基于AFLP分析的蚕豆DNA提取方法

蚕豆是高蛋白含酚类物质较多的作物,为了提取适于蚕豆AFLP分析的高质量DNA,采用改良CTAB法,以β-巯基乙醇和PVP抗氧化剂浓度为因素进行了试验。结果表明,用改良的CTAB法提取的蚕豆DNA质量较好,纯度高,OD260/OD280平均值为1.915,变幅在1.81~2.08之间,绝大多数集中在1.9左右。β-巯基乙醇和PVP对蚕豆DNA纯化具有替代作用,其中在CTAB提取液中加入1%β-巯基乙醇和0.5%的PVP或直接加入1%PVP后,提取的DNA纯度较高,OD260/OD280平均值分别为1.868、1.865,而且电泳谱带最清晰,最适于AFLP技术的要求。     

适于AFLP分析的核桃幼叶DNA提取方法

以核桃幼叶为材料,采用改良CTAB法对核桃DNA提取进行了研究。经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,在CTAB提取液中添加3%PVP40、50mmol/Lβ-巯基乙醇和10mmol/LNa2S2O5,能得到高纯度的总DNA,OD260/OD280在1 8～2 0之间,蛋白、多糖、RNA等去除较彻底,适于AFLP分析。     

黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究

［目的］提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。［方法］以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。［结果］DNA 模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB 提取法可用于黄瓜AFLP 分析,形成清晰的AFLP 指纹。优化的酶切连接体系为：以37 ℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200 ng,预扩增时Taq酶用量为0.5 U/20 μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。［结论］为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。     

适于AFLP分析的柿树DNA提取方法研究

对柿基因组DNA的提取方法进行了研究,结果表明,采用提取液中含100mmol/LTris-HCl(pH8 0),20mmol/LEDTA,1 4mol/LNaCl,2%CTAB,1%PVP-40,10mmol/LNa2S2O5及100mmol/Lβ—巯基乙醇(用前加入)的改良CTAB法,可有效去除单宁、酚类、色素等,提取的柿叶片DNA质量和纯度较高,可用于AFLP分析。     

稻水象甲AFLP分析中基因组DNA提取方法的研究

为适宜AFLP分析的昆虫基因组DNA提取提供参考,应用SDS法和异硫氰酸胍法对鞘翅目昆虫稻水象甲的无水乙醇浸泡标本进行基因组DNA提取,并对两种方法进行比较。结果表明,异硫氰酸胍法提取的基因组DNA浓度高、纯度好,电泳带型清晰完整,适合于稻水象甲AFLP分子标记研究。     

适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法

[目的]研究适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法,为冬季无法获得幼叶和其他幼嫩材料时从事桃基因组研究打下了基础。[方法]以8种野生桃冬季1年生休眠枝的韧皮部为试验材料,采用改进的CTAB法提取基因组总DNA,与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析,并进行了AFLP验证分析。[结果]从野生桃韧皮部提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,其AFLP分析条带清晰,多态性好。[结论]该法提取的野生桃韧皮部基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

一种快速高效适于柑桔AFLP分析的DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了柑类、桔类、橙类及部分柑桔杂交实生后代等120多个品种的基因组,结果表明:该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8～1.9,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,DNA的纯度和质量能满足AFLP分析要求.     

适于AFLP分析用的荔枝DNA提取方法

A：F7ll,（AJnpMedfraglnntlengthhorphism）具有共显性表达,不受环境影响,无复等位效应,带纹丰富,DNA用样量少,灵敏度高,快速高效,重复性好等优点．AFLP被认为是最有效的分子标记方法,近年来发展很快,在芒果、愕梨（Reteretal,1995）等果树上均有研究．然而有关荔枝Alllil,分析却少见报道．A：FIP反应程序主要包括模板DNA制备,酶切片断及凝胶电泳分析3个步骤,其中高分子组成基因组DNA的成功制备和避免部分分解是AFLP成功的关键．传统的DNA提取方法包括以下几种：①碱法;②0？A：II;③SDS法．其中碱法多用于…     

