绿脓杆菌快速诊断原的制备与应用研究

使用绿脓杆菌PA-SD-1株制备平板凝集诊断原,鉴定合格后,对山东不同地区的三个羊场进行绿脓杆菌的血清学调查,结果表明羊只绿脓杆菌平均感染率为67．2％,最高可达81．6％。对羊场周围土样和场内粪便进行绿脓杆菌的分离,并用NAC鉴别培养基进行该菌的鉴定和小鼠攻毒试验,结果表明绿脓杆菌广泛存在于羊场周围环境中。     

新疆和田地区羊源绿脓杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了解新疆和田地区某规模化羊场羔羊腹泻病例主要感染的病原菌及其耐药情况,试验采集腹泻羔羊肛拭子进行细菌的分离培养、革兰氏染色,挑取纯化后的单菌落进行生化鉴定和16S rRNA基因鉴定,并对分离菌株进行药敏试验和小鼠致病性试验。结果表明：分离菌株革兰氏染色镜检可见单个存在或成对排列的革兰氏阴性短杆菌,结合生化试验结果初步鉴定为绿脓杆菌,命名为6f。该菌株16S rRNA序列在NCBI中进行BLAST比对发现,与绿脓杆菌菌株核苷酸相似性达到100%,高度同源,最终鉴定分离菌株6f为绿脓杆菌。分离菌株6f对头孢拉定、卡那霉素、氨苄西林等14种抗生素高度敏感,对头孢他啶、多黏菌素B中度敏感,对青霉素、克林霉素、麦迪霉素、万古霉素耐药。分离菌株6f对小鼠具有强致病性。说明引起该规模化羊场羔羊腹泻的病原菌是绿脓杆菌,该菌对大多数抗生素敏感。     

山东地区羊绿脓杆菌的分离鉴定及系统发育分析

近年,山东省规模化羊场羊患慢性化脓性肺炎病例频繁出现,为了探明其病原及特点,本试验在流行病学调查基础上,对山东省6个地区10个规模化羊场的病、死羊进行临床症状观察、病理学检查,对所分离的菌株进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16SrRNA基因的分子鉴定。结果显示,从剖检病死羊的肺、肝、气管等组织中分离出6株细菌(分别命名为PA1~PA6),分离菌株镜检均为革兰阴性、短杆菌,对庆大霉素高度敏感,对小鼠具有较强致病作用。综合流行病学和生化试验结果等判定,该6株分离菌均为绿脓杆菌。对6株绿脓杆菌16SrRNA序列分析表明,该6株分离菌与已知的绿脓杆菌16SrRNA序列的同源性为99.9%~100%,与报道的绿脓杆菌菌株B136-33、YMD-4以及LCQ-4的序列位于一个分支上,属于一个亚群,其中与北京株B136-33的进化关系更近,核苷酸同源性为100%。     

互助藏羊肺炎病原绵羊肺炎支原体的PCR检测与分析

青海省互助某羊场藏系绵羊发生肺炎疾病,为了快速准确诊断藏羊肺炎发病的致病病原微生物,及时防控和治疗,采集病死绵羊肺样品,利用PCR分子生物学方法进行鉴定与生物信息学分析。经过分子鉴定,此羊场引发肺病的病原是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, MO);测序结果显示样品中鉴定的为同一株病原,鉴定的菌株的16S rRNA基因与参考序列EU265779的同源性达到99.86%。同时遗传进化树显示,鉴定的菌株与GenBank中的绵羊肺炎支原体聚成一大支,其关系最近,在进化角度证实此次鉴定的确实为绵羊肺炎支原体。结果表明,此羊场引发肺炎疾病的病原是绵羊肺炎支原体,提示要对羊群进行相关的病原学研究和流行病学调查,为针对性地对细菌性病原进行对症治疗提供参考。     

