p38MAPK信号通路选择性调节FSH对甾体生成 的诱导作用研究

利用乙烯雌酚（DES）处理23日龄SD大鼠，分离卵巢颗粒细胞(GC)进行无血清培养。结果表明，FSH (50ng/m1) 处理GC，可迅速激活有丝分裂原蛋白激酶（p38 MAPK），FSH处理5min便可观察到磷酸化的p38 MAPK；FSH处理30min，磷酸化的p38 MAPK水平达到最高;向培养液中加入H89(蛋白激酶A抑制剂，10μM)，则显著抑制了FSH对p38 MAPK的激活作用，提示这种激活作用依赖于蛋白激酶A(PKA)。用 SB203580(p38MAPK抑制剂，20μM)抑制p38 MAPK激活，则进一步提高了FSH对孕酮和甾体生成快速调节蛋白（StAR）的诱导作用，同时降低了FSH对雌激素生成的促进作用(p<0.01)。RT-PCR结果显示：抑制p38 MAPK活性后，FSH对StAR mRNA刺激作用明显增强，但对细胞色素P450芳香化酶（P450arom）mRNA的诱导作用却减弱了(p<0.05)。激光共聚焦和蛋白印迹结果显示：在GC中，StAR蛋白主要分布在线粒体中；与对照组相比，FSH显著提高了StAR的荧光强度和蛋白水平；抑制p38MAPK活性则增强了FSH对StAR蛋白表达的诱导作用。     

脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的研究

为了初步探讨大肠杆菌型奶牛子宫内膜炎发生机制,进而为后续筛选出作用于关键信号通路靶点的药物奠定基础。试验通过组织块培养法和传代培养分离纯化得到奶牛子宫上皮细胞(Bovine endometrial epithelial cell,bEEC)。30μg/mL的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激bEEC 12 h后,收集细胞用于奶牛子宫内膜上皮细胞体外炎性损伤模型的研究。通过荧光定量RT-PCR检测LPS作用于bEEC 2、6、9、12 h后细胞内IL-1β、IL-8、IL-6、TNF-α mRNA表达,然后通过Western-blot检测LPS诱导bEEC NF-кB和MAPKs相关蛋白的表达。结果表明：30μg/mL的LPS作用b EEC细胞2、6、9、12 h可极显著(P<0.01)诱导IL-1β、IL-8、IL-6、TNF-α mRNA表达。LPS可上调MAPKs相关蛋白P38、ERK、JNK的磷酸化水平(P<0.01),促使NF-κB抑制蛋白IκBα的降解(P<0.05)。说明LPS可激活MAPKs和NF-кB信号通路,诱导大量炎症介质的...     

绵羊子宫内膜上皮细胞的纯化培养与鉴定

为了探索一种分离纯化绵羊子宫内膜上皮细胞的简便高效方法,本试验采用先组织块培养后消化纯化和直接消化后过筛纯化两种方法对绵羊子宫内膜上皮细胞进行培养、纯化,最后用免疫荧光方法对上述方法得到的细胞进行角蛋白检测从而鉴定上皮细胞纯度。结果表明先组织块培养后消化纯化法可以得到纯度95%,且形态均一、活性良好的绵羊子宫内膜上皮细胞;先消化后过筛纯化法得到的子宫内膜上皮细胞形态良好但是纯度仅为70%,与前一方法相比有待提高。因此,先组织块培养后消化纯化法是获得绵羊子宫内膜上皮细胞的一种简单易行且高效的方法,该方法得到的细胞可以在体外传至3-4代。     

