多年生黑麦草中小麦矮腥黑穗病菌PCR 检测方法的建立

寄生于多年生黑麦草的Tilletia属腥黑粉菌共有4种,即小麦矮腥黑穗病菌Tilletia controversa（TCK）、黑麦草腥黑粉病菌T.lolii、T.vankyi、黑麦草粒腥黑穗病菌T.walkeri。本研究分析了黑麦草上冬孢子形态非常相似的3种腥黑粉菌的DNA序列差异,设计了TCK的特异引物,成功建立了TCK菌丝基因组DNA的特异PCR检测方法和冬孢子的套式特异PCR检测方法。     

小麦矮腥黑粉菌冬孢子萌发和室内人工接种方法的探索

小麦矮腥黑穗病是由小麦矮腥黑粉菌（Tilletia controversa?Kühn, TCK）引起的我国对外一类检疫性病害。本项研究对其病菌冬孢子的萌发、人工接种方法进行了室内试验。结果表明,参试菌株冬孢子在土壤浸提液培养基上45~50 d时达到萌发高峰,冬孢子浓度对萌发率有影响,浓度为(100~105)×10?4个/mL时萌发率最高。因此,可以选用此浓度作为室内TCK冬孢子萌发研究的适宜浓度。在室内进行TCK冬孢子的人工接种方法的研究表明,冬孢子在培养基上萌发后,将麦种放在培养皿盖中的湿滤纸上, 置于5 ℃的培养箱中培养,直到苗长到3~5 cm,然后将麦苗种植到直径为24 cm的塑料盆中,在白天30 ℃,夜晚18 ℃的生长箱中培养至植株成熟,可获得7%左右的发病植株。     

中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究:I.自发荧光显微学特性研究

 中美双方为探讨适用于进口粮检疫的小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)准确简便的鉴定方法,于1989~1992年进行联合试验。本文以美国不同时期和不同地域所收集的小麦矮腥黑穗病菌(TCK)和小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.,以下简称TCT)共135个菌株为材料,对这两种病菌的自发荧光显微学特性,作了比较研究,建立了数学模型,并在人工污染样品中进行了应用研究,结果表明,自发荧光显微学法和LI-F方程,可以有效地鉴别TCK或TCT菌株,但如应用于鉴别进口粮中混合的或少量的TCK、TCT冬孢子,则其准确率随孢子含量的下降而降低。     

中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究 Ⅰ.自发荧光显微学特性研究

中美双方为探讨适用于进口粮检疫的小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)准确简便的鉴定方法,于1989～1992年进行联合试验。本文以美国不同时期和不同地域所收集的小麦矮腥黑穗病菌(TCK)和小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.,以下简称TCT)共135个菌株为材料,对这两种病菌的自发荧光显微学特性,作了比较研究,建立了数学模型,并在人工污染样品中进行了应用研究,结果表明,自发荧光显微学法和LI-F方程,可以有效地鉴别TCK或TCT菌株,但如应用于鉴别进口粮中混合的或少量的TCK、TCT冬孢子,则其准确率随孢子含量的下降而降低。     

黑麦草腥黑粉菌分子检测方法的研究

寄生于黑麦草属植物有4种腥黑粉菌,分别是小麦矮化腥黑穗病菌(Tilletia.Controversa(TCK))、黑麦草腥黑粉菌(T.lolli)、黑麦草粒腥黑粉菌(T.walkeri)和新种(T.vankyi)。其中TCK、T.lolli和T.vankyi冬孢子形态非常相似,难以区分。本研究以寄生于黑麦草上的这3种腥黑粉菌为研究对象,设计T.lolli的特异引物,成功建立了T.lolli冬孢子的套式特异PCR检测方法。     

