花生TRAP-PCR分析体系的建立

目标区域扩增多态性(target region amplified polymorphism,TRAP)是通过一个依据EST序列设计的固定引物和一个针对外显子或内含子特点设计的随机引物对开放阅读框(open reading frames,ORFs)进行扩增。本研究首次建立了适于花生TRAP分析的PCR扩增体系:在15μl总反应体系中,模板DNA50ng,引物浓度1.0μmol/L,dNTPs浓度0.25mmol/L,Taq DNA聚合酶1U。利用该体系对24个花生品种DNA进行扩增,得到了清晰稳定的条带,且这些条带具有一定的多态性,说明所建立的体系可用于花生遗传多样性分析。     

家猪随机扩增多态DNA最佳反应体系的探讨

在研究江西方猪种的遗传多样性及其系统分类时,对模板浓度和纯度,引物种类和浓度、ｄＮＴＰ浓度,镁离子浓度,温度转换时间及双引物扩增等影响ＲＡＰＤ分析的因素进行了系统的探讨,在此基础上建立了适宜于本实验室研究的最佳ＲＡＰＤ技术体系：２０μＬ反应体系中,含１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ,ｐＨ８．３,５０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ,２．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２,０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ,０．４５μｍｏｌ／Ｌ随     

凹叶厚朴TRAP-PCR体系建立

结合均匀试验与正交试验对影响目标区域扩增多态性—聚合酶链式反应(TRAP-PCR)效果的5个关键因素(DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物及Taq酶)进行优化研究,建立了适用于凹叶厚朴目标区域扩增多态性(TRAP)分析体系。凹叶厚朴TRAP-PCR最优反应体系:总体积25μL,含模板DNA 40 ng,Mg2+1.5 mmol·L-1,dNTPs 0.28 mmol·L-1,固定引物及随机引物0.3μmol·L-1,Taq DNA聚合酶0.75 U。PCR扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,40℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;将退火温度升至50℃,其它条件不变进行38个循环;72℃延伸10 min。利用所得优化体系对16个不同种源凹叶厚朴进行扩增,结果表明该体系效果较好,可应用于凹叶厚朴相关研究。     

棉花DNA提取及优化SSR反应体系的建立和应用

对棉花DNA提取程序和SSR反应体系进行了研究。利用正交设计对模板DNA、引物、Taq酶和Mg^2＋浓度4种成分以3个梯度进行优化和选择,结果表明,最优反应体系为15μL,其中含有：10×Taq buffer 1．5μL、Mg^2＋（25mmol／μL）1．5肛L、dNTPs（25mmol／μL）2．0μL、引物（20pmol／μL）各2．0μL、Taq酶（2．0U／μL）0．15μL、DNA模板（25ng）3．0μL、ddH2O补至15μL。采用建立的反应体系,利用8对引物对3个品种进行扩增,6％的变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测结果显示该体系扩增结果清晰稳定。     

陕西关中棉花黄萎病菌遗传多样性的ISSR分析

【目的】优化棉花黄萎病菌ISSR反应体系,筛选特异性引物,对陕西关中棉花黄萎病菌的分子水平遗传变异及其与地理来源之间的关系进行研究。【方法】用优化好的反应体系和筛选出的引物,对采集自陕西关中6个地区的棉花黄萎病菌和3个参照菌系(新疆和田、陕西泾阳、河南安阳)的亲缘关系进行聚类分析。【结果】优化的反应体系(25μL)为:dNTP、引物的浓度和TaqDNA聚合酶用量分别为150μmol/L,0.5μmol/L,1.5U。筛选到多态性强的引物842和834。在遗传相似系数为0.36处,将16个菌株分为2个遗传类群。【结论】陕西关中棉花黄萎病菌13个菌株与新疆和田、河南安阳菌系的亲缘关系较远,与泾阳菌系的亲缘关系较近,且来源于同一地域的菌株亲缘关系较近。     

