蹄叶橐吾的栽培技术

蹄叶橐吾[Ligularia fischeri (Ledeb.)Turcz.]为菊科多年生草本植物,又名肾叶橐吾、马蹄叶、葫芦七、马蹄当归等.主要分布于中国东北、华北、湖南、湖北等地,吉林省延边地区各县均有分布.俄罗斯西伯利亚、朝鲜、蒙古、日本也有分布.生于海拔100～2700m的阴湿林下、林间、山区沟旁或阴湿草地.蹄叶橐吾性温,味辛、苦,其根和根茎入药,具有理气活血、止痛、止咳祛痰的功效,临床上治疗跌打损伤、劳伤、腰腿痛、咳嗽气喘、百日咳、肺痈咯血等症候,而民间用其叶作苦味健胃开胃药和化痰药以及作野菜食用.为了满足人们生活日益增长的需求,我们进行了蹄叶橐吾栽培技术的研究.     

蹄叶橐吾的研究进展

综述了近年来国内外对药用植物蹄叶橐吾化学成分、药理作用及组织培养等方面的研究进展。     

蹄叶橐吾化学成分及药理活性研究进展

蹄叶橐吾所含化学成分主要是三萜皂甙,此外还含其它萜类、肽类等;其中一些成分具有抗瘤,抗菌,消炎等活性。对国内外学者分离到的化学成分及其药理活性的研究结果作一综述,为该属植物资源的进一步研究和开发提供参考。     

蹄叶橐吾组织培养及快速繁殖技术研究

以蹄叶橐吾嫩茎为培养材料,进行愈伤组织诱导与分化、不定芽生根、试管苗移栽和定植的研究,建立起快速繁殖技术.结果证明:MS+BA 0.3 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L是愈伤组织诱导培养的理想培养基;MS+ BA 0.6 mg/L +NAA 0.1 mg/L是愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基;1/2 MS+IAA 0.1 mg/L,是生根培养的理想培养基;定植的试管苗其有植株整齐、叶色浓绿、根系发达等特点,同时保持了野生蹄叶橐吾的所有生物学特性.     

水分胁迫对蹄叶橐吾光合特性的影响

[目的]研究水分胁迫对蹄叶橐吾光合特性的影响。[方法]以1年生盆栽蹄叶橐吾幼苗为试验材料,研究了经正常处理和水分胁迫处理12d后蹄叶橐吾光合特性的日变化。[结果]正常条件下的光合速率、蒸腾速率、水分利用率日变化呈“双峰型”曲线,在水分胁迫下,蹄叶橐吾的光合速率和蒸腾速率、水分利用率日变化均呈峰值很小的“单峰型”曲线,并且净光合速率的下降是由气孔因素与非氕孔因素双重作用造成的,水分胁迫下非气孔限制是光合速率下降的主要原因,[结论]蹄叶橐吾的光合作用在城市中有一定的适应能力．但重度水分胁迫对其将造成严重影响。     

蜡梅花瓣基因组DNA提取及RAPD-PCR反应体系优化

以蜡梅花瓣为试材,用改良CTAB法提取基因组DNA,并设置不同浓度梯度对每个PCR反应因子进行相应试验,结果表明,改良CTAB法提取蜡梅花瓣基因组纯度高、质量好。并采用正交试验设计的方法,对蜡梅RAPD-PCR条件进行了优化,结果表明,最佳的蜡梅RAPD-PCR反应体系(20μL)为:1×buffer,1.0 U TaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物和模板DNA 30～40 ng;适宜的扩增条件为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸90 s,38个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。     

枣树基因组DNA提取及其RAPD体系优化

以不同生长期的枣和酸枣为研究对象,采用CTAB法提取枣基因组DNA;通过单因素5水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了枣和酸枣RAPD技术最优体系,即25μl反应体系中各组分含量为10×Taq Buffer+KCl 2.5μl;Taq DNA聚合酶0.04 U/μl;MgCl22.0 mmol/L;模板DNA2 ng/μl;引物0.3μmol/L;dNTP为0.2 mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃循环变性50 s,36℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸10 min。     

茄子基因组DNA提取及RAPD-PCR体系的优化

在CTAB基础上,系统地比较了提取缓冲液主要成分浓度的变化对提取茄子基因组DNA的质量及得率的影响,并以SDS法为对照,提出了一种适用于茄子基因组DNA的提取方法。进一步利用梯度PCR比较了BAPD-PCR反应体系中几个重要成分的浓度对PCR产物的影响,优化茄子BAPD-PCR反应体系,建立了茄子基因组适用的简单、稳定和重复性较好的BAPD-PCR方案。     

枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]研究枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化。[方法]采用了进一步优化的CTAB法提取枸杞基因组DNA,检测所提取的DNA的浓度范围,并对RAPD反应体系进行了科学、合理的优化。[结果]结果表明,浓度范围在3．5～5．5μg/μl,完全能够满足RAPD—PCR的要求。[结论]该方法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于枸杞基因组DNA的提取。     

长白山林下参基因组DNA提取及RAPD体系的优化

采用改良的CTAB法提取林下参的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析．筛选出的林下参RAPD反应的最佳体系为20“L,反应体系中包括模板DNA20ng,引物20pmol,dNTPs0．1875mmol／L,TaqDNA聚合酶1．5U,Mg^2＋2．0mmol／L,10×Reaction Buffer2．0mmol／L,其余部分用无菌超纯水补充．PCR扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环,72℃最终延伸7min．应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为通过分子标记获得丰富的林下参遗传信息奠定了基础．     

枸杞属RAPD反应体系优化

以枸杞属植物为材料,进行RAPD反应体系的优化.结果表明,在25 μl总反应体系中,以DNA模板量为30 ng,引物0.6 μmol/L,dNTP 150 μmol/L,Mg2+ 2.5 mmol/L,TaqDNA聚合酶0.75 U,10×反应缓冲液2.5 μl为最优反应条件.PCR的反应程序为:94 ℃预变性2 min,94 ℃变性20 s,36 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,5个循环;94 ℃变性20 s,40 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,40个循环;72 ℃延伸10 min.应用优化后的反应体系获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好.     

