细胞培养过程中白色念珠茵污染的防控

为探讨大扶康防控细胞培养过程中白色念球菌污染的可行性,采用不同浓度的大扶康共同培养,观察其抑制白色念珠菌的效果,及对小鼠成肌细胞C2C12生长情况的影响。结果:采用300μg/ml大扶康防控效果最佳,毒性作用小,对C2C12细胞的生存率无明显影响。采用30μg/ml大扶康与20μg/ml硫酸阿米卡星 50μg/ml头孢他啶配伍的方法可有效预防细胞培养过程中的真菌污染。结论:采用大扶康可有效控制细胞培养中白色念珠菌的污染。采用大扶康与硫酸阿米卡星 头孢他啶配伍的方法可有效预防细胞培养过程中的真菌污染。     

细胞体外培养过程中霉菌污染的预防

在污染的细胞中加入含青霉素(100单位/mL)、链霉素(100单位/mL)、两性霉素(10 μg/mL)的培养液,隔天换液,如此重复2次～3次,而且用饱和硫酸铜擦拭和过氧乙酸熏蒸细胞培养箱及细胞培养室,霉菌的污染可得到有效控制,并总结出一套简单可行的预防霉菌污染方法.     

白色念珠菌分子生物学分型方法研究进展

白色念珠菌是一种致病性酵母真菌,可引起人畜口腔、上呼吸道、阴道黏膜及全身性感染。随着抗真菌药物的长期大量使用,真菌的耐药性越来越严重。临床调查结果表明,白色念珠菌感染在真菌感染病例中跃居第2位。正确鉴定与分类有利于对白色念珠菌感染进行及时诊断、预防和治疗。文章主要对白色念珠菌的分子生物学分型方法进行综述。     

植物精油对鸽源白色念珠菌的体外抑菌作用及肉鸽攻毒保护试验

通过研究茶树精油、丁香精油、百里香油、柑橘油、小茴香油和艾叶精油对白色念珠菌的体外抑制作用,筛选出抑菌效果显著的植物精油组方。采用牛津杯法检测上述植物精油对白色念珠菌(ATCC10231和临床分离株)的抑菌效果;微量肉汤稀释法检测植物精油对白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC);观察植物精油组合处理鸽源白色念珠菌对细胞形态的影响;评价植物精油组合防治鸽子白色念珠菌感染的效果。结果显示:柑橘油对白色念珠菌的抑菌效果显著,对白色念珠菌ATCC10231及鸽源A、B和C型白色念珠菌的MIC分别为0.625、0.625、0.625和1.25μL/mL(v/v)。0.8%柑橘油和百里香油组合处理白色念珠菌可致菌丝破裂,胞内物质流出,假菌丝断裂。将0.8%柑橘油和百里香油组合饲喂攻毒患病的肉鸽,解剖嗉囊没有发现白色念珠菌病典型症状。结果表明,0.8%柑橘油和百里香油组合具有效防治肉鸽白色念珠菌病的应用潜力。     

维生素C对酮康唑抑制白色念珠菌的影响研究

为研究酮康唑治疗畜禽真菌感染过程中能否给与维生素C辅助治疗,体外测试了添加维生素C后白念珠菌对酮康唑的敏感性。结果发现,维生素C能显著抑制酮康唑对白色念珠菌的敏感性,为科学治疗畜禽机会性真菌临床感染提供了依据。     

白头翁素对RIMEC分泌功能的影响

目的：探讨白头翁素对细菌脂多糖（LPS）诱导的肠黏膜微血管内皮细胞（RIMEC）内皮素（ET-Ⅰ）和一氧化氮（NO）分泌增加的影响.方法：以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞（RIMEC）为试验模型,ET-Ⅰ测定采用酶联免疫技术,NO测定采用还原酶法.结果：白头翁素10 μg/ml、5 μg/ml、1 μg/ml预孵2 h加入1 μg/ml的LPS刺激12 h后.白头翁素组1 μg/ml ET-Ⅰ分泌显著低于LPS组（P＜0.05）,5 μg/ml、10 μg/ml白头翁素组ET-Ⅰ分泌极显著低于LPS组（P＜0.01）;10 μg/ml、5 μg/ml、1 μg/ml白头翁素组NO分泌极显著低于LPS组（P＜0.01） 结论：白头翁素可以下调LPS诱导的ET-Ⅰ和NO分泌增加,这可能是白头翁的抗炎机制之一.     