狐源绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了鉴定引起狐狸肺炎的病原菌,采用常规鉴定法和16S rRNA PCR方法从肺炎的狐狸肺脏病料组织中进行分离培养与鉴定,确定该菌为绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)。该菌的16S rRNA基因的系统发育树分析表明,分离菌与绿脓杆菌同源性达100%。动物致病性试验结果表明该分离菌株有致病性。药敏试验显示分离菌株对头孢曲松、阿米卡星、左氧氟沙星、阿奇霉素等药物敏感。     

贵州省某羊场魏氏梭菌病的诊断

为摸清贵州省某羊场羊只发病死亡原因,采用临床症状观察、病理解剖诊断、细菌分离培养及鉴定和PCR检测等方法,对该规模化羊场发病羊只进行诊断。结果表明:临床症状观察和病理剖检初步诊断该羊场发病羊疑似支原体和魏氏梭菌混合感染;支原体PCR检测未检测出支原体特异性阳性条带,细菌分离培养、生化特性鉴定确诊为魏氏梭菌感染,最终确诊造成该羊场羊只发病死亡的原因为魏氏梭菌感染。     

牛源绿脓杆菌的分离鉴定与药敏试验

为了解河北地区绿脓杆菌的感染状况及耐药情况,试验采用传统的细菌分离鉴定、生化鉴定、分子生物学鉴定及药敏试验等方法对该地区6个牛场的83份奶样进行研究。结果表明:从83份牛奶样品中分离出28株绿脓杆菌,其分离率可达到33.73%,分离菌株在普通营养琼脂和十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基上的生长状态良好;革兰氏染色镜检分离菌为排列不规则的阴性短杆菌;分离菌的葡萄糖、尿素、枸橼酸盐和硝酸盐还原试验为阳性,麦芽糖、蔗糖、甘露醇、硫化氢试验、V-P试验和吲哚试验均为阴性,根据生化鉴定管说明书鉴定分离菌为绿脓杆菌;绿脓杆菌eta基因PCR扩增和序列测定再次确定该分离菌为绿脓杆菌;所有分离菌均表现出不同程度的耐药,其中对氨苄西林、复方新诺明、链霉素和氟苯尼考等药物的耐药情况严重,而对新霉素、环丙沙星、丁胺卡那及呋喃唑酮等药物敏感。说明绿脓杆菌是引起奶牛乳房炎的主要致病菌,新霉素、环丙沙星、丁胺卡那及呋喃唑酮等药物可作为治疗绿脓杆菌的首选药物。     

大肠杆菌和绿脓杆菌混合感染引起的水貂出血性肺炎的鉴定

为了鉴定引起水貂发生出血性肺炎的病原体,试验采用病原分离鉴定、分离株16S rRNA扩增与序列分析、分离株对小鼠致病力试验、分离株血清分型鉴定、大肠杆菌H基因型鉴定、分离株药敏试验和分离株动物感染试验对来自山东省、辽宁省、河北省和黑龙江省的28份具有典型出血性肺炎症状死亡水貂的病料进行鉴定。结果表明:混合感染12例,单一病原菌感染16例,镜检可见短小的阴性杆菌和两端钝圆的阴性长杆菌; 16S rRNA扩增与序列分析共分离出22株绿脓杆菌和18株大肠杆菌,其中有4株对小鼠致死率达到50%以上,9株对小鼠致死率在10%～40%;从22株绿脓杆菌中共分离出8株G型、7株E型和7株D型,未检测出大肠杆菌血清型,大肠杆菌H基因型为H11;绿脓杆菌分离株对环丙沙星、妥布霉素、阿米卡星等6种药物敏感,大肠杆菌分离株对环丙沙星、妥布霉素、阿米卡星等10种药物均耐药;大肠杆菌和绿脓杆菌分离株均可导致水貂死亡并造成肺泡壁毛细血管瘀血、脾脏淋巴细胞数量减少、肺脏上皮细胞坏死、红髓内巨噬细胞数量增多等明显病理变化。说明目前引起水貂出血性肺炎的病原体已由传统的绿脓杆菌单一感染逐渐转变为大肠杆菌和绿脓杆菌的混合感染。     

