沙棘叶片总RNA提取方法的比较研究

沙棘叶片富含多糖、多酚、蛋白质、类黄酮等次生代谢物质,用普通方法提取沙棘叶片总RNA时很难将其去除。本试验以沙棘叶片为材料,比较研究了改良Trizol法、RNAsimple总RNA提取试剂盒(离心柱型)、RNAplant Plus总RNA提取试剂以及RNAplant Plus总RNA提取试剂改良法等4种方法对沙棘叶片总RNA的提取效果。结果表明,RNAplant Plus总RNA提取试剂改良法能从沙棘叶片中提取纯度较高的RNA,凝胶电泳显示条带清晰完整,鲜叶平均得率为298.1μg/g,D260 nm/D280 nm比值为1.79,用该方法提取的沙棘叶片总RNA可以用于后续的分子生物学研究中。     

新疆巴旦木花药总RNA的提取

[目的]建立一种有效的巴旦木花药总RNA提取方法,为巴旦木花粉SFB基因克隆和自交不亲和机制研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法从巴旦木(Amygdalus communis L.)花药中提取高质量的总RNA.[结果]该方法获得的巴旦木花药总RNA完整性好、无多糖和蛋白质的污染,产量较高(鲜花药为283.44 μg/g),OD260/OD280在1.89～1.99,OD260/OD230>2.0.提取的巴旦木花药总RNA反转录成cDNA,以SFB(S-haplotype-specific F-box gene)基因简并引物PCR扩增,获得了目的片段.[结论]改良的CTAB法是一种简单、快速有效的巴旦木花药总RNA提取方法,提取的花药总RNA能够满足巴旦木进一步的分子生物学研究.     

荔枝果肉总RNA的提取及实时定量PCR分析

荔枝果肉因含糖量高、水分大和含较高活性的氧化酶而难以提取高质量的总RNA。以妃子笑荔枝不同发育期果肉为试材,经过多种提取方法比较和改进,发现市售RNA提取试剂盒改进提取步骤后均可快速得到质量较高的总RNA,果肉总RNA完整性好、质量高,平均浓度都在20μg/g以上,符合进一步分子生物学试验的要求。以反转录后得到的cDNA为模板,进一步的实时定量PCR反应表明以未纯化的RNA反转录的cDNA为模板没有信号,而经纯化后即可得到有规律的基因表达。     

适于cDNA-AFLP的黄瓜幼叶总RNA快速高效提取方法

为了快速高效地提取黄瓜幼叶总RNA,满足于cDNA-AFLP实验的要求。对Trizol试剂提取总RNA的方法进行了改进,所提RNA经琼脂糖电泳检测,其28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,每0.1g幼叶可获得RNA 100~150μg,产率高;经反转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足反转录和cDNA-AFLP对RNA质量和数量的要求。     

不同提取方法在橡胶树总RNA提取中的应用研究

总RNA的纯度和完整性对橡胶树分子生物学实验至关重要。为探索更适合橡胶树总RNA的提取方法,本文以巴西橡胶树无性系热研7-33-97叶片为试材,利用凝胶电泳、紫外吸光值测定、RT-PCR检测等方法对CTAB-LiCl法和CTAB-NaAc法提取的总RNA进行比较。结果显示:CTAB-LiCl法提取RNA不仅耗时产率低,且RNA溶液中的Li+和Cl-影响反转录效率。CTAB-NaAc法提取叶片的总RNA经DNaseⅠ处理后凝胶电泳条带完整,产率高,无DNA污染;A260/A280比值为2.03,A260/A230比值为1.96;反转录的cDNA经PCR检测质量较好。另用CTAB-NaAc法对橡胶树的花、树皮、胚、根进行总RNA的提取,均能得到较高质量的总RNA。     

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB 法、Trizol 法以及EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明：改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol 法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S 条带亮度是18S 条带亮度的2 倍,将其反转录获得的cDNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述：EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。     

黑穗醋栗花中RNA提取方法的比较研究

以黑穗醋栗花为试验材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了Trizol法、硼砂-SDS法、CTAB法、植物RNA提取试剂盒等4种方法提取总RNA的质量和纯度。结果表明,利用硼砂-SDS法提取的RNA,28S和18S两条带型清楚,两条带之间无弥散现象,且纯度最高,D260/D280达到2.06,经计算得出总RNA产率达61.60μg·g-1,反转录条件下可得500～1000bp之间的弥散cDNA条带,进一步证明硼砂-SDS法提取得到的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的需要。     

