水稻茉莉酸甲酯和白叶枯病菌诱导型启动子的克隆及功能鉴定

诱导型启动子能灵活、精确的调控外源基因的表达,推动了植物基因工程技术的发展。在前期研究中,我们发现了一个萜类合成酶基因LOC_Os02g36140,该基因的表达受茉莉酸甲酯(MeJA)诱导。在本研究中,我们通过PCR技术分离了该基因5'端的2 272 bp启动子序列,命名为PRJA140,构建了PRJA140启动子驱动gusA基因表达的融合载体,转化水稻后对该基因的启动子活性进行分析。MeJA和白叶枯病菌处理转基因水稻后发现,和对照相比,转基因水稻根和叶片中GUS基因的表达明显上调,说明PRJA140启动子能被MeJA和白叶枯病菌诱导,是一个诱导型启动子。     

灵芝马酮联合有氧运动对高脂血症大鼠脂质代谢基因的影响

本研究旨在探讨灵芝马酮联合有氧运动对高脂血症大鼠的影响及其潜在机制。通过评估脂质代谢、肝脏形态、氧化应激、炎症因子和脂质代谢基因转录等指标,我们发现灵芝马酮联合有氧运动能够显著改善高脂血症大鼠的体重和脂质代谢异常。此外,联合干预还能减少肝脏脂肪积聚、炎症反应和氧化应激,恢复肝脏形态接近正常水平。脂质代谢基因转录分析进一步表明,联合干预对SREBP1c、FAS、HMGCR、CD36和CYP7A1等基因的表达产生调节作用。这些发现揭示了灵芝马酮联合有氧运动在改善高脂血症和相关肝脏疾病方面的潜力。     

灵芝菌丝体活性三萜抗肿瘤活性的研究

探讨活性灵芝三萜对各种癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。采用MTT观察活性三萜对癌细胞的生长抑制作用,采用共聚焦扫描电镜和流式细胞术检测了该活性三萜对各种癌细胞的促凋亡作用。该活性灵芝三萜能够剂量依赖性地抑制各种癌细胞的增殖,并且在流式细胞术检测出现亚二倍体峰,共聚焦扫描电镜可观察到凋亡细胞。该活性灵芝三萜能够抑制各种癌细胞的生长并能诱导细胞发生凋亡。     

灵芝多糖功能饮料的研发及体外抗氧化活性分析

以灵芝孢子粉为主要原料,在单因素试验的基础上,以灵芝多糖得率为评价指标,采用正交试验优化了灵芝多糖纤维素酶法提取工艺,然后以灵芝多糖为主要原料,感官评分为评价指标,采用单因素试验和正交试验优化灵芝多糖功能饮料的配方,同时对饮料的体外抗氧化活性进行了研究.结果表明,纤维素酶法提取灵芝多糖的最佳条件为:料液比1:55(g/mL),酶解温度50℃,酶解时间60 min,纤维素酶用量3％,该条件下灵芝多糖得率为2.89％.灵芝多糖功能饮料的最佳配方为:白砂糖10％,芒果浓缩汁4％,柠檬酸0.2％.体外清除自由基试验结果表明:灵芝多糖功能饮料对DPPH·和OH·均具有良好的清除作用,其半清除率(IC50)分别为0.537 mg/mL和0.650 mg/mL,总还原力最高达到1.15％,说明该产品具有一定的抗氧化能力,具有作为保健型功能饮料开发的潜能.     

陆地棉低温响应基因GhJAZ1的克隆及表达分析

为了深入研究棉花JAZ基因在低温响应中的作用机理,利用RT-PCR方法从陆地棉中棉所36中克隆出一个低温应答基因GhJAZ1(GenBank登录号KJ562212)。全长CDS序列为810 bp,编码270个氨基酸,预测编码蛋白质的分子量为29.808 ku,理论等电点为8.33,为非跨膜蛋白。该基因编码蛋白具有一个N端NT结构域、一个TIFY结构域和一个C端Jas结构域。系统进化树分析发现,该蛋白与可可树和黄麻的亲缘关系最近。荧光实时定量PCR分析发现,GhJAZ1基因在下胚轴和根中显著高表达。此外,该基因还受到脱落酸(ABA)和茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导表达,表达量变化趋势均为先升高后降低,但在MeJA诱导下该基因的表达量变化更明显。在低温胁迫下,不同低温耐性棉花材料中该基因的表达量变化程度也不同,耐低温品种中棉所36中GhJAZ1基因的上调表达更为显著,推测该基因参与了棉花低温胁迫防御反应。亚细胞定位显示,GhJAZ1蛋白定位于细胞核中。该研究可为进一步开展GhJAZ1基因低温响应的分子机制研究奠定基础。     

