不同培养方式和pH对草地早熟禾原生质体分裂和生长的影响

以3个草地早熟禾品种午夜Ⅱ号、新格莱德和橄榄球Ⅱ号继代培养20次的愈伤组织为材料,设置不同的pH水平,通过2种培养方式进行了原生质体培养,观测其原生质体的分裂和生长状况。结果表明:3个草地早熟禾品种原生质体最适宜的培养方式为固液双层培养,固液双层培养中液相pH为5.8(新格莱德pH6.0)时原生质体分裂率达最高值,午夜2号42.8%、新格莱德50.1%和橄榄球2号29.4%。基因型的差异对于原生质体培养成功与否有着密切的关系。     

2,4-D和BA对黑麦草不同外植体愈伤组织诱导与分化的影响

以多年生黑麦草的芽尖、根尖、下胚轴、成熟种子为外植体进行了愈伤组织诱导和分化的研究,结果表明:不同划割处理的成熟种子的愈伤组织诱导率不同,不同外植体的愈伤组织诱导率也不同,芽尖、根尖愈伤组织的诱导效果较差.纵向划割的成熟种子的愈伤组织诱导率及分化能力均优于下胚轴.2,4-D浓度在7 mg/L、BA浓度为0.1 mg/L时有利于成熟种子诱导产生愈伤组织,2,4-D浓度在5mg/L、BA浓度在0.05mg/L时有利于下胚轴诱导产生愈伤组织.继代培养时间对愈伤组织的分化率有很大影响,成熟种子和下胚轴在继代培养基上继代培养60d和80d时分化率最高,分别达到76%和35%,继代天数过长不利于愈伤组织的生长.     

草地早熟禾愈伤组织诱导及植株再生

以成熟种子和胚轴为外植体诱导草地早熟禾愈伤组织，比较草地早熟禾四个品种的愈伤诱导情况和不同6-BA浓度、愈伤年龄等因素对愈伤组织分化能力的影响。结果表明：成熟种子的出愈率与胚性愈伤诱导率均高于胚轴；MS 2，4-D(2mg／L) 6-BA(0.1mg／L)培养基为草地早熟禾Mardona品种较为合适的愈伤培养基，其诱导率为58，3％；MS BA(3mg／L) KT(0．2mg／L)为较为适合的分化培养基。再生率高达70％；随着继代次数的增加，草地早熟禾分化能力能够继续保持。选择致密、易碎、生长迅速的愈伤继代能够保持草地早熟禾的胚性。可以为遗传转化提供长期良好的植物材料。     

草地早熟禾愈伤组织诱导及植株再生

以成熟种子和胚轴为外植体诱导草地早熟禾愈伤组织,比较草地早熟禾四个品种的愈伤诱导情况和不同6-BA浓度、愈伤年龄等因素对愈伤组织分化能力的影响。结果表明:成熟种子的出愈率与胚性愈伤诱导率均高于胚轴;MS 2,4—D(2mg/L) 6-BA(0.1mg/L)培养基为草地早熟禾Mardona品种较为合适的愈伤培养基,其诱导率为58.3%;MS BA(3mg/L) KT(0.2mg/L)为较为适合的分化培养基,再生率高达70%;随着继代次数的增加,草地早熟禾分化能力能够继续保持。选择致密、易碎、生长迅速的愈伤继代能够保持草地早熟禾的胚性,可以为遗传转化提供长期良好的植物材料。     

新农1号狗牙根愈伤组织诱导及再生研究

以新农1号狗牙根(Cynodon dactylon (L.) Pers.‘Xinnong No.1')成熟颖果为外植体,研究不同激素浓度组合对愈伤组织诱导、继代及分化的影响.结果表明:在愈伤组织诱导中,适宜的培养基为添加2.00 mg·L-12,4-D+0.01 mg· L-1 6-BA+500 mg·L-1脯氨酸的MS培养基,出愈率可达71.2％,愈伤形态为半透明水渍状且淡黄色颗粒较多;继代改造培养基中添加2,4-D 0.5 mg·L-1 +6-BA 0.5 mg·L-1+ABA 2.0 mg·L-1+ GSH 2.0 mg·L-1的MS培养基上培养4周后,愈伤组织增殖率可达41.3％;分化过程中,在不添加任何激素的1/2MS培养基中培养10 d后,将胚性愈伤组织转入添加6-BA 1.0 mg·L-1的MS培养基中,很快绿点变密,继而分化成苗,愈伤组织再生频率达25％,小植株形成的强度为16.7％.     