血清C型水貂绿脓杆菌的分离鉴定

为确诊引起水貂死亡的主要细菌性病原,对采集的病料进行细菌分离和培养,分离出3株菌。通过对分离株的形态、生化和培养特性研究,分子生物学和血清型鉴定,并对其中一分离菌株生长曲线、毒力和免疫原性进行测定。结果表明,分离株均为血清C型水貂源绿脓杆菌;分离株16S r RNA基因序列与已知的绿脓杆菌相应序列同源性为99.7%~99.98%不等;生长曲线结果表明,C型绿脓杆菌4~14 h为对数生长期;对小鼠的半数致死量(LD_(50))为8.11×105 CFU;制备的单价疫苗对小鼠的免疫原性良好,攻毒保护率为100%,对照组小鼠全部死亡。     

贵州省某羊场山羊支原体、链球菌和魏氏梭菌混合感染的诊治

为了对贵州省某羊场发病山羊进行诊治,采用临床症状观察、病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定和PCR技术确诊,进行了药物敏感性试验。结果表明:该羊场发病羊只为链球菌、魏氏梭菌和支原体混合感染;分离菌对氧氟沙星和环丙沙星高度敏感。针对不同情况提出了不同的治疗方案。     

山东规模化养殖场毛皮动物多重感染病原学分析

2012—2013年间,山东10个地市多家毛皮动物养殖场养殖的毛皮动物（狐狸、貉子、水貂）出现腹泻,皮肤湿疹,神经症状,空怀、流产、出血性肺炎等症状和病变类似的疫情,为探明其病因,本研究对发病规模化毛皮动物养殖场发病情况进行调查,并对送检的病料进行病原学检查,结果发现,犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒感染率分别为54.21%、47.30%、31.35%;肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、沙门杆菌、绿脓杆菌、加德纳菌的感染率分别为37.58%、25.05%、21.81%、14.04%、12.53%、10.37%、8.21%;犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌6种病原的单独感染、二重感染、三重感染、四重感染分别为22.03%、39.52%、36.07%、2.38%,未见五重以上的感染。结果表明,近两年造成山东规模化场毛皮动物发病主要原因是由犬瘟热病毒、细小病毒、阿留申病毒与肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、肺炎双球菌多重感染所致,这为规模化毛皮动物养殖场有效地控制疫病提供了理论依据。     

绿脓杆菌研究进展

绿脓杆菌存在于环境和正常畜禽体内,是一种条件致病菌。近年来,随着动物疾病研究的深入,有关绿脓杆菌感染的报道也越来越多。从病原学、流行病学、发病机理、临床学等方面对绿脓杆菌的研究进展进行了综述,以期为控制绿脓杆菌的感染奠定基础。     

Testing the protective effectiveness of vaccines against infection with Pseudomonas aeruginosa in mink (Lutreola vison)

Infections by Pseudomonas aeruginosa have caused losses on mink farms in recent years, particularly with a clinical manifestation of haemorrhagic pneumonia. This paper includes the first results of the practical use of the Czechoslovak soluble monovaccine of polyvalent action in the treatment of mink infected by Pseudomonas aeruginosa. The action of the vaccine is based on the protective effect of Original Endotoxin Protein (OEP), antigen common to all species of the genus Pseudomonas. After due testing, the vaccine was given to mink. Doses of 50, 200 and 500 micrograms, and in another series 50 and 200 micrograms of the vaccine were tested in subcutaneous administration at 0.2 ml volume in a 7-day interval. No adverse side-effects and reactions were observed in the animals. A protective action was demonstrated, resulting in a higher number of reared mink in comparison with the control groups. After vaccination, titres ranging from 2 to 160 were determined by the indirect haemagglutination method and from 320 to 164,000 by the RIA method. In 1984 the vaccine was used for practical treatment on a mink farm with the stock exposed to Pseudomonas aeruginosa infection (5551 mink were treated). In the vaccinated group losses amounted to 3.1% whereas in the control group the mortality level was above 17%. Vaccination was demonstrated to have a favourable effect and the vaccine was then preventively used on the same farm in the subsequent year; the treatment of 29,350 mink had the required protective effect.     