奶牛和绵羊子宫内膜细胞体外培养方法的研究

为了探讨适用于奶牛和绵羊子宫内膜细胞的培养方法,采用了组织培养法、常温消化法、先组培后消化法和先消化后组培法,并适时用倒置显微镜观察,探讨哪一种原代培养方法更适合获得奶牛和绵羊子宫内膜细胞。结果表明,组织培养的奶牛和绵羊子宫内膜细胞生长较快,细胞形态为梭形和铺路石样交织在一起;常温消化法没有成功获得奶牛子宫内膜细胞,但获得了绵羊子宫内膜细胞;而先组培后消化法获得了奶牛子宫内膜细胞,但无法传代、不能长久生长;而先消化后组培法获得的细胞与单一组培法获得的奶牛和绵羊子宫内膜细胞情况相似,细胞上出现很多组织残块,覆盖在细胞上面不利于细胞增殖。说明组织培养方法是简捷快速获得牛、绵羊子宫内膜细胞的方法,获得的子宫内膜细胞可以在体外至少传4代,这类细胞可以用于研究动物子宫内膜的功能和相关分子调控机制。     

miR-181a-5p靶基因预测及其在鹅卵泡颗粒层中的表达分析

为深入探究miR-181a-5p在鹅颗粒细胞中可能的功能及其作用机制奠定基础。以多个网络数据库资源为基础,通过生物信息学的方法预测可能的靶基因及其信号通路,然后利用q PCR检测miR-181a-5p及其靶基因在不同阶段颗粒层中的表达水平。结果显示,miR-181a-5p在脊椎动物中高度保守;靶基因的GO和KEGG分析发现,miR-181a-5p主要参与调控细胞的增殖、分化、凋亡等过程,多数靶基因主要富集到FOXO、MAPK、PI3K-Akt等信号通路;根据靶基因互作网络图,筛选出10个核心靶基因VEGFA、MAPK1、FOS、KRAS、HRAS、SIRT1、BCL2、ESR1、PTEN和CDKN1A,其中多数靶基因均与细胞增殖凋亡相关。结果表明,miR-181a-5p在2～4 mm表达量最高,但在4～6 mm急剧下降,之后在4～6 mm、8～10 mm、F5这3个阶段均呈现显著上升趋势。miR-181a-5p可能通过靶向调控SIRT1、BCL2、CDKN1B、PTEN等基因,参与FOXO、MAPK、PI3K-Akt等信号通路来调控颗粒细胞的增殖凋亡过程。     

牛子宫内膜上皮细胞的体外培养及鉴定

旨在改良牛子宫内膜细胞原代培养方法,并鉴定其特征。分别比较了单纯组织块培养法和先组织块培养后再消化纯化的方法对牛子宫内膜细胞进行培养以及纯化。经免疫荧光染色方法对两种方法获得的牛子宫内膜上皮细胞进行角蛋白表达鉴定。研究结果表明：先组织块培养后再消化纯化的方法获得的牛子宫内膜上皮细胞形态良好,纯度较高。因此,组织块培养后再消化纯化得到的牛子宫内膜上皮细胞是一种操作简单、高效的方法,用该方法得到的细胞可以在体外传至4~5 代,此结果为牛繁殖生理及其机制模型的建立奠定基础。     

高纯度牦牛子宫内膜基质细胞的分离培养及其鉴定

为获得高纯度的牦牛子宫内膜基质细胞,对牦牛子宫内膜使用胶原酶消化,分离基质细胞进行体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果,牦牛子宫内膜在37℃条件下,以2 g/L的胶原酶Ⅱ消化2.5 h,更换新鲜消化液继续消化2.5 h,消化效果好;用74 μm滤网过滤,再经400 r/min离心和自然沉降去除上皮细胞,可分离得到大量的单个细胞,所得细胞贴壁后可见梭形和多角形2种形态,免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95%以上,不表达角蛋白。结果证明已成功分离到高纯度的牦牛子宫内膜基质细胞。     

奶牛子宫内膜炎的防治

1.病因奶牛子宫内膜炎是发生在子宫内膜的黏液性或脓性炎症。分娩时或产后细菌感染为多发原因,此时细菌最易侵入,加上牛舍不洁,牛床潮湿,粪便污染严重等,使奶牛产道发生细菌感染而发病。人工授精使用的器具消毒不彻底,用不卫生的输精器械操作等往往导致细菌侵入子宫。少数细菌侵入子宫一般不引起发病,细菌繁殖引起发病通常取决于子宫黏膜抵抗力的强弱及生殖激素水平的高低。     