啤酒大麦加工工艺中药剂处理对TCK杀灭作用及孢子流向的研究

本试验根据啤酒大麦加工工艺流程中所采用的药剂及浓度为参考，设计不同浓度的漂白粉、石灰、甲醛以及石灰加漂白粉，对TCK冬孢子分别处理4h，置3％琼脂培养基上，然后放入5℃生长箱内培养，观察药剂处理对孢子萌发率的影响，结果表明：大麦加工工艺中所采用的漂白粉及石灰处理浓度不足以杀灭TCK冬孢子；其污水处理中采用0．05％浓度的甲醛有抑制孢子萌发的作用；而用清水浸泡的孢子在1个半月后仍有50％以上的萌发率。在啤酒大麦加工过程中，TCK冬孢子的流向主要为大麦下脚料，数量达到90％以上，而浸麦水和排放的污水中的孢子量很少。     

应用激光共聚焦显微扫描术研究小麦矮腥黑穗病菌和小麦网腥黑穗病菌冬孢子的自发荧光特性

本文应用共聚焦激光扫描显微术(CLSM)对小麦矮腥黑穗病(TCK)和小麦网腥黑穗病菌(TCT)冬孢子的自发荧光特性进行了研究。研究表明:在这两种冬孢子中,它们各自都含有自发荧光物质,而且都能在488nm、543nm这2种波长激发光激发下,分别在相应的510～530nm、580～600nm范围中得到相应发射光,只是在488nm波长激发光激发下,两种冬孢子发射出的光荧光强度最高,荧光光分布均匀,大体形态清楚;但层切扫描发现自发荧光在这两种冬孢子的空间分布存在明显差异:TCK冬孢子的自发荧光物质主要分布在外孢壁和网脊上,而在原生质中分布少;TCT冬孢子的自发荧光物质主要分布在原生质中,孢壁分布少,而网脊上不分布。应用CLSM在实际TCK检测工作中,能克服荧光显微镜存在的检测重复性较差、可靠性小的缺点,提升了TCK检验检疫的技术水平。     

中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究:II.比较形态学研究

 对美国135个小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)及小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.以下简称TCT)进行的比较形态学研究表明,网脊高度最具有鉴别意义。在中美双方所测的近万个数据中,TCK与TCT菌株的平均网脊高度值很少交叉,两个种在网脊高度上的区别具有种间的规律性和鉴别性。经人工污染样品及市场样品对各种模型的检测证明,根据逻辑方程推导出的临界网脊值可用于市场样品检验中对TCK的判别和鉴定,从而为准确、快速地鉴定进口粮中少量的或混合的TCK、TCT冬孢子提供了新途径。     

中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究 Ⅱ.比较形态学研究

对美国135个小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)及小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.以下简称TCT)进行的比较形态学研究表明,网脊高度最具有鉴别意义。在中美双方所测的近万个数据中,TCK与TCT菌株的平均网脊高度值很少交叉,两个种在网脊高度上的区别具有种间的规律性和鉴别性。经人工污染样品及市场样品对各种模型的检测证明,根据逻辑方程推导出的临界网脊值可用于市场样品检验中对TCK的判别和鉴定,从而为准确、快速地鉴定进口粮中少量的或混合的TCK、TCT冬孢子提供了新途径。     

进境小麦中沙地牧草腥黑粉菌的鉴定

从上海口岸进境的澳大利亚小麦中发现一种类似小麦印度腥黑粉病菌的腥黑粉菌冬孢子，对该菌冬孢子进行了形态学特征和PCR检测，根据结果，将这种冬孢子鉴定为沙地牧草腥黑粉菌Tilletia ehghartaTle；本研究设计了T．ehrhartaea的特异引物Eh2/Eh4，结合引物Till／Til4建立了T．ehdmrtae的套式PCR检测方法。     

套式PCR直接检测印度腥黑穗病菌冬孢子

用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板DNA ,利用印腥特异性引物T3 /T6,T3 /T4和套式PCR(nestPCR)扩增技术直接检测印腥冬孢子 ,检测的灵敏度可达 1个冬孢子。检测时间缩短为 1天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的PCR检测技术适用于口岸印腥检疫的需要 ,解决了常规PCR检测中DNA制备需要萌发冬孢子和检测时间长的难题。     

