应用鸡毒霉原体PCR试剂盒对人工感染鸡的检测

应用鸡毒霉原体(MG)聚合酶链式反应(PCR)试剂盒对人工感染鸡的样品进行检测，结果 人工感染后第1—24天，所采集喉头及腭裂处粘液、喉气管组织、肺组织均可检出MG，阳性检出率要比传统分离鉴定方法高，试验结果表明了MG—PCR试剂盒对MG的检测不仅特异、敏感、快速，而且操作简便，适合在临床上推广应用。     

鸡毒支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立

 【目的】建立基于鸡毒支原体种特异性粘附蛋白编码基因pvpA的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank公布的不同国家和地区鸡毒支原体pvpA基因序列,在高度保守区域设计一对引物。以临床分离鸡毒支原体RC1为模板扩增pvpA基因,将其连接到PMD19-T载体,转化至大肠杆菌DH5α中,经PCR和酶切鉴定并测序验证后得到阳性重组质粒rPvpA90。以rPvpA90为模板建立SYBR Green I荧光定量的标准曲线和溶点曲线,并进行特异性,灵敏性,重复性及临床样本检测试验,评价该方法的可行性。【结果】所建立的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶点曲线特异,相关系数为0.990。最低检测限为72拷贝/20 μL ,其敏感性比常规PCR至少高100倍;无论是对不同病原DNA单模板还是几种病原DNA混合模板进行扩增,该方法都呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于2%,表明该方法重现性好;临床样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR检测方法的检测率明显高于常规PCR方法。【结论】本研究初步建立了基于种特异性基因pvpA的鸡毒支原体荧光定量PCR方法,为养禽场诊断和监测鸡毒支原体病原提供一种新的特异、灵敏的方法。     

鸡毒支原体人工发病封闭模型的建立

在透明塑料隔离器中,分别制造３０－１００ｍｇ／Ｌ的氨环境,观察其对ＳＰＦ“来杭鸡”的应激反应,结果氨浓度在８５ｍｇ／Ｌ以上时,鸡群发生严重伤害,而氨浓度在５０ｍｇ／Ｌ以下时则缺乏明显应激。氨环境作应激因素,对３０日龄无特一病原ＳＰＦ鸡以鸡毒支原体强毒侏作人工发病,１２天后检查气囊病变,发病率为７５％（３／４）,以鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）,鸡传支病毒（ＩＢＶ）弱毒诱导,人工感染发病率为５０％（２／４）     

肉鸡鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染的诊治

通过对重庆璧山某鸡场送检的病鸡进行实验室检验,诊断为鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染。经过药物治疗和消毒处理,病情得到控制。     

鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染病例的实验室诊断

报道了一例鸡毒支原体和大肠杆菌混合感染病例的实验室诊断。应用细菌学方法无菌取肝脏和关节肿疱液接种鲜血琼脂培养基进行细菌分离,挑取鲜血琼脂培养基上均一生长的菌落划线接种于麦康凯斜面用于细菌鉴定,将分离的大肠杆菌涂布鲜血琼脂培养基进行药敏试验。取关节肿疱液接种KM2液体培养基,取关节肿疱液及其不同代次的KM2培养物进行支原体PCR检测。结果从发病鸡肝脏中分离到大肠杆菌,该菌株对丙氟哌酸、氟苯尼考等药物敏感;从关节肿疱液及其1～3代KM2培养物中均扩增出鸡毒支原体的基因片段;说明该群病鸡发生了鸡毒支原体和大肠杆菌的混合感染。     

鸡毒支原体感染的诊断与防治研究进展

鸡毒支原体(MG)是一种缺乏细胞壁的革兰氏阴性菌,又被称为鸡败血支原体、鸡败血霉形体等.自1933年Nelson首先发现了鸡毒支原体至今,人们对它已经有了比较全面的、系统的了解.MG感染可引起鸡慢性呼吸道病,临床上主要表现为咳嗽、流鼻涕,严重时张口呼吸.感染MG的鸡抵抗力下降,易并发或继发大肠杆菌病、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎等疾病.据统计,MG感染后,雏鸡的弱雏率增加10%左右,蛋鸡的产蛋率下降10%～20%,肉鸡的体重减少38%.我国鸡的MG感染阳性率为50%～80%[1].MG感染是严重影响集约化养鸡业的重要因素.本文从诊断防治等方面综述MG感染的研究成果.     

