阿魏侧耳(Pleuratus ferulae)产漆酶条件的优化及其酶学性质研究

为获得酶活较高的酶液用于农药污染的修复,探讨阿魏侧耳(Pleuratus ferulae)产漆酶的条件。对碳源、氮源、pH诱导剂和金属离子这5个培养条件进行优化,并对酶学性质进行研究。结果表明:阿魏侧耳产漆酶的最佳培养时间为9天,最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为蛋白胨,培养基最适的初始pH 6.0,0.1 mmol/L愈创木酚和1 mmol/L Mn~(2+)对阿魏侧耳产漆酶有明显的促进作用,使酶活分别提高了32.2%和30.8%。对阿魏侧耳产的漆酶进行酶学性质研究,其最适反应温度为45℃,在40、45℃下酶活相对稳定,48 h后能保持较高酶活。最适反应pH 6.0,在pH 4.0~7.0时,漆酶均有较高活性,在pH 5.0~7.0时有较高稳定性,48 h后相对酶活保持在70%以上。阿魏侧耳在发酵条件优化后具有较高的产漆酶能力,所产漆酶的最适温度相对较高,最适pH为中性偏酸性。     

莴笋多酚氧化酶的酶学特性研究

采用分光光度法测定莴笋多酚氧化酶(PPO)活性,考察底物特异性、pH值、温度、热稳定性、底物浓度、金属离子及抑制剂对PPO酶活特性的影响,研究莴笋PPO酶学特性。结果表明,莴笋PPO的最适底物为邻苯二酚,最适pH值5.0,最适温度25℃;90℃热处理60 s莴笋PPO酶活基本完全丧失;莴笋PPO最适底物浓度为0.10 mol/L,PPO酶促褐变反应动力学符合米氏方程,相应的动力学参数Km=0.667 mol/L,Vmax=826.4 OD/min;Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+对PPO酶活有一定的的抑制作用,Cu2+和Fe3+对PPO酶活有一定的促进作用;五种抑制剂对抑制莴笋PPO酶活力均具有一定的作用,且抑制作用随抑制剂浓度的增大而加强,试验范围内抑制作用由强到弱依次为:抗坏血酸L-半胱氨酸Na HSO3柠檬酸EDTA,抗坏血酸对莴笋PPO酶活的抑制效果最佳。     

褐环黏盖牛肝菌异柠檬酸裂解酶和苹果酸合酶活性的研究

为了探明褐环黏盖牛肝菌的草酸代谢途径,研究了pH值、反应温度对褐环黏盖牛肝菌异柠檬酸裂解酶(ICL)和苹果酸合酶(MS)的活性的影响。结果表明,酶促反应褐环黏盖牛肝菌ICL最适pH值为5.6,其最大活性为4.37 U/gFW;MS的最适pH值为7.0,其最大活性为3.57 U/g FW;ICL最适反应温度为30℃,MS最适反应温度为35℃;K+,Na+,Mg2+三种金属离子中,Mg2+对ICL活性具有明显的激活作用,而Na+对MS的活性具有明显的激活作用。     

褐环黏盖牛肝菌异柠檬酸裂解酶和苹果酸合酶活性的研究

为了探明褐环黏盖牛肝菌的草酸代谢途径,研究了pH值、反应温度对褐环黏盖牛肝菌异柠檬酸裂解酶（ICL）和苹果酸合酶（MS）的活性的影响。结果表明,酶促反应褐环黏盖牛肝菌ICL最适pH值为5.6,其最大活性为4.37 U/g FW;MS的最适pH值为7.0,其最大活性为3.57 U/g FW; ICL最适反应温度为30℃, MS最适反应温度为35℃; K+, Na+, Mg2+三种金属离子中, Mg2+对ICL活性具有明显的激活作用,而Na+对MS的活性具有明显的激活作用。     

