西北粳稻成熟胚高频再生体系研究

【目的】研究基因型、培养基、激素、碳源的种类和质量浓度对西北粳稻成熟胚培养特性的影响,建立西北粳稻成熟胚离体再生体系。【方法】以4个西北粳稻品种宁粳16、宁粳34、宁粳35和宁粳38的成熟胚为材料,利用组织培养法,对水稻成熟胚进行脱分化和再分化,获得再生植株,研究培养基、基因型及激素、碳源质量浓度和种类对西北粳稻成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。【结果】基因型对西北粳稻成熟胚培养的影响较大,参试材料中宁粳34的培养特性最好;N6和NB 2种培养基对西北粳稻培养效果的影响随粳稻品种基因型的不同而不同;诱导培养基中添加2,4-D的质量浓度以2 mg/L为好,添加0.2~0.5 mg/L的6-BA可提高西北粳稻成熟胚的愈伤组织诱导率和绿苗分化率。以麦芽糖和蔗糖为碳源时,西北粳稻愈伤组织诱导率和绿苗分化率均较高,蔗糖质量浓度为30~40g/L时培养效果最佳。【结论】基本明确了基因型、培养基、激素、碳源对西北粳稻成熟胚离体培养特性的影响效果,初步建立了西北粳稻成熟胚高频再生体系。     

小麦成熟胚高频再生体系的建立

以甘春24成熟胚为外植体,研究消毒方式、浸种时间、接种方式、2,4-D质量浓度等处理对愈伤组织诱导与分化的影响,旨在建立一套有效的小麦高频再生体系。结果表明,不同消毒处理、2,4-D质量浓度和接种方法对成熟胚愈伤组织分化有极显著影响,不同浸种时间对成熟胚愈伤组织分化的影响差异不显著。采用25%NaClO初次消毒25min,浸种后用25%NaClO消毒10min,对愈伤组织的诱导较好,对成熟胚伤害小,且污染率低;浸种15～21h,对成熟胚愈伤组织的诱导无明显差异,但浸种18或21h有利于胚性愈伤组织的分化;成熟胚刮碎处理,有利于愈伤组织的诱导与分化,其诱导率与绿点率分别为98.33%,62.04%;当2,4-D质量浓度为2.5mg/L时,甘春24胚性愈伤组织品质较好。     

粳恢35成熟胚的再生体系

以粳恢35成熟胚为外植体,研究粳恢35成熟胚在不同培养基中的诱导和分化,建立最佳的粳恢35再生体系培养方法。结果表明,不同培养基的诱导率和分化率不同;愈伤组织在NMBD2培养基增殖效果较好;分化培养基是加入6-BA 2 mg·L^-1、NAA 1 mg·L^-1、脯氨酸 500 mg·L^-1、谷氨酰胺500 mg·L^-1和 水解酪蛋白 300 mg·L^-1 的NMB培养基,分化效果最佳。并且无菌干燥处理 1 d 更利于愈伤组织的分化。     

小麦幼胚离体培养再生体系的建立

选择不同小麦品种的幼胚作为试验材料,对影响其愈伤组织诱导及植株再生的因素进行分析。结果表明,小麦幼胚组培最适胚龄为12~14 d;在最适胚龄下,基因型对胚性愈伤组织的发生频率影响较大,对小麦幼胚培养出愈率的影响并不显著。在加有2,4-D 1 mg/L+KT 0.5 mg/L的基本培养基中进行继代培养,晋农232、晋农318和晋农234胚性愈伤组织的诱导率最高,分别达74.6%,70.3%和60.8%。此外,培养基中添加一定量的含氮有机物,也可提高胚性愈伤组织的诱导率,即晋农232添加300 mg/L Gln,晋农318添加500 mg/L Gln+300 mg/L CH后,其胚性愈伤组织的诱导率均有显著提高。分化培养中,添加ZT 3 mg/L和NAA 1 mg/L对晋农232、晋农318和晋农234等3个品种愈伤组织诱导分化的效果最好,其再分化率分别达到72.5%,57.5%和62.5%。生根培养中添加IAA 0.8 mg/L的1/2基本培养基可以诱导芽快速生壮根。     

玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导和再生体系研究

[目的]研究玉米成熟胚组织培养条件和植株再生频率的影响因素,建立玉米成熟胚高效再生体系.[方法]以玉米成熟胚为材料,通过相关影响因子对成熟胚外殖体愈伤组织诱导、继代及分化培养影响的研究.[结果]2,4-D浓度在1.0-2.0 mg/L,NAA浓度为0.5-0.6 mg/L明显促进成熟胚愈伤组织生长;6-BA浓度为0.15mg/L时适合愈伤组织的继代培养;新自523在三个自交系中愈伤生长质量较好,并且容易产生胚性愈伤,早21愈伤组织较少,在0.5 mg/L NAA、1.5 mg/L6-BA、100 mg/L AgNO3浓度下早21分化能力和新自523相当,且两者都容易生根,再生苗频率达到30;-40;.B73分化和生根能力较弱.[结论]利用玉米成熟胚诱导产生愈伤、分化并产生再生植株是继幼胚再生体系有利的补充.     

小麦成熟胚再生体系影响因素的研究

[目的]研究小麦离体培养的影响因素,探索小麦成熟胚愈伤组织诱导、继代、分化和植株再生的有效方法,建立一套成熟的植株再生体系,为进一步转基因研究奠定基础。[方法]采用河南的5个不同小麦品种,经小麦种子消毒,无菌取胚,然后接入诱导培养基进行愈伤组织诱导,愈伤组织再经继代培养、分化培养以至小麦植株再生。通过对它们浸种时间和成熟胚离体培养过程的观察,研究了不同预处理时间和植物激素,如2,4-D、ABA、KT、IAA和NAA,对小麦成熟胚愈伤组织在诱导、继代、分化和植株再生方面的一些影响。[结果]15h的浸种时间效果好;4.0mg/L2,4-D有利于愈伤组织形成;在继代培养基中添加0.3mg/LABA有利于小麦致密愈伤组织的诱导及再生能力的保持;KT和6-BA对提高芽的分化有显著作用;附加浓度1.5mg/LNAA和0.2mg/LIAA的1/2MS培养基可有效促进生根。[结论]浸种时间、基因型对小麦愈伤组织的继代、分化和再生有很大的影响,添加一定的外源激素有利于提高其植株的再生频率。     

水稻成熟胚愈伤组织诱导及其植株再生

利用水稻成熟胚为外植体,接种在NB培养基上,分别附加不同的外源激素,以诱导愈伤组织并促其分化,最终获得水稻再生植株.结果表明:2,4-D对愈伤组织诱导起决定性作用,当它与低浓度的6-BA配比时更有利于前期愈伤组织的诱导,而高浓度的6-BA则有利于后期芽丛的分化.     

黑麦草成熟胚离体培养技术研究

以黑麦草成熟胚为外植体材料,对外植体的灭菌、愈伤组织的诱导、继代及植株再生及其过程中部分影响因素进行了研究。结果表明:用75%酒精对外植体处理60 s后,用75%NaClO原溶液(有效氯为7%~10%)灭菌25~30 min,灭菌效果最佳。基本培养基类型、植物生长调节剂对愈伤组织诱导均有影响,采用MS为基本培养基,添加2,4-D浓度为2.0~3.0 mg/L,6-BA浓度为0.1 mg/L时最高诱导率达86.67%。     

玉米成熟胚愈伤诱导及再生体系建立

合适的受体材料是玉米成功转化的关键,本实验试图通过成熟玉米来诱导愈伤,为转化提供材料。选取生产上常用的几个玉米系为材料,参考相关文献,摸索组织培养条件将成熟胚诱导愈伤,来获得再生植株。     

宁夏水稻不同外植体再生体系的研究

以4个水稻品种为材料,研究了不同外植体和基因型的组织培养特性。结果表明,不同外植体的组织培养特性差异较大,总体表现为幼胚优于成熟胚优于花药。基因型对水稻组织培养影响较大,成熟胚和幼胚为外植体时宁粳34培养效果最好,愈伤组织诱导率分别为71.9%、81.5%,绿苗分化率分别为51.0%、63.3%;花药为外植体时宁粳35的培养效果较好。不同培养基对不同外植体和基因型品种的培养效果不同,成熟胚为外植体时,NB培养基对宁粳16和宁粳35有利;幼胚培养时NB培养基对宁粳35和宁粳38有利;花药培养中宁粳35在A4培养基上表现出较好的培养特性,和N6相比绿苗分化率显著提高。     