西蓝薹RAPD-PCR反应体系的建立与优化

以新型蔬菜西蓝薹为研究对象,采用改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,筛选了Taq酶、引物、DNA模板、Mg2+、dNTPs的浓度或用量,建立了西蓝薹RAPD-PCR的最佳反应体系:25 μL反应体系中含0.8 U Taq酶、0.40 μmol/L引物、30 ng DNA模板、1.6 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTPs、2.5 μL 10×PCR buffer.利用优化的反应体系,对5个西蓝薹品种进行体系稳定性检测,结果表明该反应体系的重复性和稳定性良好.     

西瓜RAPD-PCR体系的正交优化研究

采用正交试验设计的方法,建立了西瓜RAPD分析的优化反应体系,即20μL反应体系中含有1×buffer,dNTP250μmol/L、Primer0.4μmol/L、MgCl22.0mmol/L、Taq酶1U和模板DNA20~40ng。适宜的扩增条件为94℃5min;94℃30s,37℃45s,72℃90s,45个循环;72℃5min;4℃保存。     

桃属植物RAPD反应体系的优化

以‘Yuuzora’、珲春桃、有明及其F1杂种群体为试材,对桃属植物的RAPD反应体系进行优化,结果表明:25μL总反应体积中含模板DNA10~200ng,引物20pmol,dNTP150μmol/L,MgCl21.5mmol/L,国产TaqDNA聚合酶1unit,10×反应缓冲液2.5μL,其余用重蒸馏水补充.热循环条件为:预变性94℃,5min,变性94℃,1min,退火36℃,1min,延伸72℃,2min,共50个循环;72℃最终延伸5min.应用优化后的反应体系获得的RAPD指纹图谱带型清晰、重复性好.     

黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立

以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi     

栝楼的RAPD-PCR体系建立与优化

[目的]建立栝楼的RAPD-PCR体系并对该体系进行优化。[方法]以栝楼叶片为材料,采用CTAB法提取栝楼叶片基因组DNA,利用正交设计对RAPD-PCR体系进行优化。[结果]各因素水平变化对PCR反应影响大小依次为：Mg2＋、TaqDNA聚合酶、引物和dNTPs。通过试验分析,优化的栝楼RAPD反应体系为：在25μl反应体系中,含10×buffer2.5μl,Mg2＋2.0mmol/L,Taq酶1U,引物0.8μmol/L,dNTPs0.1mmol/L。反应程序为94℃预变性2mim;94℃变性30s,37℃退火温度40s,72℃延伸1.5mim,36次循环;72℃延伸10mim,4℃保存。[结论]该研究建立的栝楼RAPD反应体系稳定可靠,为栝楼性别鉴定、遗传多样性分析、亲缘关系分析等方面的研究提供了有效的方法。     

卷丹百合RAPD-PCR反应程序的优化研究

采用CTAB法提取卷丹百合的基因组DNA。采用正交设计和单因素试验相结合的方法,对卷丹百合RAPD—PCR反应程序中各影响因素进行了优化。结果表明：卷丹百合最佳的RAPD—PCR扩增程序为94℃预变性4min;94℃变性30s、39℃退火40s、72℃延伸1min,45个循环;72℃延伸10min。     

甘薯叶RAPD反应条件的优化

以甘薯叶为试材，系统分析了MgCl2浓度，dNTP浓度，随机引物用量，模板DNA用量，TaqDNA聚合酶浓度对RAPD反应的影响，建立了一套稳定的RAPD反应体系，该体系反应体积为25μl；含2.5μlPCRBuffer,MgCl2浓度为3nmol/μl/dNTP浓度为0.4nmol/μl，随机引物用量为40ng，模板DNA用量为40ng,TaqDNA聚合酶浓度为0.25U。     

茄子RAPD分子标记体系的建立与优化

采用改良的CTAB法提取茄子基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,比较筛选RAPD扩增体系的各影响因素,建立了茄子RAPD-PCR的最佳反应体系:20μL反应体系其中含25 mmol/L MgCl2 2.0μL1、0×PCR Buffer 2.0μL、10mmol/L dNTP 0.5μL5、U/μL Taq E 0.2μL0、.1μmol/L Primer 3μL1、0 ng/L模板DNA 3μL、灭菌双蒸水9.3μL。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,37℃退火1 min7,2℃延伸1.5 min4,5个循环;72℃延伸10 min后4℃保存。     

草莓RAPD反应体系的优化

以草莓幼叶为试材,进行RAPD反应扩增体系的优化.对模板、dNTP、引物、MgCl2和Taq DNA聚合酶等条件进行优化.结果表明,在20 μL的反应体系中,以DNA模板用量25 ng,引物用量为0.15 μmol·L-1,dNTP用量为120μmol·L-1,Mg2+用量为2.5 mmol·L-1,Tap DNA聚合...