灵芝LZ-8在烟草中的表达及产物特性的初步研究

将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8,在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD,与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带,纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血清。将该基因亚克隆到植物双元表达载体中,用农杆菌介导的方法转化烟草。经ELISA实验定量测定,重组LZ-8达到了烟草可溶性蛋白的0．18％（每克新鲜叶片约含149．82μgLZ-8重组蛋白）。体外活性检测表明,重组蛋白能有效地提高VeroE6细胞中肿瘤坏死因子（TNF-α）基因的mRNA转录水平,具有免疫调节相关功能。     

茉莉花MK基因及启动子克隆与表达分析

甲羟戊酸激酶在植物萜类化合物合成中具有重要作用。本研究以茉莉花转录组测序数据为基础,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从双瓣茉莉花中获得甲羟戊酸激酶(mevalonate kinase,MK)基因,命名为JsMK(GenBank登录号为MH311040)。测序结果显示JsMK全长cDNA为1608 bp,包含开放阅读框(ORF)1164 bp,编码387个氨基酸。生物信息学分析结果表明该基因编码的蛋白可能定位于细胞质中,为非亲水性稳定蛋白,含有与其他MK蛋白所共有的3个保守区,以及GHMP家族特有的N端保守区和C端保守区。Blast比对和系统进化树分析结果表明,JsMK蛋白与野生油橄榄、长春花等多种植物的MK蛋白同源性较高。采用染色体步移技术(Genenome walking technique)扩增MK基因5’端上游调控序列,获得709 bp启动子序列,PlantCare分析表明该序列含有大量基本顺式作用元件TATAbox、CAATbox,还存在生长素(IAA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)等激素响应激素及多个光响应顺式调控元件。利用实时荧光定量PCR检测Js MK在IAA、MeJA、ABA处理下的表达水平。结果表明,JsMK同时受IAA、MeJA及ABA不同程度的诱导表达,其中MeJA对其诱导最明显。本研究通过从茉莉花中克隆并分析JsMK基因及其启动子序列,为进一步研究JsMK基因在萜类合成调控的功能提供科学依据。     

灵芝子实体中灵芝酸A的HPLC定量测定方法

为建立一种灵芝子实体中灵芝酸A的高效液相色谱（HPLC）定量测定方法．通过对灵芝子实体萃取物分离效果的影响因素进行对比试验．确定了灵芝中灵芝酸A的分离条件：色谱柱为ZORBAXSB—C18（4．6mm×150mm,5μm）;流动相组成（A：1．0％醋酸水溶液,B：甲醇）,A：B比例为40％：60％,流速0．5mL／min,柱温25℃,进样量5μL;在此条件下,灵芝子实体萃取物中灵芝酸A的HPLC保留时间13．619min,分离度〉1．5;绘制的标准曲线为y=8．8021x-1．45,r^2=0．9902;其测定结果的重现性、精密度和加标回收率（99．58％）均较佳,RSD均小于2％。因此,该方法可作为灵芝子实体中灵芝酸A的HPLC定量测定方法。     

猕猴桃AcWRKY70基因序列克隆及其对溃疡病病原菌和激素处理表达模式分析

为探究猕猴桃AcWRKY70转录因子在不同抗病性品种中响应猕猴桃溃疡病胁迫的作用机制,以抗性病品种徐香和高感病品种红阳猕猴桃叶片cDNA为模板克隆AcWRKY70基因,并对红阳AcWRKY70基因序列特征进行分析,对编码蛋白进行系统进化分析及亚细胞定位预测。通过RT-qPCR分析AcWRKY70基因的组织特异性,不同抗性猕猴桃品种对丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Psa)和水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)处理下表达模式的差异。结果显示,红阳AcWRKY70基因序列总长906 bp(GenBank登录号：MW881147),开放阅读框885 bp,编码294个氨基酸;含有典型的WRKYGQK保守结构域,锌指结构为C2-HC,属于WRKY家族第Ⅲ类组,亚细胞定位预测表明,其定位于细胞核,系统进化树分析表明,其与茶树亲缘关系最近。红阳和徐香AcWRKY70基因均在叶片中表达量最高。在Psa处理下,12 h徐香品种AcWRKY70基因相对表达量迅速上升至对照的80.58倍;而在红阳中48 h该基因相对表达水平上升至最高。在SA与Psa(SA+Psa)和MeJA与Psa(MeJA+Psa)共...     