5个水稻品种的再生能力比较

[目的]通过对天津市推广种植水稻品种进行组织培养,探索适合天津市推广水稻品种的培养条件,为天津市水稻的遗传改良工作奠定基础。[方法]对5个天津市推广种植的水稻的成熟胚进行离体培养,研究诱导和分化培养基、激素配比、不同接种方式及分化前不同预处理等对其再生的影响。[结果]在NB培养基中添加2．00mg／L2,4一D和0．50mg／L6．BA比只添加2．00mg／L2。4一D的愈伤诱导率高3．79一14．64个百分点;对于津原系列的品种其半粒接种方式愈伤诱导率要高于整粒接种方式;NB＋1．00mg／L6一BA＋0．25mg／LN从＋2．00mg／LKT的分化培养基得到了较高的分化率;干燥处理和预分化均能提高愈伤分化率。[结论]该研究探索影响水稻成熟胚愈伤组织诱导和分化的因素,建立其植株再生体系,为进一步的遗传转化奠定了基础。     

粳稻成熟胚高频率再生因素的研究

以水稻成熟胚为外植体,就不同基因型、不同激素浓度对愈伤组织诱导、继代及分化的影响进行研究,并建立了水稻成熟胚高频再生系统。研究结果表明:NMB、NB、CC为较适宜的培养基,可以用于北方粳稻愈伤组织的诱导;在诱导过程中加入2,4-D1～2mg/L有利于愈伤组织的诱导;在继代的过程中加入甘露醇4g/L可明显改善愈伤组织的质量;诱导分化时,进行预分化-分化培养可以显著提高分化率。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

微量元素对宁夏粳稻愈伤组织绿苗分化的影响

通过调整MS培养基中碘、硼、锰、锌、钼、铜、钴以及铁8种离子的有无及浓度,研究了微量元素对宁夏粳稻愈伤组织分化成苗的影响.结果表明:缺少碘、硼、锰、锌、钴的培养基对粳稻愈伤组织分化成苗影响不大,缺少钼的培养基对愈伤组织分化成苗有一定的影响.而缺少铜和铁的培养基则对宁夏粳稻愈伤组织分化成苗产生很大影响.在培养基中添加不同浓度的铁和铜元素的试验表明在铁盐浓度为0.05 mmol·L-1,铜离子浓度为1.0×10-4 mmol·L-1时,分化成苗效果最好,而此试验中设置的其他铁离子和铜离子浓度均对粳稻分化和生长均产生不利影响.     

不同预处理对小麦成熟胚愈伤组织形成的影响

研究了低温、CaCl2 、PEG 3种预处理对 18个小麦品种成熟胚愈伤组织形成的影响 ,结果表明 :不同预处理对小麦成熟胚愈伤组织的形成有显著影响。PEG处理对小麦成熟胚愈伤组织的形成具有显著促进作用 ;低温和CaCl2 溶液处理对小麦成熟胚愈伤组织的影响和小麦品种关系密切 ,品种间差别较大。     

玉米成熟胚愈伤组织诱导与继代培养的影响因素研究

以28个不同基因型的玉米成熟胚为试验材料,初步研究了培养基种类、基因型、消毒时间、切胚方式、变温处理、蔗糖质量浓度、酸水解酪蛋白质量浓度、2,4-D质量浓度等因素对愈伤组织诱导与继代的影响。结果表明:培养基、酸水解酪蛋白质量浓度、2,4-D质量浓度等因素对愈伤组织诱导率的影响不显著,但对继代过程中愈伤组织质量影响较大;其余5个因素对愈伤组织诱导率的影响显著,并且对继代培养中的愈伤组织质量也有明显影响。最终选出了3个高培养力材料,初步确定了比较适合玉米成熟胚愈伤组织诱导与继代的培养基。