溴莫普林对几种动物病原菌的体外抗菌作用

采用试管二倍稀释法测定了溴莫普林 (BDP)对禽大肠杆菌 O78、沙门氏菌 C79-13 、金黄色葡萄球菌 2 80 0 1的最小抑菌浓度分别为 0 .313μg/ml、80 μg/ml及 6 40 μg/ml。BDP对病原菌的 MIC与 TMP相同或略优 ,与其它抗菌药物的联合抑菌作用和 TMP相似。     

肉仔鸡鹅口疮的诊断与治疗

白色念珠菌属于真菌的一种,它所引起的病理变化在禽类上俗称鹅口疮,也称消化道真菌病.白色念珠菌本身不会对鸡造成伤害,但当其在生长繁殖过程中产生和释放的毒素引起中毒反应,影响正常生长发育和免疫抑制,严重者可致鸡只死亡.     

月桂酸单甘油脂(GML)对致病性念珠菌生物被膜的作用

采用微量稀释法测定月桂酸单甘油酯(GML)对致病性念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),利用时间-抑菌曲线分析GML对念珠菌的动态抑菌作用;通过XTT法测定GML对生物被膜形成早期1～4 h黏附阶段以及成熟生物被膜的抑制作用;采用Sport assay结合激光共聚焦显微镜检测其对念珠菌生物被膜细胞活性和形态结构的影响,进而显微镜观察不同浓度GML作用不同时间抑制菌丝和芽管生成的程度,以及对生物被膜细胞表面疏水性的影响;最后用分子生物学qRT-PCR检测白色念珠菌生物被膜形成相关基因ALS3、HWP1、ECE1、ERG11及克柔念珠菌ERG11在不同处理组中表达水平的变化。结果显示,GML对克柔念珠菌的MIC为15.625 mg/L,MFC为31.25 mg/L,对白色念珠菌的MIC为250 mg/L,MFC为500 mg/L;GML作用有效延长了真菌生长的延滞期;对不同生长阶段(前、中、成熟期)生物被膜均有显著抑制作用,克柔念珠菌生物被膜的最低黏附抑菌质量浓度(SMIC_(50))为62.5 mg/L,白色念珠菌SMIC_(50)1 000 mg/L;GML不仅可以抑制生物被膜的形成,还可以破坏成熟生物被膜的维持,有效降低生物被膜的厚度和活力;并且对菌丝的形成及芽管长度具有明显的抑制作用,显著降低生物被膜细胞表面疏水性;白色念株菌ALS3、HWP1、ECE1、ERG11和克柔念珠菌ERG11基因均出现了不同倍数的下调趋势。结果表明,GML对浮游态和生物被膜态白色念珠菌和克柔念珠菌具有较好的抑制作用,尤其对克柔念珠菌抑菌效果明显。GML可以通过降低黏附、形态转换和杀真菌作用来抑制致病性念珠菌生物被膜的形成,还可以破坏成熟生物被膜的维持,有效降低生物被膜的厚度和活力。     

大规模细胞培养过程中污染的类型及控制策略探讨

细胞污染是动物细胞培养技术中面临的主要问题。本文从细胞培养过程中污染产生的来源、种类及控制策略等方面对规模化培养过程中常见的污染类型及防控手段进行综述,为提高细胞培养水平、防治细胞培养过程中可能出现的污染状况及研究新的去除污染的手段提供新的思路,为有效减少和控制污染、降低损失,提高生物制品的质量奠定基础。     

