之出现１个短黄体周期和１个正常黄体期；Ⅳ型，产后（１２．５±２．５）ｄ后，出现不规则的黄体周期中，最低Ｐ４水平为（０．４５±０．１５）～（０．６０±０．３８）μｇ／Ｌ，最高浓度为（２．６５±１．９５）～（４．１７±２．３５）μｇ／Ｌ。试验表明，每隔４ｄ测定１次血浆Ｐ４浓度，可准确地判定母牛的发情周期     

基于单克隆抗体的O型口蹄疫病毒抗体固相竞争ELISA检测方法的建立

为建立评价O型口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫水平的方法,本研究以单克隆抗体(MAb)3D9为捕获抗体,以HRP标记的MAb 8E8作为检测MAb,经过条件优化建立了基于MAb的检测O型FMDV抗体的固相竞争ELISA(SPCE)方法。对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验。结果显示,MAb 3D9的最佳稀释度为1:25 000,灭活O型FMDV抗原的最佳稀释浓度为1:3,HRP标记的MAb 8E8的最佳稀释度为15 000,当血清1:32稀释时,检测的临界值确定为45%。该方法分别检测A型FMDV抗体阳性参考血清以及牛冠状病毒、牛轮状病毒以及猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒的标准阳性血清,检测结果均为阴性,未出现交叉反应。经检测,当阳性标准血清的抗体稀释度在1:512时,该方法仍具有较好的敏感性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明其重复性较好。并将该方法与液相阻断ELISA(LPBE)方法和病毒中和试验(VNT)的相关性进行了比较,结果显示该方法与LPBE和VNT的相关性分别为0.896和0.923。本研究为国内评价O型FMDV疫苗免疫水平建立了一种新的方法。     

奶牛孕酮单克隆抗体的制备及鉴定

奶牛妊娠的早期诊断,对奶牛生产具有重要意义,对于未妊娠母牛失误诊断,会错失下一个情期配种任务的安排,造成产犊间隔延长、繁殖率降低等问题。对早期妊娠的检测有多种方法,临床上通常把血、奶中孕酮的含量作为判断反刍动物怀孕与否的可靠依据。以甾体类激素孕酮为研究对象,利用琥珀酸酐法将11α-羟孕酮活化,运用碳二亚胺法选择BSA为免疫抗原载体,OVA为检测抗原载体与孕酮进行偶联反应,聚丙烯酰胺凝胶电泳表明偶联成功。P-BSA乳化后皮下免疫小鼠,3次免疫后血液效价最大达到1∶(243#10~3)。通过淋巴细胞杂交瘤技术获得针对孕酮的3株单克隆抗体细胞株2H3、2C3、C3H11。3株单抗诱生的腹水经纯化柱纯化,均未与雌二醇发生反应,特异性较好,为尽早检测出未妊娠牛,以适时治疗不孕牛、尽早淘汰劣质牛提供简便迅速的方法。     

微波固相法合成蛋氨酸螯合铬及其品质分析

试验以蛋氨酸和六水氯化铬为原料,研究微波固相法合成氨基酸螯合铬的最佳工艺条件,并对产品进行理化分析。结果表明,最佳工艺参数为配体摩尔比3:1,微波功率600w,微波辐射时间150s,引发水剂量20mL,此条件下产率可达到56.7%。采用红外光谱分析,确认所制的产品为络合盐。试验结果表明螯合率为82.1%,产品纯度为91%,其中蛋氨酸含量为86.63%,Cr含量为11.50%。在水溶液中蛋氨酸螯合铬比较稳定;在生理条件下,产品溶解性较好。     

孕酮-ARIS的建立

本研究利用酶蛋白激活免疫测定系统(ARIS)原理,以黄毒腺嘌呤二核苷酸(FAD)作为孕酮(P4)的标记物,建立了P4-ARIS方法学。测定系统的灵敏度达到47.46bpg孔-1,标准曲线的拟合度为0.99692.75×10-3(n=8),与P4-RIA平行试验,测值的相关系数为r=0.9033(y=-6.2879 1.2730RIA)。为研制P4-ARIS现场测定试剂盒奠定了基础。     

鼻疽固相溶血试验的研究

研究确定用1:2.5～1:3补体与1:2鼻疽血清等量混合后,滴加于含1:5鼻疽抗原致敏红细胞的琼脂糖凝胶反应盘的相应孔中,置于4℃或15～29℃下感4～12h,可以产生直径在8.1mm以上的溶血环。对健马及马传贫等6种传染病马血清做检测,则不引起溶血反应。以31匹M~+马血清的CFT结果和扑杀10匹鼻疽马血清的CFT及病理组织学变化做依据,确定了固相溶血试验(S_p—HLT)的判定标准,即溶血环直径在6.0～7.0mm的为阴性,7.1～3.0mm的为疑似,8.1mm以上的为阳性。以此标准检测了411匹马(来自鼻疽疫区的368匹.鼻疽清净区健马43匹)。结果,疫区马血清CFT阳性率为5.2％,Sp—HLT阳性率为7.6％;43匹健马血清的CFT和Sp—HLT均为阴性。Sp—HLT检测方法简便,快速,检出率较CFT略高,从病理组织学角度考虑并非假阳性。由此认为,用Sp—HLT代替CFT进行鼻疽检疫是可行的。     

