2013-2014年广西省主要猪病毒性传染病流行病学调查

为掌握广西猪主要病毒性传染病流行情况,为猪传染病预防方案提供依据,本研究于2013年1月1日至2014年12月31日从广西省共收集410份样品,运用PCR及RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(PORV)、猪流感病毒(SIV)的感染情况。检测结果表明,PRRSV、PCV-2、CSFV、PRV、PEDV、TGEV、 PORV和SIV的平均感染率分别为35.12%、18.54%、1.17%、0.98%、10.00%、2.44%、0和1.22%;PRRSV和PCV-2混合感染率为6.83%;PRRSV在秋、冬季节呈现高感染率为36.67%、45.31%和63.64%、48.78%,而PCV-2在春、夏、冬季节呈现高感染率为44.44%、25.00%,11.29%、19.35%和39.39%、14.63%。PRRSV和PCV-2是混合感染的主要病原,它们互相之间或是与CSFV、PEDV、PRV、SIV及副猪嗜血杆菌、链球菌等混合感染,PRRSV和PCV-2将是今后广西地区猪病防控的重点。     

贵州省部分地区规模化猪场仔猪4种致猪腹泻病病毒感染调查

为了解贵州省规模化猪场猪病毒性腹泻的流行情况,从5个地区9个规模化猪场采集的腹泻仔猪的粪便和病死猪的肠内容物及肠系膜淋巴结共66份,采用PCR或RT-PCR方法,分别进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的核酸检测。结果显示,PEDV、TGEV、RV和PCV-2检出率分别为72.72%、1.52%、12.12%和3.03%;PEDV/PCV-2、PEDV/RV、PEDV/TGEV混合感染率分别为3.03%、15.2%和1.52%,总混合感染率为19.70%,其中5个猪场为PEDV单独感染。结果表明,贵州省部分地区规模化猪场发生腹泻病的主要病原为PEDV,其次是TGEV、RV和PCR-2,且存在混合感染,为贵州省猪病毒性腹泻的防控提供一定的参考资料。     

武汉地区猪场中5种病毒性疾病的病原检测与分析

为了分析2016—2018年武汉地区猪场中5种病毒性疾病的流行情况,试验采用RT-PCR和PCR方法对2016—2018年采集的1 324份患病猪的肺脏、肝脏、淋巴结、小肠、血液等病料组织进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)5种病原的检测,统计其阳性数、阳性率及总阳性率,并分析其混合感染情况。结果表明:采集的病料组织经CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PEDV特异性引物扩增均获得目的条带; CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2和PEDV的测序结果与GenBank中的参考株相比同源性均在96.8%～99.8%之间;经统计2016—2018年间猪场中CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PEDV总阳性率分别为23.0%、14.0%、6.8%、17.5%、10.6%,其中CSFV、PRRSV和PCV-2的阳性率较高,为该地区主要流行毒株;多重感染表现出逐年增高的趋势,且以二重感染为主,占检测总数的7.3%。说明武汉地区猪场中CSFV、PRRSV和PCV-2感染严重,并以多重感染为主。     

江西省规模化猪场公猪精液中5种病毒RT-PCR/PCR检测与分析

为了了解公猪精液是否携带病毒,试验采用PCR/RT-PCR技术对采自江西省3个规模化猪场的111份公猪精液的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪丁型冠状病毒(PDCo V)进行了检测。结果表明:3个规模化猪场的公猪精液都有不同程度的带毒情况,A猪场和B猪场均检出了PRRSV、PRV和PCV-2三种病毒,C猪场检出了PRRSV和PCV-2两种病毒,所有猪场均未检出PEDV和PDCo V。在111份样品中,PCV-2的阳性率最高,为74.77%;其次是PRV,阳性率为15.32%;PRRSV的阳性率为9.91%;同时还发现存在PRRSV+PCV-2和PCV-2+PRV混合感染的情况,其混合感染率分别为9.01%和13.51%。说明公猪精液也能作为多种病毒,特别是影响猪只健康的重要病毒的传播媒介,从而给猪群的健康带来潜在威胁。     

2018年广西重要猪源病毒性疫病流行病学调查

为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪圆环病毒3型（PCV3）,应用多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）。结果显示,所检测的694份组织样品中,CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV1、PCV2、PCV3的阳性率分别为11.10%、18.88%、7.20%、5.19%、2.45%、67.00%和5.76%;2种病原混合感染率为41.21%,3种病原混合感染率为4.32%,其中PRRSV和PCV2混合感染率最高。所检测的792份肠内容物及拭子腹泻样品中,PEDV、PDCoV、TGEV、PRoV的阳性率分别为9.72%、5.81%、1.77%和6.31%;2种病原混合感染率为5.30%,其中PEDV和PRoV混合感染率最高。结果表明,当前多种重要病毒性疫病仍在广西猪群发生和流行,并且多重感染普遍存在,应进一步加强监测和防控。     