鸡毒支原体感染

鸡毒支原体感染可引起呼吸道症状为主的慢性呼吸道病,其特征为咳嗽、流鼻液、呼吸道罗音和张口呼吸。疾病发展缓慢,病程长,成年鸡多为隐性感染,可在鸡群长期存在和蔓延。禽体内可分离出多种禽支原体,而对鸡致病性最常见的有鸡毒支原体(MG)、火鸡支原体(MM)和滑液囊支原体(MS)。     

鸡毒支原体病研究进展

鸡毒支原体( Mycoplasma Gallisepticum , MG )是危害禽类的常见疾病之一,呈世界性流行,严重影响着养禽业的健康发展。因此,防控鸡毒支原体病,净化种鸡群对养禽业的发展意义重大。本文通过对MG 的病因、病原、流行特点、症状以及防治措施等的研究进展进行综述,以期为防控 MG 提供参考。     

鸡毒支原体诊断研究新进展

鸡毒支原体感染是近年来严重危害养鸡业的重要传染病,呈慢性经过,复发率很高,常给养鸡,3k带来严重的经济损失。本文就鸡毒支原体感染诊断方法和防制措施的研究进展作一概述,供临床参考。     

鸡毒霉形体感染的PCR检测方法的建立及应用

用多聚酶链反应检测了鸡毒霉形体种内菌株的特异性ＤＮＡ片段,并用该法对人工感染鸡及野外野群进行了ＭＧ感染的分子流行病学调查。结果表明,通过基因扩增及电泳,仅ＭＧ出现特生扩增条带,最低能检出１８ｐｇＭＧＤＮＡ,说明该方法具有很高的特异性和敏感性。人工感染６０只鸡,３ｄ后即可用ＰＣＲ查出ＭＧ阳性,６ｄ后１００％为阳性,对照鸡全部为阴性。与分离培养的结果完全一致。ＰＣＲ对野外鸡群的ＭＧ检出率为１０．５－３     

禽呼肠孤病毒感染SPF鸡后免疫器官中IL-18的定量检测

[目的]掌握禽呼肠孤病毒(ARV)感染SPF鸡后免疫器官中白细胞介素18(IL-18)的相对动态转录时相,为揭示ARV的致病机制奠定基础.[方法]利用鸡IL-18实时荧光定量PCR检测分析ARV感染对SPF鸡免疫器官中IL-18mRNA动态转录水平的影响.[结果]SPF鸡感染ARV后,免疫器官发育不良,其脾脏、胸腺、法氏囊重量均低于对照组.与对照组相比,除感染后21d的胸腺、法氏囊和35 d的脾脏、胸腺中IL-18表达下调外,其他时间点免疫器官中的IL-18均表达上调,且都在ARV感染后第1d达峰值,上调倍数分别为3.59(脾脏)、7.99(胸腺)和8.35(法氏囊)倍.[结论]ARV感染可导致IL-18转录时相发生变化,推断IL-18与ARV对免疫器官的损伤与免疫抑制相关.     