固相萃取技术及其在兽药残留分析中的应用概况

简述了固相萃取技术的原理、特点、吸附剂的种类、固相萃取柱的选择和方法的建立，总结了该技术在兽药残留分析中的应用进展。     

固相法合成有机微量元素——甘氨酸铁

有机微量元素是一种集高效、安全、环保为一体的绿色饲料添加剂。长期以来,对有机微量元素的螯合都是以液相合成方法为主。随着技术进步和人们理念的更新和提高,提出了固相法合成理念。检测表明,固相法合成氨基酸螯合物能达到同类液相法合成的螯合物技术水平。此文以甘氨酸∶硫酸亚铁=2∶1,混合均匀后,在N2保护下、75℃左右、反应30min合成甘氨酸铁,收率达96.5%,反应过程简便、安全,产品性价比高,市场前景广阔。     

固相免疫吸附剂的制备

固相免疫吸附剂可以通过物理吸附和化学结合两种方法制备 ,本文对影响固相免疫吸附剂质量的各种因素的研究进展进行了综述。     

多拉菌素注射液含量测定中适用的固相萃取柱考察研究

为完善多拉菌素注射液质量标准，对多拉菌素注射液含量测定中适用的固相萃取柱进行了考察研究。采用C18柱（5μm，150mm×4.6mm），以甲醇-乙腈-水（67：15：18）为流动相，以245nm为检测波长，流速为1.0mL/min。结果表明，该方法准确、简便、快速，考察的固相萃取柱能用于多拉菌素注射液含量的测定。     

提高液相色谱固相萃取柱使用效率的可行性研究

在检测乳品中三聚氰胺时,使用固相萃取柱可简化前处理过程并提高样品纯度,但其价格较高。为降低检测成本,本研究根据待检乳制品样品的性质和固相萃取柱的特性,研究了固相萃取柱的回收再利用可行性。结果表明,可重复使用3次的固相萃取柱,其回收率符合国家标准,将其推广应用可节省大量检测成本。     

奶牛子宫复旧期间雌激素与孕酮变化规律的研究

子宫复旧是奶牛产后生殖器官恢复的一个重要时期,复旧时间的长短会直接影响产后第一次发情的时间。本试验为研究雌激素和孕酮在子宫复旧过程中的变化规律,选择了年龄、胎次相近,健康状况良好的产后奶牛15头,应用放射免疫分析法在子宫复旧期间每3d对雌激素、孕酮测定一次,前后持续10次,由试验数据可得出,雌激素、孕酮在子宫复旧早期阶段呈下降趋势,但在18d时浓度都达到了一个峰值,至末期时雌激素水平开始下降,而孕酮水平开始逐渐上升。     

磁性固相萃取在牛乳抗生素残留检测中的应用

前处理过程一直是样品分析的关键步骤,直接影响检测结果。作为一种新兴的样品前处理技术,磁性固相萃取(magnetic solid phase extraction,MSPE)以其操作简便、成本低廉、用时较短、环境污染小等特点成为分析检测领域的研究热点。牛乳中抗生素的残留问题由来已久,抗生素滥用可以引起机体过敏、耐药和二度感染等毒、副作用,近年来将MSPE应用于牛乳中抗生素残留检测的研究大量涌现。本文综述了牛乳中抗生素的来源与危害以及近5年来MSPE在牛乳抗生素残留检测分析中的应用情况。     

抑制素被动免疫对黄体中期山羊生殖激素分泌的影响

为了探讨抑制素在山羊生殖激素分泌调节中的作用 ,本试验用抗抑制素血清对黄体中期雌山羊进行了被动免疫试验。将酪 30 -抑制素 α(1,30 ) NH2 与兔血清白蛋白螯合 ,用去势雄山羊制备抗抑制素血清 (INH- AS) ,最终滴度为 1∶96 0 0 0。对照血清来自牛血清白蛋白免疫的去势雄山羊。 12只黄体期日本 SHIBA山羊 ,肌注 PGF2α(2 mg/只 )进行同期发情处理 ,处理后 3～ 5 d母羊出现发情。在发情后 10 d(发情当天为 0 d) ,将母羊分为 2组 ,每组 6只。试验组颈静脉注射 INH- AS(2 0 m L /只 ) ,并在注射前 (0 h)和注射后 6、12、2 4、4 8、72、96、12 0 h采取外周血样 (肝素抗凝 ) ;对照组注射对照血清 (2 0 m L/只 )。抗凝血样离心 (4℃、170× g、15 min)分离血清 ,- 2 0℃保存待测。血清 FSH和 L H含量用NIDDK放免试剂盒测定 ,其中 FSH标记纯品为 NIDDK- o FSH- I- 1,标准品为 NIDDK- o FSH- RO- 1,一抗为 NIDDK-抗- o FSH- 1;L H标记纯品为 NIDDK- o L H- I- 3,标准品为 NIDDK- o L H- RP- 2 4 ,一抗为抗 - o L H- YM。二抗为山羊抗家兔Ig G。血清 E2 和 P含量用1 2 5I放免盒测定。测 E2 时 ,为除去游离脂肪 ,样品用 0 .5 m L乙腈 +2 m L乙烷处理。试验结果表明 ,注射 INH- AS后 12 h,血清 FSH含量显著提高     