安徽省仔猪腹泻5种病毒感染情况的调查研究

为了解安徽地区仔猪病毒性腹泻流行病学特点,对从安徽省37个规模化猪场采集腹泻仔猪的粪便或病死猪肠段共计186份,用RT-PCR和PCR技术进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(RV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)等5种病毒的检测.结果表明,PEDV阳性病料数占59.1％,阳性猪场占75.7％;TGEV阳性病料数占5.4％,阳性猪场占8.1％;RV阳性病料数占2.7％,阳性猪场占2.7％;PRV阳性病料数占8.1％,阳性猪场占21.6％;PCV-2阳性病料数占25.8％,阳性猪场占54.1％.PEDV与TGEV混合感染占4.3％,PEDV与PCV-2混合感染占18.8％,PEDV与PRV混合感染占10.8％,PRV和PCV-2混合感染占4.8％;其他病因50例,占26.9％.结果表明,PEDV、PCV-2 、PRV的单纯或混合性感染是近年安徽省仔猪腹泻的最为重要的3种病毒性病因,说明在今后的仔猪腹泻病防控过程中,应该着重加强对该3种疾病的综合防控.     

南充地区规模化猪场4种病毒性传染病的流行病学调查与分析

为了掌握南充地区规模化猪场主要疫病的免疫状况与流行情况,试验分别采用ELISA和PCR/RT-PCR方法对2018,2019年采集的南充地区规模化猪场的1 857份血清样品和152份临床病料样品进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)的血清学和病原学调查。结果表明:CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2免疫抗体合格率分别为87.45%、73.07%、80.02%和93.32%,CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2的感染阳性率分别为9.21%、17.11%、18.42%和22.37%;存在CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2的单独感染和混合感染,总单独感染率为38.16%,总混合感染率为13.82%。说明当前南充地区CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2的疫苗免疫效果整体上较好,但仍存在4种猪病毒病的散发性流行及混合感染,应加强重视。     

猪精液中五种病毒的初步检测

为探明猪精液在疫病传播中的作用,应用PCR和RT-PCR技术分别从发病猪场和未发病猪场采集种公猪精液进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测。结果发现,发病猪场的种公猪精液中CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2的感染率分别为30.0%、50.0%、4.0%和30.0%,而未发病猪场的感染率分别为4.0%、20.0%、0.0%和8.0%,这表明精液是多种猪病原传播的良好媒介,提示种公猪对于疫病的发生和传播起着重要作用。     

2014年广西部分地区常见猪群疫病感染情况监测分析

为探明2014年广西猪群主要疫病的感染情况,本研究从发病猪场和屠宰场采集猪组织样品共325份,应用RT-PCR方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV),并应用PCR方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)。结果发现,发病猪场中,这5种病毒感染率分别为12.00%、28.57%、19.43%、53.71%和9.71%,而屠宰场的感染率分别为5.33%、2.67%、5.33%、59.33%和11.33%。对猪群混合感染情况分析发现,PCV2和其他病原的混合感染率最高。其中,发病猪场二重感染最高的为PRRSV+PCV2,达到11.43%,其次为PEDV+PCV2、CSFV+PCV2和PCV2+PRV,阳性率分别为5.71%、4.00%和4.00%;三重感染率最高的为PRRSV+PEDV+PCV2以及PRRSV+PCV2+PRV,阳性率均为2.29%。屠宰场二重感染最高的是PCV2+PRV,达到3.33%;三重感染最高的是CSFV+PCV2+PRV,阳性率为0.67%。结果表明,在发病猪场和屠宰场中,PCV2的感染率最高,且常与其他病原发生混合感染,PRV感染率呈上升趋势,加强对这2种病毒的监控对控制广西地区猪群发病具有重要意义。     

