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一种从香蕉果实提取高质量RNA的方法 总被引:19,自引:0,他引:19
从香蕉果实在中分离高质量的RNA是从分子水平上研究香蕉果实成熟软化过程中相关基因表达的重要前提。实验表明,用已报道的相关RNA的提取方法,即便利用已报道的从其它果实中成功提取出高质量RNA的方法,也不能从香蕉果实中分离出高质量的RNA。这主要是由于香蕉果实富含多糖、多酚和一些其它次生代谢物,在RNA提取过程中这些物质会与RNA共同沉淀,从而影响RNA的产量和质量。到目前尚无商业化的RNA抽提试剂盒适用于香蕉果实RNA的提取。因此,探索出从香蕉果实中提取高质量RNA的方法就具有十分重要的意义。本文所报道的RNA提取的简便方法,可从以香蕉果肉和果皮中成功提取高质量的RNA,产量可达48 ̄72μg·g-1·FW-1,且整个提取过程可在一天完成;通过测定其A240/260和A260/280的比值表明,该该方法可有效降低RNA提取过程中多糖、酚类物质和其它次级代谢物以及蛋白质的污染,提取方法所提取的RNA纯度较高;在1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后结果表明RNA在整个的提取过程中结构完整,未发生明显降解;利用RT-PCR技术,从所提RNA中成功克隆出了β-半乳糖苷酶基因cDNA片段,这表明其质量完全可满足进一步分子生物学研究的要求。 相似文献
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植物总RNA的提取方法很多,但是多数步骤烦琐,耗时较长,而且最后RNA的提取质量不高。采用Trizol法虽然所提RNA的质量较高,但是价格昂贵。本实验室在长期实践中摸索出一套快速高质量的植物总RNA的提取方法,现介绍如下:[第一段] 相似文献
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一种植物总RNA的快速提取方法 总被引:3,自引:0,他引:3
为验证NaAc/无水乙醇沉淀法提取植物总RNA的质量,本研究对小麦不同组织及其他不同种属植物花的总RNA进行提取和检验,结果表明,该方法提取的植物总RNA完整性好、纯度高。以Tubulin为参照对其余4个持家基因GAPDH、Actin、Rubisco和Ubiquitin的表达情况进行分析。扩增结果表明,选定的各持家基因在叶锈菌侵染不同时间的小麦叶片中的表达量并不一致,且各基因在小麦叶片中的丰度也存在差异。通过对几种基因的扩增,进一步证实该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物总RNA提取方法。 相似文献
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羊蹄甲果荚中总RNA提取的新方法 总被引:12,自引:0,他引:12
高质量RNA的获得是开展羊蹄甲分子生物学研究的基础,但要获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物材料的不同而有较大差异。目前已有多种从植物组织中提取RNA的方法。但是由于羊蹄甲中的次生物质含量较高,这些常用方法并不适用于羊蹄甲RNA的提取。本文介绍一种羊蹄甲果荚中总RNA的提取方法,它可以有效的排除羊蹄甲组织中大量存在的多酚类和多糖类物质的干扰。所得RNA样品经紫外分光光度计检测和1%琼脂糖凝胶电泳分析证明无明显降解,且具有较高的纯度。获得的RNA样品在纯度和浓度上都可以满足RT-PCR,Northernblot和cDNA文库构建等分子生物学实验的要求。本方法尤其适用于多酚和多糖含量较高的植物组织的RNA提取,且试剂简单经济,试验结果稳定,重现性强。 相似文献
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一种新铁炮百合花瓣总RNA的提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究以新铁炮百合花瓣为材料,采用非异硫氰酸胍提取法、一步快速热酚抽提法、Trizoi试剂法、天为时代植物RNA抽提试剂盒法、Trizol试剂法与天为时代的植物RNA抽捉试剂盒相结合的改良法,提取花瓣总RNA.结果表明:Trizol试剂法与天为时代的植物RNA提试剂盒相结合的改良法是一种经济、有效的新铁炮百合花瓣总RNA的提取方法,能有效地抑制酚类物质、多糖等次生代谢产物对RNA的影响,可从新铁炮百合花瓣中获得质量高、完整性好的总RNA.提取的RNA经紫外光谱分析表明:A_(206)/A_(280)比值为1.722,电泳检测到28S RNA、18S RNA清晰的条带.反转录后双链cDNA的分子量大小分布区间介于0.1~5.0 kb之间,符合植物基因cDNA的长度范围,可满足下一步的分子实验. 相似文献
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烟草不同组织总RNA的提取方法初探 总被引:2,自引:0,他引:2
【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。 相似文献
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一种高效提取棉花不同组织总RNA的热硼酸改良法 总被引:23,自引:3,他引:23
针对棉花组织中酚类化合物、多糖、次级代谢产物的含量较多,以及内源RNase活性高等特点,将硼酸缓冲体系、蛋白酶K消化蛋白和氯化锂选择性沉淀RNA步骤偶联在一起,发展成一种有效提取棉花不同组织特别是棉纤维组织总RNA的热硼酸改良法。在提取RNA过程中,不需用酚/氯仿/异戊醇进行抽提,简化了RNA提取的操作步骤。从不同棉花组织提取的RNA质量均能满足cDNA文库的构建、差异显示、cDNA末端的快速扩增(RACE)以及Northern杂交等分子实验。 相似文献
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剑麻不同组织RNA提取方法比较分析 总被引:6,自引:0,他引:6
本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果,结果表明:不同缓冲液组成对实验结果影响很大,其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方法提取的RNA差异明显,其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提取,不仅产率高,而且RNA的质量也较好,无DNA污染,OD260/OD280分别为1.87、2.04和1.98,OD260/OD230分别为2.46、2.10和2.15,产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。 相似文献
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魔芋叶片中4种总RNA提取方法的比较 总被引:4,自引:0,他引:4
本研究分别利用TRIzol法、异硫氰酸胍法、改良的CTAB法及试剂盒这4种方法提取魔芋叶片的总RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对各个提取效果进行鉴定。反复试验的结果表明:TRIzol法难以提取魔芋叶片总RNA,异硫氰酸胍法提取的总RNA浓度低、杂质较多且有部分降解,这两种方法不适宜用于魔芋叶片总RNA提取;试剂盒方法提取的总RNA产率和纯度较高,但稳定性差、成功率低且成本较高;改良的CTAB法利用PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,水饱和酚-氯仿去除蛋白质,醋酸钾去除多糖,该方法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.893,而且效果稳定,有良好的可重复性。因此,我们认为改良的CTAB法是一种简便、快速且经济的提取魔芋叶片总RNA的方法。 相似文献
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云南重楼是多年生草本名贵中药材,高效规范化栽培云南重楼增加了叶部病害的发生几率。为了解云南重楼叶部病害,对云南重楼叶病斑处进行寄生真菌的初步分离,并对其进行形态学鉴定和分子生物学鉴定。经过分离获得19株形态各异的菌落,其中9株为附球菌属;7株为交链孢属 ;2株为黑团孢属;1株粉红单端孢菌。为研究云南重楼病害的病原鉴定及其发生规律和防治方法等提供技术参数,为探索更好的云重楼种植技术提供基础。 相似文献