Survival of Tilletia indica teliospores under European soil conditions

As part of developing a European Pest Risk Analysis (PRA) for Tilletia indica , the causal agent of Karnal bunt of wheat, teliospore survival studies were done outside under quarantine containment at three European sites (Norway, UK, Italy). At each site, experiments were set up in three consecutive years (Experiments 1, 2 & 3) to determine teliospore survival over time (1–3 years) at 5, 10 and 20 cm depths. Experiments were sampled annually and survival assessed in relation to teliospore recovery and to germination at recovery (T0) and 3 months after recovery in case of burial-induced dormancy ( T3 ). Teliospores survived at all three sites at all depths over all the time periods studied. At each site, there was no evidence of a marked decline in teliospore recovery between sampling years, except in one set of years in one Norwegian experiment. There was no consistent effect of depth on recovery. In general there was little evidence for a marked decline in teliospore germination between sampling years. There was some evidence of a decrease in germination with increasing depth in the UK, and for some time-depth interactions. After 3 years' incubation (Experiment 1), mean teliospore recovery and mean germination were: UK: 61% recovery and 31% ( 33% ) germination for T0 (and T3 ); Italy: 30% recovery and 36% ( 29% ) germination; and Norway: 12% recovery and 19% ( 49% ) germination. Germination for laboratory controls ranged from 20–59% (UK), 18–41% (Italy) and 28–59% (Norway). There was no evidence for burial-induced dormancy except in Norway. Teliospores of T. indica can survive for at least three years in European soils. This prolonged period of survival could support establishment of the pathogen if it were introduced into areas of European cereal production.     

麦秆中腥黑粉菌冬孢子的鉴定

子鉴定为小麦印度腥黑粉病菌Tilletia indica.     

Cytological studies of the germinating teliospores and basidiospores of Puccinia penniseti

The teliospores ofPuccinia penniseti germinate within 48 hours if the optimum conditions of temperature and humidity are available to them. They have no resting period. On germination, they produce a three-celled promycelium in which the upper two cells contain nuclei and appear functional whereas the third, lowermost cell is without a nucleus. Each of the two cells normally gives rise to a quadrinucleate basidiospore, but occasionally uni- and binucleate basidiospores are produced. In these latter instances, the division of the nucleus in the basidiospore may continue until 8–16 nuclei have been produced. Presumably, all the nuclei but one degenerate before the basidiospore germinates to produce a monocaryon. A study of the nuclei in the promycelium as well as in the basidiospore shows that there are 5 chromosomes, 4 arranged in two pairs of different sizes, the fifth being the smallest and solitary.Samenvatting De teleutosporen vanPuccinia penniseti, de veroorzaker van de roest vanPennisetum typhoides, kiemen bij optimale temperatuur en vochtigheid binnen 48 uur. Ze vertonen geen kiemrust. Bij kieming produceren deze teleutosporen een driecellig promycelium. De terminale cel en de middencel bezitten elk een kern, de basale cel is kernloos. Het is normaal dat de beide eerstgenoemde cellen elk een vierkernige basidiospore vormen, doch soms wordt ook een één- of tweekernige basidiospore gevormd; in het laatste geval kan de kerndeling in de basidiospore doorgaan tot 8 of 16 kernen ontstaan zijn. Vermoedelijk degenereren alle kernen op één na voordat de basidiospore kiemt en een mycelium met éénkernige cellen vormt.Uit bestudering van de kernen in het promycelium en van die van de basidiosporen bleek dat er vijf chromosomen zijn, waarvan vier in twee paren van verschillende afmetingen en één, het kleinste, afzonderlijk.This paper is based in part on a thesis presented in July, 1964, to the University of Agra, Agra, India, in partial fulfilment of the requiment for the Ph. D. degree.     