草地早熟禾成熟胚离体培养植株再生技术的研究

以大青山草地早熟禾和超级伊克利早熟禾的成熟种子为外植体材料,研究激动素和生长素及其不同配比组成的激素组合对愈伤组织诱导发生与生长状态及其绿苗分化能力的影响。结果表明,在愈伤组织诱导培养基中附加2.0mg/L2,4-D和0.2mg/LBA,诱导频率在30%-43%之间。在其继代培养基中添加1.0mg/L2,4-D和0.5mg/LBA,愈伤组织增殖速度快,且保持胚胎发生能力。在愈伤组织分化培养基中附加2.0mg/LBA或CPPU,经继代培养3代的愈伤组织的绿苗分化率保持在30%左右。在继代培养中,早代选择外表呈干燥、紧密、颗粒状愈伤组织是克服随着继代培养时间的延长愈伤组织再生植株的能力显著下降这一障碍的简易有效方法。     

草地早熟禾午夜2号植株再生研究

以草地早熟禾(Poa pratensis L.)品种午夜2号成熟种子为外植体,进行植株再生研究,建立高频再生体系,为草地早熟禾进行原生质体培养和细胞融合奠定基础。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂,其诱导率为52.3%;最佳继代培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.3mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂;最佳分化培养基为MS+NAA(0.5 mg/L)+6-BA(1 mg/L)+3%蔗糖+0.6%琼脂、分化率为57.5%;生根培养基同分化培养基,供体材料经100d的培养后获得再生植株。     

日本矮生沿阶草愈伤组织的诱导及其分化

选用不同外植体和不同培养基,对日本矮生沿阶草Ophiopogon japonicus进行了愈伤组织的诱导及分化的研究.结果表明:幼嫩叶片的基部是最适宜诱导愈伤组织的外植体.G3(MS+KT 0.2 mg/L +2,4-D 0.1 mg/L)培养基的愈伤组织的诱导率达到89%以上,将诱导的愈伤组织置于J1(MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L)培养基中的愈伤组织的分化率最高,达到59%.因此,选用幼嫩的叶片基部置于G3培养基进行诱导,继代一次后置于J1培养基进行分化是最有利于再生的途径.     

不同苜蓿品种再生体系的差异性比较

以陇东野生紫花苜蓿、阿尔冈金、甘农1号、游客4个苜蓿品种的下胚轴为外植体,比较不同苜蓿品种外植体愈伤组织诱导、分化及再生能力的差异,研究不同激素浓度及配比对再生体系建立的影响。结果表明,4个苜蓿品种下胚轴诱导率依次为阿尔冈金甘农1号陇东野生紫花苜蓿游客;在愈伤组织诱导培养基MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA上诱导率最高;MS+0.5 mg/L KT+0.3 mg/L NAA为最佳分化培养基,分化率在84.5%~93.5%;适宜的生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,附加1%蔗糖,各品种再生植株的移栽成活率为100%。     

海雀稗幼穗离体培养植株再生

本研究旨在离体培养条件下建立起海雀稗植株再生的技术体系,为开展海雀稗细胞和分子生物学育种工作创造条件。以Adalay海雀稗(Paspalum vaginatum Sw.cv.Adalay)的幼穗为外植体材料,在附加2,4-D 2.0~4.0 mg/L稍作修改的MS培养基上,愈伤组织诱导率达90%以上。不同发育时期的幼穗影响其愈伤组织的诱导发生频率:1.0~2.0 cm长的幼穗,愈伤组织诱导率达80%以上;2. 0 cm以上的幼穗,诱导率降至60%以下。在添加2,4-D2.0 mg/L和BAP 0.05 mg/L的愈伤组织诱导培养基上,诱导产生的颗粒状愈伤组织占愈伤组织总数的40%以上。愈伤组织继代培养基中琼脂的用量提高到16 g/L时,愈伤组织在继代培养过程中保持颗粒状结构。颗粒状愈伤组织经连续继代培养3次后转移到附加BAP 2.0 mg/L的分化培养基上,植株再生频率达98%。通过提高愈伤组织继代培养基的渗透压,海雀稗幼穗诱导产生的颗粒状愈伤组织在继代培养过程中能够保持颗粒状的结构和高频率植株再生的能力。     