H2O2浸种处理提高K326烤烟种子活力的研究

通过对七份不同活力水平的K326烤烟种子进行H2O2浸种处理，并应用生理及生化指标对不同的处理结果进行了测定和分析。结果表明：H2O2处理浓度为0.2%，浸种处理K326烤烟种子1天后，可提高中、低等活力水平K326烤烟种子的活力，而对高活力的K326烤烟种子活力则有轻微的抑制作用。这对快速鉴定烤烟种子质量及提高中、低等活力水平的烤烟种子具有十分重要的意义。     

中药复方宫净对奶牛子宫内膜上皮细胞抗炎作用研究

为探讨中药复方的疗效和调控机制,本试验利用脂多糖建立奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤模型,通过MTT法筛选出脂多糖最佳作用时间浓度时100 ?g/mL,12 h;中药复方宫净的最佳作用浓度为2 mg/mL。利用Real-time PCR技术检测对照组、模型组、中药组在3、6、12 h时细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA的表达变化。结果表明：与对照组相较,6、12 h模型组：IL-1β、IL-6、IL-8极显著升高(P<0.01);3 h：IL-1β、IL-8显著升高(P<0.05);中药组与模型组相较,3 h时IL-1β、IL-6显著下降(P<0.05);6 h时 IL-6、IL-8极显著下降(P<0.01),12 h时IL-8     

Smad2在附植后早期绵羊子宫内膜和滋养层的分布

Smad2是TGFβ超家族蛋白的胞质内信号转导分子,以往的研究证实Smad2的mRNA表达和定位于大鼠、小鼠子宫。本项研究的目的是用免疫组织化学方法检测Smad2蛋白在附植早期（妊娠32天）绵羊子宫内膜的分布。选山西省太谷县本地绵羊,于秋季交配后32天（32 day post coitus, dpc）,解剖取材子宫和胎衣组织,制作石蜡切片,用免疫组织化学方法检测了Smad2蛋白在子宫内膜的分布。结果显示Smad2蛋白定位于子宫腔上皮、腺上皮和上皮下方的基质中;胚胎附植处Smad2高表达,胎衣滋养层组织也呈现Smad2强阳性表达。结论：Smad2表达于附植早期绵羊子宫内膜和滋养层,可能参与子宫内膜和附植后胚胎发育的调节。     

山楂提取物牡荆素鼠李糖苷对力竭训练大鼠心肌损伤的保护作用

山楂(Crataegus pinnatifida Bunge)提取物牡荆素鼠李糖苷(vitexin-2"-O-rhamnoside, VOR)是一种黄酮苷类化合物,具有心脏保护作用。本实验旨在考察牡荆素鼠李糖苷对力竭训练大鼠心肌损伤的保护作用。本实验通过力竭游泳建立了力竭训练大鼠模型,训练当天对大鼠分别灌胃3个剂量(20, 40和80 mg/kg)的牡荆素鼠李糖苷,共给药4周。然后检测了大鼠的力竭时间、心肌损伤指标(LDH, CK和cTnI)、心肌形态、心肌氧化应激(SOD, CAT和MDA)和炎症(IL-1β, IL-6和TNF-α)指标。通过Western blot检测心肌组织中Nrf2、Keap1、HO-1、NQO-1、p38 MAPK、p-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达水平。结果表明,3种剂量的牡荆素鼠李糖苷均提高了大鼠的力竭时间,降低了血清LDH、CK和cTnI水平,升高了心肌组织SOD和CAT水平,降低了MDA水平,降低了心肌组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平,升高了心肌组织细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量,降...     

臭氧化橄榄油对不同程度奶牛子宫内膜炎治疗效果的研究

针对抗生素带来的环境污染及耐药性问题,本试验根据臭氧的杀菌原理试制出具有杀菌作用的消毒类药物——臭氧化橄榄油。以氟苯尼考、盐酸多西环素和醋酸氯己定为对照组,臭氧化橄榄油作为试验组,探究臭氧化橄榄油对不同程度子宫内膜炎奶牛的治疗效果。同时为了验证臭氧化橄榄油对子宫内膜的损害,进行了小鼠子宫内灌注试验。结果表明:臭氧化橄榄油组对于卡他性及黏液性子宫内膜炎的治疗有效率能够达到抗生素类药物的治疗效果,且无显著差异(P0.05);而对于脓性子宫内膜炎的有效率显著低于对照组(P0.05),但在治愈率方面无显著差异(P0.05)。此外,在0~80 mg/L浓度范围内,臭氧化橄榄油浓度的增加并没有引起小鼠子宫上皮细胞明显的损伤。臭氧化橄榄油在一定程度上可以代替抗生素预防及治疗治疗卡他性及黏液性子宫内膜炎。     