牛乳中白色念珠菌和近平滑念珠菌双重定量PCR检测方法的建立

为建立生牛乳中白色念珠菌和近平滑念珠菌的快速检测方法,根据GenBank已公布的基因序列分别设计2种念珠菌的种特异性引物,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测目标菌的基因组DNA,并进行特异性、敏感性和重复性试验,用该方法对含有目标菌的生牛乳样本进行检测。结果表明,该方法特异性强,与对照菌株光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌和烟曲霉等病原真菌无交叉反应;灵敏度高,对白色念珠菌和近平滑念珠菌的最低检出量均为10 CFU/mL;重复性好,T_m值和Ct值变异系数分别在0.1%和2.5%之内。该方法操作简便、耗时短,2 h～3 h即可完成整个检测过程。建立的方法能用于生牛乳中白色念珠菌和近平滑念珠菌的一次性快速、准确和定量检测。     

硫酸阿米卡星可溶粉对人工诱发鸡大肠杆菌和沙门氏菌的疗效试验

硫酸阿米卡星可溶性粉属于氨基糖苷类药物,具有抗菌谱广、抗菌效果强等特点,可有效防治鸡大肠杆菌和沙门氏菌病.本试验通过人工诱发鸡大肠杆菌和雏鸡沙门氏菌病为病理模型,进行了硫酸阿米卡星可溶性粉内服的药效学观察,为在临床上有效安全使用提供了科学依据.     

新蚕药蝇僵灵的防治效果试验

蝇僵灵是一种能防治多化性蚕蝇蛆和家蚕真菌性病害的新型多功能蚕药。对多化性蚕蝇蛆卵、蛆的最低有效杀灭浓度为 5 0 0倍 ;对家蚕真菌性病害病原孢子最低有效防治浓度为 6 0 0倍。生产实用浓度 375倍 ,对多化性蚕蛆蝇及真菌性病害的防治效果均达 95 %以上。对家蚕的半中毒剂量 (KD50 ) 4龄为 0 746 4μL/头或 0 92 75 μL/g,5龄 3 9390 μL/头或 1 886 0 μL/g ;全部中毒最低剂量 (MED) 4龄为 1 6 0 0 0 μL/头或 2 0 2 0 0 μL/g ,5龄为 12 80 0 0 μL/头或 6 0 95 2 μL/g ,最大安全剂量 (MPD) 4龄为 0 2 0 0 0 μL/头或 0 2 5 41μL/g,5龄为 0 80 0 0 μL/头或 0 333 3μL/g。蝇僵灵原药可自然贮放 2 5a,稳定性良好     

EDTA对氧氟沙星抗鸡源大肠杆菌活性的影响

为了解EDTA对氧氟沙星抗鸡源大肠杆菌活性的影响,采用2倍稀释浓度琼脂平板法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)值.结果显示,加入EDTA后中心浓度由0.5 μg/ml变为0.125 μg/ml,最低检测限由0.125 μg/ml降到0.03125 μg/ml.表明EDTA增大了氧氟沙星抑制大肠杆菌的抑菌圈直径,能够增强氧氟沙星的抗菌活性,可以提高氧氟沙星在组织中检测的灵敏度.     