2010—2013年河北省猪场腹泻病流行病学调查

为摸清河北省猪群腹泻病的流行情况,2010—2013年,课题组对河北省11个地市的1295个规模猪场进行了腹泻病的流行病学调查,并对114个发病猪群的肠道或粪便样品进行了猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪瘟病毒（CSFV）、圆环病毒2型（PCV-2）、伪狂犬病毒（PRV）和蓝耳病病毒（PRRSV）的检测。结果表明,2010—2013年,河北省猪场腹泻病的发病率分别为29.19%、52.82%、63.04%和33.53%,发病猪群主要以仔猪为主,其发病率和病死率分别为16.19%和72.03%,空间分布显示腹泻疫情从河北南部开始发生,逐渐向北部地区扩散,最后全省趋于平稳。样品中PEDV、TGEV、CSFV、PCV-2和PRV的检出率分别为68.42%、10.53%、13.16 %、21.05%和21.93%。     

氟苯尼考耐药基因floR LAMP检测方法的建立及应用

为建立快速、灵敏且可定量检测氟苯尼考耐药基因floR的环介导等温扩增方法(LAMP),根据GenBank登录的革兰阴性菌floR基因保守序列,利用PrimerExploerV4设计特异性LAMP引物,成功建立了快速检测氟苯尼考耐药floR基因的LAMP方法。该LAMP检测方法反应温度为63℃,反应时间为60min,具有可实时监测反应、定量检测出floR基因的拷贝数,以及操作简便的特点,灵敏度高,检测限为6.24×100拷贝,是普通PCR的100倍。用建立的方法检测对氟苯尼考不同敏感性的大肠埃希菌floR基因,结果显示,对氟苯尼考敏感、中介和耐药的菌株均检测到floR基因,其拷贝数与菌株MIC相关,提示floR基因不仅存在于氟苯尼考耐药菌中。所建立的floR基因LAMP检测方法可为floR基因的监测,以及氟苯尼考耐药性产生和传播机制的研究提供新的技术手段。     

南方不同季节育雏鸡舍主要环境因子的变化研究

试验以有窗封闭式笼养育雏鸡舍为对象,于2018年3月~2019年1月开展研究鸡舍内环境的温度、相对湿度、二氧化碳(CO2)、氨气(NH3)、硫化氢(H2S)、二氧化硫(SO2)浓度和细菌总数,并分析环境因子之间的关系。结果显示:不同季节育雏舍内环境温度满足鸡群正常需要,鸡群成活率超过97%。夏季舍内相对湿度达82.48%,并且料肉比高于春季、秋季和冬季。春季、秋季和冬季CO2浓度易超标,不同季节舍内白天温度均高于夜晚,而白天CO2浓度低于夜晚。不同季节舍内环境温度分别与相对湿度、CO2浓度呈负相关和正相关关系。试验表明:有窗封闭式育雏鸡舍内不同季节雏鸡生长发育良好,但夏季湿度过高,春季、秋季和冬季舍内CO2浓度高于标准。建议夏季应合理控制舍内相对湿度,春秋冬季注意平衡舍内的保暖和通风工作。     

牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立

为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvr C基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。     

桃金娘多糖对肉鸽生产性能和免疫功能的影响

试验探讨了桃金娘多糖对乳鸽生产性能和免疫功能的影响。将160只初生乳鸽和40对亲鸽平均分成4组,对照组补饲普通保健砂,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在普通保健砂中添加1%、2%、3%的桃金娘多糖。结果发现,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的乳鸽体重、日增重、脾脏指数、法氏囊指数、血清PO活性显著高于对照组(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ组血清溶菌酶活性显著高于对照组(P<0.05)。试验表明,桃金娘多糖可提高乳鸽生长性能,促进免疫器官生长发育,提高血清溶菌酶、PO活性,增强机体非特异性免疫;添加浓度以2%～3%为宜。     

广西3株牛源PCV2全基因组克隆与序列分析

为研究广西地区牛源PCV2流行毒株基因组特性和遗传进化情况,运用PCR技术对广西地区采集的210份牛血清进行检测,结果其中35份样品为PCV2阳性。将3份阳性样品进行全基因组克隆与序列分析,分别命名为PCV2/GX-B2(1 769 nt)、PCV2/GX-B131(1 768 nt)、PCV2/GX-B132(1 767 nt)。同源性显示与猪DK1980PMWS-free株同源性最低(94%),与牛源的Buffalo2株同源性最高(98.6%)。遗传进化分析,3株牛源PCV2毒株均属于PCV2d基因型。本研究报道了PCV2在我国广西地区牛群中的感染情况,并发现广西地区牛群中PCV2的主要流行基因亚型为PCV2d。     