电子辐照灭活小麦矮腥黑穗菌

电子射线辐照处理小麦矮腥黑穗菌冬孢子,5kGy的剂量可使冬孢子丧失萌发力失去活性.     

小麦矮化腥黑穗病菌侵染能力的研究

中美专家合作在美国犹他州对小麦矮化腥黑穗病菌的侵染能力进行了研究。试验采用不含抗病基因的小麦品种Cheyanne,播种前用溴甲烷对试验小区进行了熏蒸。接种物为含有多种致病型的冬孢子悬浮液,采用土壤表面喷洒冬孢子悬浮液的方法进行接种,接种密度为每cm20、0.88、8.84、88.45、884.49、8844.89、88449个孢子。结果表明,接种密度为每cm20.88个孢子时即可产生0.21％的穗发病率。对试验数据进行分析后表明,小麦矮化腥黑穗病菌的侵染规律符合侵染概率理论,在本试验条件下,单个孢子的侵染概率为0.0002。     

应用激光共聚焦显微扫描技术鉴别小麦矮腥黑穗病病菌和小麦光腥黑穗病病菌冬孢子

应用激光共聚焦扫描显微术(CLSM)对小麦矮腥黑穗病病菌(TCK)和小麦光腥黑穗病病菌(TFL)冬孢子的自发荧光特性进行了研究。结果表明,两种冬孢子各自都含有自发荧光物质,均能在488 nm激发光下,分别在510~550 nm、530~600 nm中得到相应的发射光,且呈现的荧光分布均匀,大体形态清晰;而层切扫描发现自发荧光在这两种冬孢子的空间分布存在明显差异:TCK冬孢子的自发荧光物质主要分布在外孢壁和网脊上,而在原生质中分布少;TFL冬孢子的自发荧光物质主要分布在孢壁,原生质中分布少。     

小麦光腥黑粉菌冬孢子总DNA提取方法比较

以小麦光腥黑粉菌冬孢子为试验材料,比较分析了改良CTAB法、氯化苄法、SDS法对小麦光腥黑粉菌冬孢子总DNA提取的效果。结果表明,SDS法无论在DNA纯度(R=A260 nm/A280 nm)和产量上均优于氯化苄法和CTAB法。利用SDS法能获得186 ng/mg的DNA产率,而氯化苄法和CTAB法只能分别获得145 ng/mg和112 ng/mg。采用SDS法提取的DNA纯度较高,-RSDS=1.485,氯化苄法(BC)和CTAB法所得DNA纯度无明显差异,分别为-RCTAB=1.254和-RBC=1.264。     

等离子体对小麦矮腥黑粉菌处理效果的扫描电镜观察

 Plasma treatment is a new physical sterilization technology.In this study the teliospores of Tilletia controversa Kühn(TCK) were treated with plasma,and then observed by Scanning Electron Microscope(SEM).The results showed that the teliospores were broken into pieces.It set up some bases for research on plasma treatment of masses of wheat seeds containing teliospores of TCK.     

土壤湿度对小麦矮腥黑穗病菌(TCK)冬孢子萌发的影响

通过土壤湿度对小麦矮腥黑穗病菌(Tilletiacontronversa Kühn,TCK)萌发率的影响试验研究表明,其冬孢子在土壤质量含水量为1%～28%(相对含水量3.57%～100%)范围内均可萌发,其适宜萌发的土壤质量含水量范围为10%～25%(相对含水量17.85%～89.3%),最佳土壤相对含水量范围在65%～75%之间;不同分离物在相同土壤湿度培养下,多数分离物冬孢子的萌发率之间差异不显著。根据分离菌T_t1和T_t2在不同土壤湿度下培养50d和60d的冬孢子萌发率,建立了TCK冬孢子萌发率与土壤相对含水量的关系模型,此结果为TCK的风险评估提供了基础数据。