黑木耳漆酶酶学性质的研究

本实验从黑木耳液体发酵液中提取漆酶,对其酶学性质进行研究,为该漆酶的应用提供有价值的理论数据。对漆酶发酵液进行硫酸铵分级沉淀和透析,制得粗酶液。采用分光光度法,以ABTS[2,2’-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)]为底物测定漆酶活力。结果表明：黑木耳漆酶在55℃以下保温,漆酶活力和热稳定性良好。最适温度为45℃。温度超过65℃,出现明显的抑制作用。黑木耳漆酶最适pH为4.0,pH高于6.5,出现明显的抑制作用。金属离子对酶活表现出促进或抑制的作用。     

磁性固定化漆酶在苹果汁除酚中的应用

以磁性聚苯乙烯微球为载体,戊二醛为交联剂,制备出了磁性固定化漆酶.研究表明,固定化漆酶的Km值较游离漆酶小,最适温度与游离漆酶相同,最适pH较游离漆酶下降0.4个单位,热稳定性、pH稳定性和贮存稳定性均较游离漆酶有所提高.     

蛋白酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从养牛厂附近的土壤中分离得到一株产蛋白酶性质优良的菌株,初步鉴定为芽孢杆菌,对其最适产酶条件进行了研究。试验表明,最适碳源为玉米粉,最适氮源为玉米浆,300mL摇瓶最适装液量为60mL,最适接种量为2%,起始pH值为4.5和6.5时有2个产酶高峰,并对其进行酶学性质的研究。该酶最适温度为65℃,最适pH值为7.5,该酶在50℃以下保温30min酶活仍较高,在70℃以上酶活全部丧失。在pH值7.0～9.0时比较稳定,而在pH值5.0以下时酶活下降很快。金属离子Pb2+,鳌合剂EDTA能抑制蛋白酶的活性,而Fe2+能激活蛋白酶活性。     

2株茶藨生柱锈重寄生木霉胞壁降解酶的基本性质研究

为了给β-1,3葡聚糖酶和几丁质酶的分离纯化及重寄生菌的利用提供理论依据,从茶藨生柱锈(Cronartium ribicola J.C.Fischer)的重寄生菌TR1和TR2中提取了β-1,3葡聚糖酶和几丁质酶,并进行了粗酶活性测定。结果显示,2菌株所产β-1,3-葡聚糖酶最适温度均为35℃,TR1所产β-1,3葡聚糖酶的最适pH 4.0,Km值为43.82 μg/mL,Ca2+是其激活剂,Cu2+、Fe3+、Al3+、Zn2+为其抑制剂。TR2所产β-1,3葡聚糖酶的最适pH5.0,Km为71.28 μg/mL,Ca2+和Mn2+是其激活剂,Cu2+、Fe3+、Al3+为其抑制剂。2菌株所产几丁质酶的激活剂为Mn2+和Ca2+,抑制剂为Cu2+。TR1所产几丁质酶的最适温度为40℃,最适pH6.0,Km为92.49 μg/mL;TR2所产几丁质酶的最适温度范围较宽为3~50℃,最适pH5.0,Km为71.11 μg/mL。TR1和TR2所产β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶稳定性较高,直接利用粗酶在野外防治疱锈病具有一定的可行性。     

东乡野生稻过氧化物酶分离纯化及其酶学特性研究

过氧化物酶与植物体内活性氧的清除和逆境适应性反应密切相关,为了深入研究过氧化物酶在植物抗逆反应中的重要作用,本文以东乡野生稻叶片组织为材料,采用浸提、盐析、透析和柱色谱法分离纯化POD蛋白,采用聚丙烯凝胶活性电泳检测蛋白,利用愈创木酚法研究POD的活性和酶学特性。结果表明,经磷酸缓冲液浸提、40%~80%硫酸铵盐析、再经Sephadex G-100凝胶柱层析等步骤,从东乡野生稻叶片组织分离制备得到POD1同工酶组分,酶蛋白的纯化倍数为16.49,比活力为568.80 U/mg。聚丙烯凝胶活性电泳检测仅呈单一POD1同工酶带,属于单一组分。经测定,POD酶Km为1.26 mmol/(L?min),最大反应速度Vmax为17.51 mmol/(L?min),最适宜的pH为5.0,最适宜温度35℃~45℃,Cu2+和Zn2+对POD有较强的激活作用,而Fe3+对POD活性有一定的抑制作用,POD酶活性受20%的甲醇、乙醇和丙酮等有机试剂抑制。本研究为进一步探讨东乡野生稻POD抗氧化功能和东乡野生稻抗寒生理提供了基础材料和依据。     