柳枝稷种子愈伤组织诱导及分化

高效再生体系是建立遗传转化体系的基础和前提,本研究以柳枝稷（Panicum virgatum）成熟种子为外植体,对柳枝稷再生体系的建立进行探索。使用70%乙醇及0.1% HgCl2采用两步法灭菌,以MS培养基为基本培养基,研究不同质量浓度2,4 D与6 BA组合对愈伤组织诱导的影响,不同质量浓度GA3对愈伤组织分化的影响。结果表明,70%乙醇处理20 s,然后用0.1% HgCl2处理5 min,种子活力保存最好,愈伤组织诱导率最高;愈伤组织诱导培养基添加5 mg·L-1 2,4 D与1.2 mg·L-1 6 BA为最佳组合,其诱导率最高,质量最好;添加0.5 mg·L-1GA3分化成苗的效果最好。最终得到柳枝稷最优的再生体系：MS培养基为基本培养基,添加5 mg·L-1 2,4 D及1.2 mg·L-1 6 BA进行愈伤组织诱导;添加0.5 mg·L-1 GA3分化、再生。     

甘肃陇西野生草地早熟禾植株的再生体系

以甘肃陇西野生草地早熟禾(Poa pratensis)成熟种子为外植体,研究不同激素及其浓度组合对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,不同浓度2,4-D处理下,愈伤组织的诱导率差异明显。MS+1.0 mg·L-1 2,4-D是陇西野生草地早熟禾愈伤组织诱导的最佳培养条件,诱导率为41.40%;单独使用2,4-D,愈伤组织的诱导率和质量要优于2,4-D和6-BA配合使用的情况。2 mg·L-1 6-BA适合甘肃陇西野生草地早熟禾愈伤组织的分化,在MS+2 mg·L-1 6-BA基础上添加0.5 mg·L-1 NAA和0.2 mg·L-1 2,4-D,绿苗率显著提高(P0.05),分别为22.88%和19.72%。生根培养基同分化培养基,生根率为100%。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导及植株再生的研究

以中牧1号紫花苜蓿的胚轴、叶片、子叶和根为外植体,研究了不同浓度细胞分裂素对胚性愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基、蔗糖浓度对胚状体分化的影响。结果表明:不同外植体间的愈伤组织诱导率差异较大,以胚轴的愈伤诱导效果最好,愈伤组织诱导率高达92.2%;改良SH+2,4-D2.0 mg/L+BA 0.5 mg/L为最佳胚性愈伤组织诱导培养基;MSO1培养基适于胚状体的分化,蔗糖浓度为25~30 g/L时胚状体诱导率最大可达30.4%;MSO培养基是最佳的成苗培养基。     

日本结缕草愈伤组织的诱导和植株再生

以日本结缕草Zoysia japonica Steud的成熟种子为外植体进行了胚性愈伤的诱导与植株再生,结果表明:种子经去皮预处理后,含2.0 mg/L 2,4-D的MS基本培养基能成功诱导去皮种子产生愈伤组织,愈伤组织诱导率高达87.1%。愈伤组织在继代过程中共产生4种不同的类型。1/2 MS中添加0.4 mg/L KT或添加1.0 mg/L KT和1.0 mg/L NAA均能有效促进胚性愈伤的分化,分化率分别为63.8%、66.0%。     

匍匐翦股颖愈伤组织诱导及其分化的研究

以匍匐翦股颖Penn A-1和L-93的成熟种子为外植体,进行了愈伤组织诱导与分化的研究。结果表明:不同浓度2,4-D对Penn A-1和L-93愈伤组织进行诱导,L-93的诱导率都高于Penn A-1。当以2,4-D和6-BA不同浓度配比对愈伤组织进行诱导时,以MS+2 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA为Penn A-1和L-93最适的愈伤诱导培养基,诱导率较高;MSO培养基为适宜的分化培养基,分化率达90.9%;MSO+0.2 mg/L IBA为最佳生根培养基。     