不同来源SPF鸡群遗传纯度的分子检测

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术从分子结构上研究了不同来源SPF鸡群的遗传纯度。结果表明 :不同来源SPF鸡群平均条带相似系数差异显著 ,反映了这些不同来源SPF鸡群间的遗传纯度有明显不同。     

健康鸡与病鸡大肠杆菌某些生物特性的分析

从健康肉鸡和蛋鸡分离到大肠杆菌180株，已鉴定的血清型为01，O2，O7，O8，O36，O78，O111，其中O2，O78为致病性大肠杆菌所常见的血清型；从大肠杆菌病病鸡分离到70株，已鉴定的血清型有O2，O78，O36。用9种抗生素进行了药敏试验。结果表明：绝大多数菌株对庆大霉素、痢特灵和卡那霉素有较高敏感性；一些菌株对氯霉素、链霉素和环丙沙星也有较高的敏感性；部分菌株对四环素和新诺明有耐药性。     

鸡毒支原体(MG)地高辛探针的制备

从带有鸡毒支原体(MG)732bp 16SrRNA DNA片段的重组质粒中回收．并制备出地高辛标记的MG DNA探针。其特异性检测结果表明．该探针能与MG不同毒株核酸抽提物起特异性杂交反应，而与对照NDV、ILTV、MS、MI和MM等病原抽提的核酸的杂交反应均为阴性。敏感性结果表明．该探针对MGDNA的最低检出量为1ng。应用该探针对人工感染MG的SPF鸡的咽喉棉试子进行检测，结果均出现杂交显色反应。表明所制备的探针用于MG的检测是可行的。     

“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究

试验选用180只1日龄健康海兰白公雏,采用中草药“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒(NDV)的临床效果进行了研究。结果表明,预防组防治率分别为90.0%和93.7%,治疗组治愈率分别为80.0%和75.0%。紧急接种组治愈率为73.3%,均显著高于对照组,且差异极显著(P<0.01)。临床适宜剂量为0.5～1.0 g/d.只。     

从山羊中检测山羊支原体山羊肺炎亚种

山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumonia,Mccp)最早由MacOwan 和Minette于1976年分离,是引起山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleruopneumonia,CCPP)的病原体.~([1-2]).     

Immunological changes of chicken infected with marek‘s disease virus

The experiment was conducted to infect one-day old healthy AA chicks with virulent Marek‘s disease virus(MDV).Compared with the uninfected control chicks,it was undertaken to detect the inductive activity of interlukin-2,expression of IL-2 recepter(IL-2R)and proliferative reaction of T cell in the thymus and spleen;to determine the number of α-naphthyl esterase positive T cells,acid phosphatase positive T cells and antibody forming cells in the thymus,Bursa Fabricius,spleen,cecal tonsil,Harder gand and mucosal lympoid tissue of bronchus;to check the number of T cell in peripheral blood as well as the dynamic changes of the amount of IgG,IgM and IgA in the serum,tear,trachea washings and intestinal secretions of infected chickens at 5,25,45 days old,respectively.The experimental results reveal that immunoregulation of IL-2 in immune organs of infected chicknens was disordered;the cellular and humoral immune functions were significantly depressed in the central and peripheral immune organs;the local or mucosal immune defense function were also markedly decreased in respiratory and digestive tracts.     

猪弓形体临床感染血清学检测报告

从到郑州牧业工程高等专科学校附属兽医院就诊的病猪中,随机采血492例,检测猪弓形体抗体水平。结果表明,河南省猪弓形体病的阳性率为13.21%,一年四季均可发生,没有明显的季节性,以第3季度的阳性率较高;地域分布差异不大,以郑州郊区的阳性率偏高。     

多重PCR同时检测鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG方法的建立和临床应用

通过建立针对鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG的多重PCR鉴别诊断技术,并进行了特异性、敏感性试验和临床应用。结果表明：设计的5对引物对同一样品中的RNA（AIV、NDV、IBV）和DNA（ILTV、MG）进行多重PCR扩增,均同时得到5条片段大小与设计相符的特异性片段,即268bp（AIV）、321bp（NDV）、457bp（IBV）、662bp（ILTV）和732bp（MG）。说明该多重PCR技术具有较强特异性和较高敏感性,能检测出1pgAIV、1pgNDV、10pg IBV的RNA和1pg ILTV、10pgMG的DNA。对自然感染鸡临床样品检测的结果则证明,该技术在临床诊断方面具有广阔的应用前景。