牛支原体P48蛋白及其片段的表达、纯化及间接ELISA检测方法的建立

为了建立一种快速、特异、敏感的检测牛支原体血清抗体的方法,对牛支原体(M.bovis)P48膜蛋白基因进行密码子优化,并在编码基因两端加入酶切位点。利用生物学软件对P48蛋白进行抗原位点和亲水性分析,选择P48蛋白的主要抗原表位区和亲水性区域以及全基因进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定及反应原性分析。结果显示,表达的P48全蛋白、28～185、221～455位氨基酸区域蛋白均能与牛支原体阳性血清发生特异性反应,P48(221～455)效果最好。采用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化,并基于纯化的P48(221～455)蛋白建立了一种间接ELISA检测方法。该方法组内及组间变异系数均小于7%,重复性较好。临床样本检测结果表明,建立的检测方法符合率较高。     

沙门菌非编码小RNA RyhB研究进展

非编码小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是一类基因组中被转录但不翻译成蛋白质的RNA分子,可在转录后水平调控基因表达。与蛋白质介导的调控系统不同,当细菌遇到不利的生长环境时,sRNA介导的调控可对环境变化做出快速应答。沙门菌RyhB-1和RyhB-2是两种相似性较高的sRNA,通过碱基互补配对方式,在调控因子作用下共同或单独调控靶基因表达。铁匮乏时,RyhB-1和RyhB-2可促进沙门菌摄取铁元素、限制胞内非必需含铁蛋白生成以及加快铁硫蛋白的储存,是沙门菌在转录后水平调控铁稳态的主要元件。此外,当沙门菌遭遇氧化应激、缺氧或酸性环境等不利环境胁迫时,RyhB可分别控制活性氧自由基的生成、平衡硝酸盐等无机物稳态、调节细菌运动性以及沙门菌毒力等应对环境变化。本文就沙门菌RyhB生理特征及其调控机制和功能进行阐述,以期为后续沙门菌RyhB的研究提供指导信息。     

猪圆环病毒3型与猪圆环病毒2型二重PCR检测方法的建立

为建立同时检测PCV3和PCV2的二重PCR方法,分别以PCV3和PCV2基因组的保守区域设计2对特异性引物,片段大小分别为649,295 bp。将反应条件进行优化,构建PCV3和PCV2的二重PCR检测方法。检测结果表明该方法能特异性扩增PCV3和PCV2,且无法扩增其他猪常见病毒;PCV3和PCV2的最低检出限分别为508,412 copies/μL。临床样品检测结果显示,PCV3和PCV2阳性率分别为2.1%(3/145),62.1%(90/145),PCR产物经测序证实为PCV3。本研究建立的二重PCR方法具有速度快、特异性强和灵敏度等优点,可以用于PCV3和PCV2的检测和流行病学调查。     

广西片形吸虫中间宿主—小土窝螺线粒体rrnL基因遗传多态性研究

为研究广西小土窝螺不同地理株线粒体大亚基（large subunit ribosomal rRNA,rrnL）基因的遗传多态性,对广西大片吸虫6个流行地区96个小土窝螺样品的rrnL基因进行PCR扩增,通过单链构象多态性（single strand conformation polymorphism,SSCP）技术筛选出具有代表性的样品进行克隆、测序,并用DNAStar 5.0及MEGA 4.0软件加以比对分析。结果显示,6个地区小土窝螺rrnL基因PCR扩增长度约500 bp,在长度为273 bp的序列中检测到15个变异位点,占核苷酸总数的5.49%。百色、南宁和桂林3个地区相同地理株间存在较大的遗传差异。种系发育分析表明,线粒体rrnL基因在一定程度上不是研究小土窝螺种群遗传变异的良好分子标记。本研究为阐明片形吸虫中间宿主—小土窝螺的种群遗传关系提供了基础数据。     

非典型猪瘟病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒(atypical porcine pestivirus virus,APPV)全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模板优化反应条件,建立了检测APPV的特异性荧光定量PCR方法。结果显示,建立的荧光定量PCR方法C_t值与标准品在1.49×10~1～1.49×10¹⁰ copies/μL呈现良好的线性关系,相关系数为R^20.999,斜率为-3.442,扩增效率为95.207%。该方法与PCV2、PRV、PRRSV、PPV及CSFV基因组均无交叉反应,敏感性比常规PCR高出1 000倍,组内和组间重复试验变异系数均小于2%。对临床采集的20份疑似感染APPV的样品进行检测,结果显示应用所建立的荧光定量PCR成功检测到3份APPV阳性样品,而常规PCR仅检测到1份,表明所建立的荧光定量PCR比常规PCR灵敏度更高。本试验所建立的APPV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对APPV早期诊断及感染进行定量分析检测。