一种快速高效适于橡胶树叶片AFLP分析的DNA提取方法

以近200个巴西橡胶树种质材料（品种及无性系）幼嫩叶片为材料．采用改良的cTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,DD260／DD280的比值均为1．8～2．0,1％琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,无降解现象,KNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析（引物EcoRI-TA／MseI—CTT）条带清晰,多态性好,说明此方法提取的巴西橡胶树幼嫩叶片基因组总DNA较适于AFLP分析。     

梅花基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS DNA提取方法从梅花的嫩叶和老叶中提取获得总DNA .所得DNA样品的OD2 6 0 OD2 80 值在1 7～ 1 9之间 ,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且得率高 .该体系对原提取程序作了多处简化 ,使操作简便、快捷、高效 ,适合于梅花DNA提取 ,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂 ,可被限制性内切酶MseⅠ和EcoRⅠ完全酶切 ,适合AFLP PCR反应应用 ,得到清晰的指纹式样 .     

黄瓜叶片DNA的提取及AFLP分析体系的建立

以黄瓜叶片为研究材料提取基因组DNA并进行了AFLP扩增。对影响AFLP分析体系的关键因素进行了比较和优化,探索出适宜黄瓜的DNA提取方法,并建立了AFLP分析体系,得到了较为清晰可辨的AFLP指纹图谱,为进行黄瓜的遗传多样性分析、遗传图谱构建和基因定位等研究奠定基础。     

扩增片段长度多态性在蔷薇基因组DNA检测中的应用

采用单酶切和双酶切AFLP技术分别对5种不同蔷薇品种基因组DNA的遗传多态性进行了检测,比较了2种方法的多态性比率。单酶切采用10条人工设计的与接头序列相识别的AFLP选择性引物,用PstⅠ酶切,共获得108个AFLP标记,片段大小在100~2000 bp,得到33个多态位点,多态性位点百分率为30.56%;双酶切采用25对双酶切AFLP引物,在50~600 bp扩增出清晰条带658条,得到182个多态位点,占总扩增带的27.6%。对多态性片段进行统计,计算出不同品种间的相似系数和遗传距离。结果表明:硕苞蔷薇同其它4种蔷薇的遗传距离偏远,且其它四种蔷薇的遗传距离均较近,这与蔷薇品种来源和培育史相符。该研究表明两种AFLP标记均可用于蔷薇品种基因组DNA的遗传多态性的检测,准确评价尚待和其它品种对比研究后确定。     

一种木本果树基因组DNA提取方法研究

研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组ＤＮＡ提取方法．其改良策略是：在细胞核被裂解前去除细胞质中的多酚类等杂质，防止多酚类物质被氧化，从而排除多酚类等杂质的干扰．利用这一方法提取的柑桔、枇杷、梨、苹果、湖北海棠、桃、樱桃等７种果树基因组ＤＮＡ均能被限制性内切酶完全消化，获得理想的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果，也可作为ＰＣＲ模板应用，成功地进行特异性基因扩增和ＲＡＰＤ．     

玫瑰基因组AFLP反应体系的建立和优化

以玫瑰(Rosa rugosa)叶片为材料,利用改良的CTAB法,提取到了高质量的玫瑰叶片DNA,并建立了37个玫瑰品种和5个蔷薇品种的AFLP银染反应体系,首次在玫瑰DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程取得了成功,得到了清晰的玫瑰品种的AFLP指纹图谱,为玫瑰基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究奠定了理论基础.     

适用于AFLP分析的泡桐DNA提取方法研究

分别采用3种方法提取了豫杂一号泡桐组培苗叶片DNA,并对其得率和质量进行了检测.结果表明,DNAkit,CTAB-Ⅰ和CTAB-ⅡI法提取DNA的得率分别为0.250,0.284,0.312 mg·g~(-1);CTAB法提取的DNA片段大于DNA kit法;利用CTAB-Ⅱ法得到的DNA可被EcoRI,MspⅠ和Hpa Ⅱ完全酶切,该DNA经AFLP-PCR扩增电泳后,产物带型清晰,稳定,重复性好.CTAB-Ⅱ法为泡桐DNA提取的最佳方法.