自制有机碘栓对獭兔子宫内膜炎治疗研究

研究自制有机碘栓对獭兔子宫内膜炎治疗效果。通过子宫灌注致病性大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌等混合菌液,复制獭兔子宫内膜炎病理模型。分别于1天,3天,5天按0.01g/kg体重(按有效碘计算)子宫投放有机碘栓进行治疗,观察其用药前后的临床症状、子宫形态、子宫内膜病理学变化,并测定血清SOD,MDA,GSH-Px等生化指标。投药后第4天阴门肿胀及阴道充血逐渐消退,子宫分泌物逐渐减少;子宫颈和子宫角轻微肿胀,宫腔内有少量透明分泌物;子宫内膜较完整,上皮细胞结构基本正常。治疗组在第4天血清SOD和GSH-Px活力均高于病理对照组,差异显著(P0.05);第6天血清SOD活力高于病理对照组,差异显著(P0.05),而血清GSH-Px活力高于病理对照组,差异极显著(P0.01),血清MDA含量低于病理对照组,差异极显著(P0.01)。有机碘栓可有效治疗獭兔子宫内膜炎。     

中国荷斯坦牛TLR2基因遗传多态性的研究

以297头中国荷斯坦奶牛为研究对象,以TLR2(Toll like receptor 2)基因为目的基因,扩增目的片段,结合测序结果采用PCR-RFLP和CRS-RFLP技术方法来检测TLR2基因第2外显子的遗传多态性.结果发现:exon 2存在10098(T/G),10111(G/A)和11541(C/T)3个单核苷酸突变,其中11541位点的T/C突变为首次报道.分别选择EcoR V、HaeⅢ、DraⅠ等3种限制性内切酶检测其多态性.10098位点有3种基因型(AA,AB,BB),A、B等位基因频率分别为0.784 5,0.215 5;10111位点有2种基因型(CC,CD),C、D等位基因频率分别为0.985 8,0.014 2;11541位点有3种基因型(EE,EF,FF),E、F等位基因频率分别为0.099 3,0.900 7.10098位点T-G碱基突变导致天冬氨酸突变为谷氨酸(Asp63Glu),10111位点G-A碱基突变引起甘氨酸突变为丝氨酸(Gly68Ser).TLR2基因外显子2上的3个位点基因型在研究群体中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(p＞0.05).10098,10111,11541 3个位点的多态信息含量、杂合度、有效等位基因数分别为0.280 9/0.338 1/1.510 8,0.027 9/0.027 9/1.028 7和0.143 4/0.178 9/1.217 9.10098位点达到中度多态,其余2个位点处于低度多态.TLR2基因可作为候选遗传标记,进行深入研究.     

On Simple Groups of Orders 2a13bpcqd and 2a17bpcqd

Sinmple Groups of ordefs 2 a13 bp cq d and 2 a17 bp cq d are obtained with the theorem of classification of the simple group and the exponent Diophantine equation. With the same method, all K 4 Simple Groups of order 2 ap bq cr d(p is any definite prime except 3, q and r are any different primes unequal to p can be obtained.     