大薯PR1基因在炭疽菌、激素处理下的表达分析

炭疽病是大薯种植过程中所遭受的最严重病害。为了探究PR1基因家族对炭疽菌的响应情况,本研究在前期转录组的基础上筛选了6个PR1基因,设置5组处理;炭疽菌处理、MeJA处理、SA处理、MeJA+炭疽菌处理、SA+炭疽菌处理,分别在处理1 d、2 d、3 d、4 d、5 d采用荧光定量PCR进行6个基因表达量差异分析。结果显示6个不同PR1基因在炭疽菌处理下都会使得其表达量增高,炭疽菌诱导下PR1-1基因5 d时表达量为6个基因中最高,达到峰值。炭疽菌+MeJA诱导下PR1-6表达量较高,4 d时达到峰值。炭疽菌+SA诱导下PR1-9在4 d表达量达到峰值。Me JA诱下PR1-6基因表达量较高,2 d时达到峰值。SA诱导下PR1-1基因2 d时表达量达到峰值,于6个基因中最高。由此可见,不同PR1基因对炭疽菌以及不同激素处理响应不同。     

水稻稻瘟病菌诱导表达启动子OsQ16p的克隆与功能分析

qRT-PCR分析表明,日本晴OsQ16基因受稻瘟病菌诱导表达。利用PCR技术从日本晴基因组中克隆了该基因编码区5′端上游1 229 bp的启动子序列,命名为OsQ16p。用其取代pBI121中gus基因上游的CaMV35S启动子,构建重组表达载体pBIQ16p,经农杆菌介导转化日本晴,获得转基因植株。GUS组织化学染色和qRT-PCR分析表明: (1) gus基因在抗性愈伤组织和阳性转基因植株中均能表达; (2)转基因植株在接种稻瘟病菌后12 h,GUS表达量是处理前的2.7倍; (3)抗病相关信号分子水杨酸(salicylic acid,SA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)喷施转基因植株叶面后12 h,GUS表达量分别为处理前的3.1倍和3.5倍。以上结果表明,OsQ16p启动子具有启动活性,并明显受稻瘟病菌、MeJA和SA诱导表达。     

灵芝多糖抑菌活性初探

通过热水提取法提取灵芝多糖,得到灵芝粗多糖,并以3种植物病原菌(胡萝卜欧氏菌、指状青霉、灰葡萄孢)和5种食品有害菌(蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、黑曲霉和黑根霉)为供试菌,采用纸片琼脂法来测定灵芝粗多糖对供试菌的抑菌强度。结果表明,灵芝粗多糖对植物病原菌中的胡萝卜欧氏菌有较强的抑制作用;对指状青霉菌有一定的抑制作用,但抑制作用较弱;对灰葡萄孢几乎没有抑制作用;对食品有害菌中的枯草芽孢杆和蜡状芽孢杆菌有很强的抑制作用;对大肠杆菌和黑曲霉抑制作用相对较弱;对黑根霉几乎没有抑制作用。总体来看,灵芝多糖对细菌的抑菌活性强于真菌。     

响应辣椒疫霉菌诱导的CaWRKY转录因子筛选及其信号通路分析

在辣椒基因组中全面鉴定WRKY转录因子并筛选出受辣椒疫霉菌诱导的CaWRKY基因,并分析关键CaWRKY基因参与的信号通路。以CM334和NMCA10399为材料,基于辣椒基因组和RNA-seq数据,并在水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)处理下通过qRT-PCR技术检测基因表达并分析。全基因组共鉴定出69个CaWRKY基因。接菌后12 h,抗、感材料中分别鉴定出7个和3个差异表达基因;接菌后36 h,分别有13个和22个差异表达基因,表明抗病材料能更快速应答。在筛选出的8个关键CaWRKY基因中,CaWRKY19和CaWRKY65受SA诱导上调表达;CaWRKY50受MeJA诱导上调表达;CaWRKY25受SA诱导上调表达同时受到MeJA抑制下调表达,而CaWRKY49同时受SA和MeJA抑制下调表达,推测CaWRKY19和CaWRKY65通过SA,CaWRKY50通过JA,而CaWRKY25和CaWRKY49则通过SA和JA信号途径参与辣椒抗疫病防御反应。     

灵芝孢子油与6种其他植物油中的脂肪酸组分的比较

对灵芝孢子油与菜籽油等6种植物油的脂肪酸组成相似性进行分析,同时探讨了红外光谱法鉴别灵芝孢子油的可行性。采用气相色谱法对灵芝孢子油及菜籽油等6种植物油脂肪酸进行了测定,并利用傅里叶变换红外光谱仪对其信息进行采集。市售不同品牌灵芝孢子油,脂肪酸组成比较接近。脂肪酸组分聚类分析结果显示,灵芝孢子油的脂肪酸组成与菜籽油最相似,其次为花生油和橄榄油。利用1397.4 cm~(-1)、967.1 cm~(-1)、913.7 cm~(-1)处吸收峰,红外光谱法可以将灵芝孢子油与菜籽油、大豆油、玉米油、葵花籽油和橄榄油区别开来。红外光谱法可以将灵芝孢子油与菜籽油等植物油区别开来,这为灵芝孢子油鉴别提供了一种快速有效的途径。     