栓菌属高产漆酶菌株的筛选及其发酵产酶条件研究初报

从秦岭采集的15株栓菌属真菌中筛选出产漆酶能力最强的菌株03588,对其发酵产酶条件的研究结果表明其产酶最适碳源为葡萄糖,最适氮源为硝酸铵。起始最适pH为6.0,最适培养温度为28℃,5d酶活达到最大值。培养基装量对产酶的影响不大。     

蔵灵菇源克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶的特性研究

摘 要：探讨蔵灵菇马克斯克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶的特性及其发酵动力学原理。采用单因素多水平试验,在pH4~8、温度31~43℃、底物浓度4~8 mmol/L及不同化学试剂(SDS、EDTA、尿素、Cu2+ 、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Al3+、Mn2+)的条件下,胆盐水解酶与底物反应30min,检测酶活力。胆盐水解酶最适反应条件：pH为6.0、底物浓度为7 mmol/L、温度为37℃,Mn2+、Fe3+、Ca2+金属离子对酶活性有较大提高作用,其他化学试剂对酶活性影响不大。胆盐水解酶的酶促反应动力学常数Km为2.60 mmol/L。M3菌株在18~21 h进入稳定期,18h对数生长期时酶活性达到最高,表明其胆盐水解酶发酵动力学类型为生长偶联合成型。     

树莓超氧化物歧化酶部分性质研究

超氧化物歧化酶是体内自由基主要清除剂之一,简称为SOD。本文以树莓为原料,对树莓SOD的理化性质进行研究,即SOD敏感性实验,最大紫外吸收峰和温度、pH值及金属离子等因素对SOD的影响,为树莓SOD的进一步深入研究及其在药品、保健食品和化妆品的应用打下基础。三种酶(SODⅠ,SODⅡ和SODⅢ)均对KCN和H2O2不敏感,说明这三种酶都属于Mn-SOD;其最大紫外吸收峰均为280 nm;温度对其影响相对稳定,SODⅢ受温度的影响稍大些,而SODⅠ和SODⅡ受温度的影响较小;在pH7~9范围内SOD相对酶活力较高,pH过高或过低SOD均易失活;三种SOD受金属离子的影响没有很大的差异,Al3+、Cu2+、Mg2+、K+、Ca2+、Zn2+都具有一定程度的激活作用,而Pb2+、Fe3+、Sn2+则具有非常明显的抑制作用。     

产漆酶菌株的筛选及其对烟秆降解效果的研究

为烤烟秸秆中木质素降解提供理论依据,丰富降解木质素的真菌资源。从腐殖质中分离高产漆酶的木质素降解真菌1株,对其进行形态学鉴定,并对其液态发酵产漆酶培养条件进行优化和对碳、氮源和Cu²⁺进行正交试验,最后测定了该株菌对烤烟秸秆的降解情况。结果表明：（1）该株真菌形态学鉴定为半知菌亚门,粘头霉属(Moniliales Gliocephalias sp.)命名为Z-1。基础培养基中产漆酶的最大值出现在液态发酵第4天,酶活为2.72 U/mL。（2）单因素试验中Z-1最适宜产酶发酵条件为：麦芽糖25 g/L、酵母膏10 g/L、Cu2 +浓度2.5 mmol/L。（3）正交试验中,培养基麦芽糖30 g/L、酵母膏12 g/L、Cu2 +浓度2.5 mmol/L处理产酶最高,酶活为3.24 U/mL,较基础培养基中高出18.89%。（4）液态发酵菌株对烟秆粉末降解30天后,失重率50%、木质素降解率39.39%、纤维素降解率36%。该株真菌产酶较高,对烤烟秸秆降解能力较强。     