金黄色葡萄球菌对小尾寒羊乳腺组织TLR2表达的影响

Toll样受体能够识别细菌等病原微生物及介导炎症反应信号通路,在先天免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。为了解Toll样受体2(TLR2)在小尾寒羊正常乳腺组织及由金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎乳腺组织中的表达情况,探讨TLR2在金黄色葡萄球菌乳腺炎致病过程中的作用机制及乳腺上皮细胞在乳腺免疫防御中所起的作用,采用qRT-PCR技术和免疫组织化学染色(IHC)法检测了正常小尾寒羊及金黄色葡萄球菌乳腺炎病理模型小尾寒羊乳腺组织中TLR2基因mRNA及其蛋白的表达情况。结果显示,小尾寒羊正常乳腺组织、金黄色葡萄球菌感染乳腺组织均有TLR2 mRNA及其蛋白表达;但金黄色葡萄球菌感染后乳腺组织中TLR2基因及TLR2蛋白显著高于正常乳腺组织,且感染后48 h TLR2 mRNA和TLR2蛋白相对表达量最高(P0.05),96 h TLR2 mRNA和蛋白相对表达量较48 h显著降低(P0.05),正常对照组TLR2的相对表达量最低。通过免疫组织化学染色发现,正常乳腺组织中TLR2蛋白主要定位于乳腺腺泡上皮,而感染金黄色葡萄球菌后乳腺组织中TLR2蛋白主要表达在乳腺腺泡腔中脱落的乳腺上皮细胞和以淋巴细胞为主的炎性细胞上。结果表明,乳腺感染金黄色葡萄球菌后,乳腺上皮细胞是病原菌作用的靶标,通过上调表达TLR2识别病原菌,激发先天免疫。     

益母生化散治疗奶牛子宫内膜炎效果好

<正>子宫内膜炎是奶牛的一种常见病和多发病,如治疗不当或不及时,轻者延长母牛的繁殖周期或造成产奶量下降,重者导致母牛丧失繁殖能力。近几年笔者对52头产后2~3天的奶牛灌服益母生化散,连用2~3剂,均获得较为满意的治疗效果。1.发病因素环境卫生条件差、子宫积水、双胎子宫严重扩张、产道损伤和低血钙等都能引发子宫内膜炎。身体抵抗力降低和饲养管理不当会使子宫内膜炎的发病率     

天然活性物质虎杖苷对过氧化氢诱导的星形胶质细胞增殖及凋亡的影响

虎杖苷(PD)是中药虎杖的主要活性成分,具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等功效。有报道称,PD可通过激活核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1信号通路抑制过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞凋亡。然而,虎杖苷对星形胶质细胞凋亡的影响和机制还未知。本研究中,我们将不同剂量(25, 50, 100 ng/m L)的PD作用于H₂O₂诱导的星形胶质细胞,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞中caspase3蛋白表达,实时定量聚合酶链式反应技术(RT-qPCR)检测了miR-301a-3p表达。同时,转染miR-301a-3p抑制剂至星形胶质细胞,观察下调miR-301a-3p对H₂O₂诱导的星形胶质细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果显示,PD可促进H₂O₂诱导的星形胶质细胞增殖及细胞周期进程且呈剂量依赖性,而抑制细胞凋亡。此外,PD可促进H₂O     

艾叶黄酮异泽兰黄素对运动损伤大鼠炎症和抗氧化系统的影响

为了考察艾叶黄酮异泽兰黄素(eupatilin, EPT)对运动损伤大鼠炎症和抗氧化系统的影响。本研究将SD大鼠分组,每组20只。处理组大鼠分别灌胃不同浓度的异泽兰黄素溶液,灌胃4周。通过力竭运动诱导的运动损伤大鼠模型。对照组大鼠不建模,处理组大鼠在灌胃异泽兰黄素当天开始进行建模。分别检测了大鼠的力竭时间、心肌损伤指标(LDH, CK和c TnI)、心肌TUNEL阳性率、心肌氧化应激(SOD, CAT和MDA)和炎症(IL-1β, IL-6和TNF-α)指标。通过Western blot检测心肌组织中Nrf2和p38 MAPK/NF-κB信号轴的蛋白表达水平。结果显示,3种剂量的异泽兰黄素均提高了大鼠的力竭时间,降低了血清LDH、CK和cTnI水平,降低了心肌组织TUNEL阳性率,升高了心肌组织SOD和CAT水平,降低了心肌组织MDA水平,降低了心肌组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平,升高了心肌组织细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量,降低了心肌组织Keap1蛋白相对表达量,降低了心肌组织p38 MAPK和NF-κB p65磷酸化水平(P<0.05)。总之,异...