木耳总RNA提取方法研究

为了获得木耳总RNA理想的提取方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以木耳菌丝为试验材料,采用了CTAB法、RNA prep pure Plant Kit试剂盒和 Trizol法3种方法提取木耳总RNA。结果表明3种方法均能从木耳菌丝中提取分离到总RNA,然而Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为191,RNA 产率为68264 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于 RT PCR等分子生物学试验研究。     

仙人掌总RNA 提取方法的改进与分析

利用亚硫酸钠分别与TRIzol试剂、RNA plant plus Reagent试剂、BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂、艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂和OMEGA Plant RNA试剂结合的方法,均可获得高质量的仙人掌茎总RNA。反转录成cDNA,RT-PCR结果显示,5种方法提取的总RNA反转录后均能特异性扩增到matK基因。使用TRIzol试剂盒、RNA plant plus Reagent试剂盒和艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA质量相对较高,在cDNA以1∶100稀释时能检测到matK基因;而使用BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂盒或OMEGA Plant RNA试剂盒时,灵敏度稍低,在cDNA以1∶10稀释时,能检测到目的基因。利用亚硫酸钠结合不同植物总RNA提取试剂盒进行比较研究,为后续制备仙人掌茎高质量cDNA文库及其分子生物学研究奠定基础。     

三色堇花瓣总RNA 3种提取方法的比较

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测.结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高.3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260nm/D280nm在1.83 ～2.03之间.以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验.     

两种铁皮石斛总RNA提取方法的比较研究

 铁皮石斛是我国重点保护药材,因其富含多糖及次生代谢物,用普通的方法难以从叶中提取到能满足构建全长cDNA文库等分子生物学实验对高质量RNA需要的总RNA。分别通过对异硫氰酸胍法和CTAB法进行改良。异硫氰酸胍法：往裂解液中加入PVP,通过PVP去除多酚;用56℃热水水浴5min加速组织细胞裂解;抽提时间由原来15 min缩短为5min;根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加裂解液。CTAB法：根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加CTAB裂解液;用LiCl对RNA进行选择性过夜沉淀;灵活处理,适当增大LiCl浓度。结果表明用改良后的2种方法均可提取到总RNA,经对比发现,改良CTAB法提取效果更好,可重复性强,抽取到的RNA更适合于后续的分子生物学实验。     

李果实高质量RNA提取方法的比较和优化

李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA。     

猕猴桃基因组DNA提取的研究

[目的]探讨猕猴桃属基因组总DNA的提取方法。[方法]以富含多糖和多酚次生代谢产物的猕猴桃为材料,比较不同品种在不同方法下的基因组DNA抽提效果,并对不同材料部位、抗氧化剂以及DNA纯化方法等对基因组DNA的获得进行研究。[结论]结果表明,以猕猴桃组培苗的茎部为材料,通过CTAB法,在裂解液中加入1％β巯基乙醇,以及在异丙醇沉淀前加入1／2体积的5mol／LNaCl,所得到的猕猴桃基因组DNA的质量较佳。[结论]该研究为今后猕猴桃分子生物学和基因工程研究奠定基础。     

扁桃基因组DNA提取及RAPD扩增体系的建立

以 13 个扁桃品种幼叶为试材,针对扁桃叶片含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的特点,采用改进 SDS 法,在缓冲液中使用 5 mol/L 的 NaCl并在温浴后加入 1/5 体积的 5 mol/L 的 KAc,置于-20℃冰冻 30min,提取到了高质量的基因组 DNA,完全能够用于 RAPD 扩增。同时,分析了模板 DNA 浓度、Taq DNA 聚合酶、dNTPs 浓度对 RAPD 反应体系的影响,建立了一套适合扁桃基因组 RAPD 分析的技术体系。     

利用改良的CTAB-LiCl法提取甘薯块根RNA

甘薯块根中含有大量的淀粉、酚类化合物、多糖、色素以及纤维等次生代谢物质,严重影响了块根总RNA的提取。本试验对CTAB法进行改良,采用PVPP和β-巯基乙醇去除酚类物质,氯仿/异戊醇去除蛋白质,LiCl过夜沉淀法去除DNA,得到的RNA纯度、完整性以及质量均好。结果表明改良的CTAB法适合甘薯块根RNA的提取。     