农作物秸秆栽培灵芝的实验研究

目的：研究以农作物秸秆作为主要原料栽培灵芝的效果。方法：采用二因素随机区组设计研究不同秸秆种类和玉米粉用量对灵芝生物转化率的影响。结果：秸秆种类和玉米粉用量对灵芝生物转化率均有显著影响。结论：用稻草、麦草和油菜杆做主要原料栽培灵芝是不可行的,而用大豆秸、豌豆秸、蚕豆秸、花生秸等豆科植物秸秆及玉米芯、玉米秆、棉籽壳栽培灵芝是可行的。用大豆秸等豆科植物秸秆及棉籽壳栽培灵芝,培养基中玉米粉的最佳用量为6%,生物转化率可达66%~80%;用玉米芯、玉米秆栽培灵芝,培养基中玉米粉的最佳用量为9%,生物转化率分别为74     

灵芝生产用种的亲缘关系研究

利用RAPD技术对生产中常用的灵芝属8个菌株的亲缘关系进行了分析。根据UPCMA构建的树状图表明：8个菌株在较低的相似水平上可以分成3个明显不同的组：第1组包括黑芝(Ganoderma atrum)、松杉灵芝(Ganoderma tsug-ae)、圆芝(Ganoderma rotundatum)、灵芝0770(Ganoderma lucidum 0770)和韩国灵芝（Ganoderma lucidum HG)；     

农作物秸秆栽培灵芝试验效果评价

目的:研究以农作物秸秆作为主要原料栽培灵芝的效果。方法:采用二因素随机区组设计研究不同秸秆种类和玉米粉用量对灵芝生物转化率的影响。结果:秸秆种类和玉米粉用量对灵芝生物转化率均有显著影响。结论:用稻草、麦草和油菜杆做主要原料栽培灵芝是不可行的,而用大豆秸、豌豆秸、蚕豆秸、花生秸等豆科植物秸秆及玉米芯、玉米秆、棉籽壳栽培灵芝是可行的。用大豆秸等豆科植物秸秆及棉籽壳栽培灵芝,培养基中玉米粉的最佳用量为6％。生物转化率可达66％-80％:用玉米芯、玉米秆栽培灵芝,培养基中玉米粉的最佳用量为9％,生物转化率分别为74．5％和50％。     

蓝光对灵芝菌丝体多糖积累和糖代谢相关酶的影响

旨在研究蓝光对灵芝菌丝生长速度、生物量、多糖及4种糖代谢相关酶的影响。以暗培养为对照,测定了蓝光处理的灵芝菌丝体的生长速度及生物量,采用苯酚-硫酸法测定了2种处理的灵芝多糖含量,同时测定了灵芝4种糖代谢相关酶的酶活性。研究发现,蓝光处理菌丝体的生长速度、多糖含量、己糖激酶(HK)活性、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)活性、磷酸葡萄糖异构酶(PGI)活性和α-磷酸葡萄糖变位酶(α-PGM)活性均高于黑暗对照,均是先升后降的变化趋势,蓝光处理菌丝体生物量积累高于黑暗对照。结果表明,蓝光可以促进灵芝菌丝体的生长,促进多糖的积累和相关酶的活性。     

灵芝14-3-3蛋白基因的电子克隆与表达分析

通过电子克隆技术，获得14-3-3基因的cDNA序列全长，并采用生物信息学方法，借助电子计算机和相关的生物信息学软件，对该基因编码蛋白从基本理化性质、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜区结构、信号肽、高级结构及系统发育树分析等进行了预测和分析。该cDNA编码蛋白由257个氨基酸组成，相对分子质量为29．0145 kDa，亲水性和疏水性比较平衡，定位于细胞质，不存在信号肽，无跨膜螺旋区，且二级结构由6．23％无规则卷曲，66．54％α-螺旋和27．24％延伸链组成。同源比对分析显示，该酶基因编码的氨基酸序列与污叉丝孔菌、双孢菇和木耳等蘑菇类高等真菌中的14-3-3基因所编码的氨基酸序列高度同源。实时荧光定量PCR结果表明，灵芝14-3-3基因在液体静置培养过程中的表达量显著高于振荡培养。     

花生壳在灵芝制种中的应用研究

灵芝是一类重要的木腐真菌,其制种研究为进一步的大田栽培提供了原料基础.本研究将花生壳作为主要成分应用于灵芝制种培养基的制备,二级种和三级种分别设置了3种不同的配方,比较了灵芝菌丝在不同培养基上的生长速度、形态特征和菌丝中多糖含量.结果表明,灵芝菌株在培养基HSK 2 B和HSK 3 B上生长速度分别为(5.65±0.26)mm/d和(6.11士0.44) mm/d,多糖含量分别为(0.462±0.027)％和(0.323士0.026)％,生长优势明显,有利于进一步大田栽培所用.以上结果表明,花生壳可作为主要原料用于灵芝制种培养基的配制.