种蛋孵化死胚及孵化厅环境样本中铜绿假单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析

本研究旨在了解种鸡场中种蛋孵化死胚和周围环境中感染或污染铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerugino-sa,PA)的比率及分离株的耐药性.从广东省的5个规模化种鸡场采集孵化厅死胚及其周围环境样本进行PA的分离鉴定,采用K-B纸片扩散法分析其抗菌药物敏感性,并通过常规PCR检测对应的耐药基因.结果 显示,在采集...     

Comparison of Pseudomonas aeruginosa isolates from mink by serotyping and pulsed-field gel electrophoresis

Isolates of Pseudomonas aeruginosa from clinical infections in mink were subjected to serotyping and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using SpeI. A total of 212 isolates of P. aeruginosa from the year 1998 to 2001 were included in this study: 168 isolates from mink obtained from 74 farm outbreaks of haemorrhagic pneumonia. Isolates from mink were separated into 34 distinct clones by PFGE subtyping. All isolates from mink infected during the same farm outbreak were identical, except in one case where two different strains were isolated from mink obtained from the same farm outbreak. P. aeruginosa of specific PFGE types were found to cause clusters of outbreaks on several farms within a few weeks of each other. However, PFGE types of strains causing clusters of farm outbreaks changed from year to year. These results suggest that some outbreaks of haemorrhagic pneumonia are caused by pathogenic strains of P. aeruginosa spread between farms and animals either mechanically, or through feed or water from a common source, rather than by random nosocomial infections with strains from the farm environment.     

无菌大鼠深二度烫伤感染模型机体炎性反应的研究

为探究无菌大鼠深二度烫伤感染模型机体炎性反应，试验利用无菌大鼠分别建立深二度烫伤损伤模型和烫伤后绿脓杆菌感染模型，比较这两种模型和SPF级大鼠深二度烫伤模型在愈合过程、炎性反应及病理变化等方面的异同。20只6周龄雌性Wistar无菌大鼠，在超净工作台内采用恒温恒压烫伤仪94℃作用8 s造成大鼠深二度烫伤，随机分为2组，一组伤口感染浓度为1×10⁵ CFU/mL绿脓杆菌菌液0.5 mL，一组不做处理，创面保持无菌状态，SPF级Wistar大鼠在同样条件下烫伤，创面不做处理。分别观察3组大鼠的伤口结痂时间、脱痂时间和愈合时间，并在烫伤前（0 h），烫伤后24 h、3 d和7 d时，取血清，检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素1α（IL-1α）、粒细胞-巨噬细胞刺激因子（GM-CSF）的变化。结果显示，感染绿脓杆菌大鼠组开始结痂所需时间显著长于SPF级大鼠组和无菌大鼠组（P<0.05）；而脱痂及愈合所需时间显著变短（P<0.05）；感染绿脓杆菌组大鼠烫伤24 h时，皮下组织中可见淋巴细胞，有慢性炎性反应；3 d时，真皮深层有化脓性感染，横纹肌周围可见大量炎细胞，烫伤7 d时，皮下组织中有轻微血管扩张充血，化脓性感染减轻，无菌烫伤大鼠与SPF级烫伤大鼠皮肤在烫伤后一周内有轻度炎性反应。3组大鼠烫伤后，血清GM-CSF、IL-1α及TNF-α水平均较烫伤前显著升高（P<0.05）；烫伤24 h时，感染绿脓杆菌大鼠组和无菌大鼠组血清IL-1α水平显著高于SPF级大鼠组（P<0.05）；无菌大鼠组血清GM-CSF水平显著高于SPF级大鼠组和感染绿脓杆菌大鼠组（P<0.05）；烫伤3 d时，染绿脓杆菌大鼠组和无菌大鼠组血清IL-1α水平显著高于SPF大鼠组（P<0.05），无菌大鼠组血清GM-CSF水平显著高于染绿脓杆菌大鼠组（P<0.05）。综上所述，无菌大鼠对烫伤刺激反应迅速强烈，血清中炎性因子迅速升高，SPF级大鼠深二度烫伤后炎性反应缓慢；无菌大鼠深二度烫伤伤口感染1×10⁵ CFU/mL绿脓杆菌，脱痂时间和愈合时间反而缩短。     