Thidiazuron对解除羊草种子休眠和植株再生的影响

研究了不同浓度植物生长调节剂噻苯隆(Thidiazuron,TDZ)对解除羊草(Leymus chinensis)种子休眠和植株再生的影响,并对愈伤组织进行超微结构观察。结果表明,0.02 mg·L-1 TDZ低温浸种对解除羊草种子休眠和诱导胚性愈伤组织的效果最佳,发芽率和出愈率分别为11.0%和15.5%;羊草愈伤组织分化最佳培养基配方为MS+TDZ 0.5 mg·L-1+CH 2.0 g·L-1,分化率、绿芽分化率分别为56.7%和423.3%;TDZ低温浸泡处理的羊草种子诱导出的胚性愈伤组织较非胚性愈伤组织细胞质体中内含物丰富,更易于体胚形成;丛生芽经过1/2MS生根培养基的3次继代,炼苗移栽后成活率达100%。     

几种匍匐翦股颖品种植株再生的研究

以匍匐翦股颖Agrostis stolonifera潘娜1号、海滨和普特的成熟种子为外植体,进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。结果表明：在MS培养基上,以不同浓度2,4 D诱导潘娜1号、海滨和普特的愈伤组织时,普特的愈伤组织诱导率均高于潘娜1号和海滨。2 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为潘娜1号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合,3 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为45.2%、76.5%和87.0%;MSO(MS培养基的大量、微量元素和铁盐+B5培养基的有机元素)为最适合的分化培养基,分化率分别为50.0%、59.0%和57.6%。1/2 MS +1.0 mg/L IBA为生根培养基。     

小麦成熟胚离体培养及植株再生技术优化

本实验利用冬小麦品种周麦27成熟胚进行了愈伤组织诱导和植株再生技术的优化,以提高小麦成熟胚离体再生频率,为以成熟胚进行遗传转化奠定基础。探讨了外植体不同接种方法、Dicamba浓度和细胞分裂素种类、转分化时间和愈伤组织干燥处理等因素对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明, 1)小麦成熟胚十字形切割法接种愈伤组织分化率较高,达到66.7%,分别是刮胚法和整胚接种的2.1和4.3倍;2)附加2,4-D 和Dicamba均可以高频率诱导成熟胚愈伤组织的形成,但Dicamba诱导形成的愈伤组织分化率高于2,4-D的达4倍之多,在Dicamba浓度为2.0~4.0 mg/L时愈伤组织诱导和分化效果较好;3)愈伤组织在附加2.0 mg/L 6-BA的分化培养基上分化率最高为45.8%,其次为在不含激素或含KT 2.0 mg/L时分化率分别达到38.5%和37.0%,而在附加TDZ和ZT时分化率较低;4)成熟胚外植体在诱导培养2~3周后进行分化培养,绿苗分化率最高;5)愈伤组织分化前干燥处理6 h愈伤组织分化率略有提高,但与未干燥处理的相比差异不显著,而干燥12 h后分化率却明显降低。     

长叶点地梅愈伤组织诱导和植株再生

以长叶点地梅（Androsace longifolia）的无菌实生苗的下胚轴和叶片为外植体,研究不同种类、不同浓度的激素组合培养对愈伤组织诱导、芽诱导和生根的影响。结果表明,诱导下胚轴基部愈伤组织的最佳培养基为MS+0.3 mg·L-1 6 BA+0.1 mg·L-1 NAA,诱导率达85%;诱导叶片愈伤的最佳培养基为MS+0.02 mg·L-1 NAA+0.3 mg·L-1 TDZ,诱导率为80%;下胚轴愈伤诱导芽的最佳培养基为MS+0.5 mg·L-1 6 BA+0.2 mg·L-1 NAA,分化率达92.5%;叶片愈伤诱导芽的最佳培养基为MS+1.0 mg·L-1 6 BA+0.2 mg·L-1 NAA,分化率达82.5%;最佳生根培养基为MS+1.0 mg·L-1 IBA,生根率达100%,移栽成活率达95%。     

高羊茅胚性愈伤组织诱导及植株再生

对高羊茅2个品种(新秀和夜明珠2号)的再生技术进行了研究,建立了高频再生体系,为遗传转化奠定了基础.该试验以成熟的种子为外植体,诱导胚性愈伤组织.结果表明,2品种胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D5.0mg/L+6-BA0.1 mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基:新秀为MS+6-BA 2.0ms/L,夜明珠2号为MS+6-BA 1.0mg/L;生根最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L.