6种黔产清热类中草药主要抗氧化成分的含量

为了对开发利用黔产清热类中草药提供参考,用常规方法测定了6种中草药中的总黄酮、多酚及多糖在水和乙醇提取液中的含量。结果表明:6种清热类中草药水提取液中,头花蓼的黄酮含量和多酚含量最高,分别为47.22mg/g和34.73mg/g;多糖含量以龙胆草的最高,为226.04mg/g。醇提取液中,黄酮含量最高的是头花蓼,为27.32mg/g;多酚含量最高的是黄柏,为28.24mg/g;多糖含量最高的是龙胆草,为22.89mg/g。6种中草药中,黄柏、头花蓼和栀子提取黄酮时宜用水作提取溶剂,射干、板蓝根和龙胆草提取黄酮时宜用乙醇作提取溶剂;除板蓝根外,黄柏、射干、头花蓼、龙胆草和栀子提取多酚时宜用水作提取溶剂;6种中草药提取多糖均宜用水作提取溶剂。     

富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法

半日花(Helianthemum soongoricum)属强旱生植物,其组织富含多糖和多酚等次生代谢物质,采用常规CTAB和SDS等方法提取的半日花基因组DNA由于含有多糖等杂质,无法进行PCR扩增和限制性酶切等试验,为此,在CTAB法的基础上进行了改进。第1步通过向植物组织CTAB提取液中添加高盐和乙醇来沉淀部分多糖,第2步将获得的DNA粗提液,经过CTAB分离溶液沉淀、NaCl溶解、乙醇沉淀等方法,可有效去除半日花组织中的残余多糖等杂质,提取DNA的质量和纯度经凝胶电泳条带清晰、无降解、无多糖等杂质。PCR扩增和限制性内切酶的结果表明,通过改进的方法所获得的DNA,可以进行PCR扩增试验,扩增条带清晰,基因组DNA能被限制性内切酶完全酶切,该方法为后续半日花分子生物学研究奠定了重要基础。     

Folin-Ciocalteu法测定昭通葡萄及其葡萄酒总酚含量

[目的] Folin-Ciocalteu法测定葡萄总酚含量,为昭通葡萄生产及其酿制工艺提供科学依据.[方法]采用甲醇作溶剂,超声提取葡萄总酚,以Folin-Ciocalteu试剂和50 g/L Na2CO3溶液处理,在765 nm处测其吸光度.[结果]以没食子酸为标准,质量浓度在1～40mg/L范围内与吸光度线性关系良好（r =0.999 5）.平行测定（n=6）葡萄总酚含量,RSD在1.1％ ～1.6％,对葡萄和葡萄酒的加标回收率试验结果分别为98.8％、98.3％,RSD依次为1.8％、2.0％.[结论]该法操作简便,重复性好,结果准确可靠,可用于测定葡萄及葡萄酒中总酚含量.     

果胶酶法提取叶下珠黄酮的工艺优化

[目的]优化果胶酶法提取叶下珠（Phyllanthus urinaria L.）中总黄酮的工艺。[方法]以蒸馏水为提取剂,在提取过程中加入果胶酶,以黄酮提取率为指标,采用正交试验考察提取温度、pH值、料液比、果胶酶浓度和提取时间对叶下珠黄酮得率的影响。[结果]采用果胶酶法提取叶下珠中黄酮的最佳工艺条件为：以pH值为5的蒸馏水为提取剂,料液比1∶30（W/V）,果胶酶浓度为2.0g/L,在温度为55℃条件下提取150min。在此优化条件下,叶下珠中黄酮的提取率较高,为1.469%。[结论]该研究可为进一步开发利用叶下珠植物资源提供科学依据。     

沙棘果渣中黄酮的微波干法提取的研究

[目的]探索沙棘果渣中黄酮的绿色提取新方法。[方法]以9.4%二甲基酰胺（DMF）为传热介质,沙棘果渣在微波辐射下,经酸水解成黄酮苷元,以槲皮素为标准品,用紫外和高效液相色谱检测。[结果]此法能高效方便地提取出沙棘中的黄酮,提取率为0.018%。[结论]微波提取沙棘果渣中黄酮工艺简单易行,生产成本较低,采取此方法提取黄酮具有广阔的开发前景。