内蒙古地区奶牛病毒性腹泻/黏膜病血清流行病学调查

应用ELLSA试验对来自内蒙古地区17个大﹑中﹑小型奶牛场的2391份牛血清样品进行了牛病毒性腹泻/黏膜病抗体检测,并对其中222份抗体阴性牛应用ELISA试验进行牛病毒性腹泻/黏膜病的抗原检测。结果表明：17个奶牛场均检出BVDV抗体阳性,共检出阳性血清2125份,阳性率最高达100%,最低为46.8%,平均为88.9%。对14个奶牛场进行了BVDV抗原检测,在5个奶牛场检出BVDV抗原阳性,阳性率为3.6%（8/222）。表明内蒙古地区奶牛场普遍存在牛病毒性腹泻/黏膜病感染,感染率较高,并且牛群中存在持续性感染（PI）牛。     

蓝狐多重感染的病原学及主要病原的分子生物学特性

2006-2007年期间,山东6地区规模化毛皮动物养殖场出现母狐空怀、流产,幼狐呼吸困难,鼻孔出血,气喘并伴有腹泻、死亡等症状,为探明病因,对发病场进行流行病学调查和送检的236份病料组织进行病原学检查,结果表明造成该病的主要原因是由绿脓杆菌(Pseudomonas aerudinosa)、沙门菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)和普通变形杆菌(Proteus vulgaris)共感染所致.这4种细菌单独感染、二重感染、三重感染和四重感染的平均感染率分别为50%、45.8%、3.8%和0.4 0%.在分离的4种细菌中以绿脓杆菌的分离率为最高,达到86%,对该痛原又进行(G+C)mol%、16SrRNA序列同源性和系统发育分析,构建了包括9株邻近种属细菌在内的系统发育树,其中与绿脓杆菌(AJ249451)同源性最高,为99.2%,进一步确定该病原菌属于假单胞菌属中绿脓杆菌.本研究为目前规模化毛皮动物养殖场蓝狐病的原因提出了新的思路,为疾病的防治提供了依据.     

致仔猪肠壁囊泡性脓肿铜绿假单胞菌的生物学特性研究

为研究猪肠壁囊泡性囊肿的可能病原,从发病猪肠道囊泡分离细菌,从11头发病死亡猪肠壁囊泡分离到1株共同性的细菌,对其进行了细菌生化鉴定和16sRNA测序,结果鉴定该株细菌为铜绿假单胞菌。通过药敏试验和小鼠攻毒试验,证实该株细菌具有多重耐药性和强致病性。本研究首次报道了铜绿假单胞菌致仔猪肠壁裳泡性脓肿的病例,并证明了假铜绿单胞菌强的致病作用,为深入铜绿假单胞菌对畜禽养殖的威胁及条件致病菌的变异奠定基础。     

Field studies: pseudomonas pneumonia of mink

Epizootics of pneumonia in mink caused by Pseudomonas aeruginosa were investigated to characterize the serotype of organisms and to identify possible predisposing factors. Most epizootics were associated with P aeruginosa Fisher serotype 1, and a few were associated with 3 other serotypes. There were no predisposing factors identified that could be used to differentiate farms affected and those not affected with pseudomonas pneumonia. Cultural studies indicated that P aeruginosa was present in mink from affected and nonaffected herds. Organisms isolated included serotypes associated with naturally occurring disease. Serostudy results were similar among herds. A prospective field vaccination trial did not yield definitive results, since only slight losses occurred in both vaccinated and nonvaccinated mink. Significant levels of antibody were detected in mink 15 to 17 weeks after they were given a single dose of P aeruginosa lipopolysaccharide vaccine.