烟草青枯病菌内生拮抗菌株HN3的鉴定与高产抗菌物质的培养基优化

通过稀释涂布平板法从感染青枯病的烟草‘K326’侧根内分离到大量内生菌。以烟草青枯病菌为指示菌,采用对峙培养法筛选出有拮抗活性的内生细菌13株。根据抑菌活性试验,从中选取一株抑菌效果最好的内生拮抗细菌HN3分别进行16S rDNA序列鉴定、BIOLOG微生物自动鉴定系统鉴定和系统发育学分析,结果表明,HN3属于假单胞杆菌(Pseudomonas)。试验还初步确定了有利于增强HN3抑菌活性的碳源、氮源和无机盐,并通过L9(34)正交试验优化了上述3种营养成分的用量。结果表明,最佳培养基成分为：葡萄糖12 g、尿素0.32 g、磷酸氢二钾3 g,优化后菌株HN3的抑菌活性增加了35.7%。     

树舌灵芝发酵产漆酶培养基优化

在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计对影响树舌灵芝产漆酶活性的因素进行了评价,筛选出具有显著影响的因素并优化了树舌灵芝产漆酶培养基的主要成分。结果表明,产酶培养基中小麦麸皮、豆粕、硫酸铜和香兰素的添加量对树舌灵芝产漆酶活性具有显著影响;预测得到最佳培养基组成为:小麦麸皮(20 g/L)、豆粕(2 g/L),硫酸铜(0.625 g/L)和香兰素(0.037 5 g/L);优化培养基后漆酶活性达到45.85 IU/m L,约为优化前的56倍,为大规模发酵生产漆酶提供技术支持。     

Cd2+、Pb2+对木麻黄种子萌发及抗性生理特性的影响

以中国沿海农田防护林主栽树种木麻黄的种子为材料,研究Cd2+、Pb2+单一及复合污染胁迫对木麻黄的萌发生长及其抗性生理的影响。结果表明：随着Cd2+、Pb2+单一及复合污染胁迫浓度的增大,木麻黄种子萌发率、株高、根长、鲜重、干重等明显降低,而MDA含量和SOD活性均随Cd2+、Pb2+胁迫浓度的增大而升高。研究表明,Cd2+、Pb2+单一及复合污染都会对木麻黄的初期生长造成伤害,Cd2+、Pb2+胁迫在木麻黄种子萌发生长上表现出协同效应,在对生物体膜脂过氧化及抗氧化生理反应上存在一定程度的拮抗作用。     

低温对蒙古口蘑菌丝体漆酶活性及其基因家族表达的影响

蒙古口蘑是内蒙古草原久负盛名的野生食用菌。为实现其人工栽培，本文以蒙古口蘑次生菌丝体为实验材料，利用实时荧光定量PCR技术，研究了低温对蒙古口蘑漆酶活性及其基因家族转录水平的影响。结果表明：蒙古口蘑次生菌丝体漆酶活性普遍较高；随着培养时间的延长，漆酶活性普遍降低；低温刺激可不同程度地影响蒙古口蘑漆酶基因家族的转录，10℃处理菌丝体10天，可显著提高蒙古口蘑漆酶基因的表达水平，主要贡献是lacc1、lacc4、lacc8、lacc10、lacc11。结果可为日后实现蒙古口蘑人工栽培积累资料。     

镉对鸡卵巢发育及卵巢组织ATP酶活性的影响

【研究目的】为了探讨镉对性未成熟鸡卵巢发育的毒性机制，从分子水平阐述镉中毒的发病机理，增强人类环境保护意识，避免畜、禽镉中毒的发生。【方法】在饲料中加入140mg/kgCdCl2 、210mg/kgCdCl2建立亚慢性镉中毒模型，分别在试验20d、40d、60d取卵巢称重，进行Na+-K+-ATPase，Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性检测。【结果】对照组卵巢组织内Na+-K+-ATPase，Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性随日龄增加呈上升趋势，各时间点酶活性比较差异不显著；加镉组卵巢组织内Na+-K+-ATPase，Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活性随日龄增加呈降低趋势，与对照组比较差异显著或极限著，且呈一定的时间-剂量效应。【结论】镉能够抑制性未成熟鸡卵巢发育，降低卵巢组织ATPase活性，二者存在一定相关性。