Measurement of Faecal Progesterone Metabolites and its Application for Early Screening of Open Cows Post-insemination

The present study investigated the changes of serum progesterone (P4) and its faecal metabolites in pregnant and non-pregnant cows (Expt 1) and the feasibilty of using faecal P4 metabolites for early screening of open cows post-insemination (Expt 2). In Expt 1, seven crossbred Holstein-Friesian (HF) cows were studied. Serum and faecal samples were collected once daily from the day of artificial insemination (AI) until 25 days after AI. In Expt 2, 27 crossbred HF inseminated cows were employed. Serum and faecal samples were obtained on the day of AI (day 0) and on days 19-22 post-insemination. Enzyme immunoassay measurements of serum P4 and faecal P4 metabolites were established. The low detection limit of the assay was 0.01 ng/ml and the amount of P4, resulting in a 50% reduction in the initial binding value, was 1.07 ng/ml. The intra- and inter-assay coefficients of variation were <8% and <14%, respectively. A positive correlation between the levels of serum P4 and faecal P4 metabolites was found in every single cow (r = 0.73-0.88, p < 0.001) and pooled data (r = 0.78, p < 0.001). The estimated value of faecal P4 metabolites at 100 ng/g of faeces was equal to the serum P4 levels of 1 ng/ml. The accuracies of pregnancy and non-pregnancy diagnosis based on the analyses of faecal P4 metabolites between day 0 and days 19-22 post-insemination, were 67% and 100%, respectively. In conclusion, the measurement of faecal P4 metabolites can be a potentially alternative method for early screening of open cows post-insemination with the same accuracy and precision, as measured by serum P4 assay.     

冰草组织培养再生体系建立及耐旱转基因研究

本研究以冰草属植物中的4个品种——蒙古冰草新品系(A.mongolicum Keng)、航道冰草(A.cristatum cv.Fairway)、诺丹冰草(A.desertorum cv.Nordan)和一个种间杂种冰草——蒙农杂种冰草(A.cristatum×A.desertorum cv.Hycrest-Mengnong)为材料,分别以幼穗为外植体建立了冰草组织培养再生体系。在此基础上,以调控脯氨酸生物合成最后一步的关键酶的突变体基因P5CS为目标基因,bar基因为筛选标记基因,用基因枪法轰击幼穗诱导的愈伤组织,获得转基因植株。利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA中分离得到了CBF4及其启动子,并对CBF4启动子进行了序列分析和初步的功能分析。     

超数排卵处理沼泽型水牛血清E_2和P_4浓度变化研究

研究利用3种不同的方法超数排卵处理沼泽型水牛,比较研究不同方法处理时水牛血清雌二醇(E2)、孕酮(P4)浓度变化规律。结果表明:进口FolltropinR○-V、国产FSH和PMSG超数排卵处理沼泽型水牛,血清E2浓度峰值分别出现在氯前列烯醇(PGc)处理后的48 h([142.45±94.66)pg/mL]、72 h([87.78±29.62)pg/mL]、48 h([126.38±92.33)pg/mL];血液中P4浓度最低值分别出现在PGc处理后的48 h([0.76±0.21)pg/mL]、24 h([1.18±0.12)pg/mL]和144 h([0.82±0.06)pg/mL]。     

囊虫病特异诊断方法的研究

应用间接ELISA对囊虫粗抗原、B抗原、用等电聚焦技术分离的抗原组分及特异McAb亲和层析抗原的特异性作了评价,结果均不理想。用McAb分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原决定簇,又有非特异性决定簇。应用特异McAb以R-PIⅡ和Ⅰ-ELISA检测囊虫病人和猪的血清抗体,结果完全消除了假阳性反应;用R-PIⅡ微量法和Ⅰ-ELISA检测,病人血清的阳性率为87.36%(76/87)和89.66%(78/87),病猪血清的阳性率为89.32%(92/103)和86.41%(89/103);用R-PHI玻片法检测,病猪血清的阳性率为87.32%(90/103)。     

分子印迹固相萃取在兽药残留分析中的研究与应用

随着兽药残留分析前处理技术的不断发展,分子印迹固相萃取技术(MISPE)已成为兽药残留分析前处理领域的研究热点.就该技术在兽药残留分析中的研究应用现状作一综述.