基于天蚕素A和胡蜂毒素的杂合肽设计及活性鉴定

为了进一步改善胡蜂毒素（mastoparan,MP）的抗菌、抗肿瘤活性并减少细胞毒性,本研究通过分子杂合方法对其进行改造,并初步鉴定设计的杂合多肽的生物活性。以天蚕素A的N-端1-8序列片段和胡蜂毒素的保守序列为模板进行杂合设计,获得一条新型杂合肽KL-21。以胡蜂毒素MP-L作为参照,采用生物信息学方法、微量倍比稀释法、杀菌动力学方法、溶血试验、CCK-8法分别对KL-21和MP-L进行理化参数分析、结构预测、最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）测定、杀菌动力学研究、溶血活性测定及肿瘤细胞毒性试验。结果表明,KL-21可以在短时间内迅速杀灭细菌,对革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）和阴性菌（大肠杆菌）的MIC均为4~8 μg/mL,MBC均为8~16 μg/mL;KL-21对真菌（白色念珠菌）的最小MIC为32 μg/mL,MBC为64 μg/mL。兔红细胞溶血试验表明,KL-21在128 μg/mL时溶血活性仅为20%,较MP-L的溶血活性明显降低。细胞毒性试验表明,KL-21对肺癌细胞A549具有良好的抑制作用,16 μg/mL的体外抑制率达86%。研究表明,新型杂合肽KL-21较MP-L的抗菌和抗肿瘤活性有较大提高,细胞毒性显著降低,可以作为先导肽进一步研究和开发。     

雏鸡念珠菌病的诊治

雏鸡念珠菌病是由于鸡舍管理条件较差,致使广泛分布于自然界中的念珠真菌在空气潮湿和高温的条件下大量增殖,污染饲料和垫料,从而使发霉的饲料和垫料引发雏鸡消化道上部感染念珠真菌后发生的一种真菌性传染病.严重时发病率达70%以上,死亡率达10%,给养鸡业造成一定的经济损失.2006年6月接到凉州区某养鸡场发生雏鸡念珠菌病疫情要求出诊的请求,经现场采取综合防控措施,有效的控制了本病的发生,取得了较好的防治效果.     

华南虎皮肤成纤维细胞的分离培养

应用酶消化法（胶原酶消化：0.1%胶原酶Ⅰ型＋0.1%BSA;胰蛋白酶消化：0.25%胰蛋白酶＋1mM EDTA）和植块法从华南虎皮肤组织中分离成纤维细胞。研究结果表明,植块法较适合分离华南虎皮肤成纤维细胞,胶原酶消化法次之,而胰蛋白酶消化法不宜用于分离华南虎皮肤成纤维细胞。DMEM/F12（1：1）培养基＋10%FCS＋10 ng/ml EGF＋5μg/ml胰岛素＋100 IU/ml青霉素＋100μg/ml链霉素组成的培养体系适用于华南虎皮肤成纤维细胞的体外培养。     

理化方法对饲料中T-2毒素的解毒效果

过去常采用化学和物理方法对毒性真菌污染的饲料进行解毒,并用实验动物应用皮肤划痕和饲喂试验检测解毒效果。我们采用了某些物理因素和化学物质对T-2毒素的解毒效果进行了研究。 检测的含T-2毒素污染的饲料,是用421/1株拟分支镰孢真菌人工污染的大麦粒(含T-2毒素量为150、1020～2240mg/kg)和按30ml/kg添加结晶T-2毒素溶液的大麦粒。     

舒安林对鸡大肠杆菌病药效试验

为验证舒安林对耐药大肠杆菌引起的鸡大肠杆菌病的疗效 ,选取了产酶耐药大肠杆菌进行了体内及体外抑菌实验。结果表明 ,舒安林对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为 2μg/ ml和 4μg/ ml,而氨苄青霉素对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的最小抑菌浓度则分别为12 8μg/ ml和 2 5 6 μg/ ml,且一定剂量的舒安林对人工诱发鸡大肠杆菌病有较好的疗效 ,可显著降低病鸡的死亡率 ,提高增重 ,其疗效明显优于氨苄青霉素     

支原体对细胞培养污染的研究概况

支原体是自然界中存在的最小、最简单的原核生物,大小介于细菌和病毒之间,可通过滤菌器,对许多抗生素有抗性,是细胞培养污染中一种常见的微生物.被支原体污染后的细胞培养物,引起细胞形态学和功能的改变,导致用细胞基质制备的生物制品报废,且很难清除.一旦发生污染,就意味着试验的失败,造成巨大的人力、物力、财力的浪费.从支原体对细胞培养物污染后造成的危害及对支原体污染的预防、检测、清除等的研究进展进行论述,为细胞支原体污染的防控提供依据和手段.