绿色棉花再生体系建立的研究

[目的]对农杆菌法介导的绿色棉花茎尖转化体系进行筛选优化,为基因工程辅助彩棉育种提供参考。[方法]以天然绿色棉的茎尖作为受体,采用农杆菌介导的转化方法,筛选绿棉茎尖再生体系的最佳条件。[结果]3日龄的绿棉茎尖为最佳转化外植体;在OD600值为0.5的农杆菌菌液中侵染10 min,同时辅助真空渗透的侵染效果最佳;在茎尖最适培养基MS＋l mg/LKT,pH值5.8上共培养24 h,转至Kan浓度梯度为30-50-70 mg/L的筛选培养基上选择培养,茎尖分化苗阳性率达34.6%,并获得了绿棉9804的Kan阳性苗。[结论]绿色棉花比白色棉花更有利于进行遗传转化。     

棉花黄萎病菌的遗传多样性

阐明了棉花黄萎病的病原菌为大丽轮枝菌及其分类依据。从致病力分化、营养体亲和性分析、DNA分子指纹图谱比对等3个方面,对棉花黄萎病菌遗传多样性的研究进展进行了较为全面的综述。并对棉花黄萎病致病型与DNA分子标记多态性之间不存在显著相关性的原因进行了讨论。     

棉花AFLP技术体系的摸索与建立

对影响棉花AFLP技术体系的多种因素作了探讨 ,得到了一种适于棉花AFLP银染技术的优化体系。该体系中各优化因素为 :①模板DNA浓度为 15 0ng·μL-1;②酶切体系中 ,MseI和EcoRI各加入 3units ,使用NEBbuffer2 ,反应时间为 2h ;③连接最适反应时间为 10h ;④连接产物最适稀释倍数为 10倍 ;⑤预扩增产物最适稀释倍数为10倍。     

建立育繁推一体化棉花良种推广体系的尝试

<正> 在经济体制从传统的计划经济体制向社会主义市场经济体制转变过程中,如何使现有棉花良种繁育推广体系适应新形势的发展,尽快实现种子产业化和农业生产用种优种化目标,更有效地促进棉花增产,是棉花种子工作探讨的重要课题,建立育繁推一体化棉花良种推广体系是必要的。 一、现行体系的现状及存在问题 邯郸市自八十年代以来开始推行以良棉厂为核心,原种场为骨干,良繁区为基础的“厂、场、村、区”     

杜仲SSR-PCR反应体系建立及引物筛选

为了对杜仲种质资源的遗传多样性研究奠定理论和技术基础,采用正交试验设计和单因素分析,建立并优化了杜仲的SSR-PCR反应体系。结果表明,杜仲SSR-PCR最适反应体系为正反向引物(10μmol.L-1)各0.2μL,Taq DNA聚合酶(5 U.μL-1)0.1μL,dNTP(10 mmol.L-1)0.2μL,模板DNA(5～10 ng.μL-1)1.0μL,Mg2+(25 mmol.L-1)0.6μL,10×PCR缓冲液1.0μL,HPLC超纯水6.7μL,总体积10.0μL。同时筛选出了3对多态性有效引物,研究结果证明了微卫星引物在不同物种间的通用性受物种间亲缘关系远近的影响,并初步揭示了杜仲的遗传多样性,表明了微卫星标记在遗传多样性研究上的优越性。     

基因扩增仪温度控制系统

为了满足PCR仪温度控制升降速度快,精度要求高等特点,设计一种基因扩增仪的温度控制系统,它以ARM芯片作为核心,由半导体制冷片、调理模块、驱动模块等组成.系统采用WINCE实时操作系统,用Platform Builder 50及Embedded Visual C＋＋作为软件开发平台,采用时间最优的Bang-BangPID控制算法,开发出完全抢占式控制系统,可较好地完成基因扩增仪的热循环过程.经测试结果显示,该系统能够满足基因扩增仪对升降温度以及精度的要求,具有无污染、无噪音、寿命长、界面友好、性能可靠、响应速度快、硬件可剪裁、软件可扩展等特点.     

高产优质棉花新品种邯郸885的选育

以邯郸284为母本、邯郸109为父本杂交选育而成的棉花新品种"邯郸885",高产、优质、适应性强,适宜在冀中南及黄河流域棉区种植.     

抗病虫棉花新品种邯棉103的选育

邯棉103是以早熟、高产、优质、抗病的邯333为母本,以转基因抗虫棉GK-12为父本杂交,经枯黄萎混生病圃定向选择培育而成.该品种具有高产、稳产、抗病、抗虫、吐絮肥大和衣分高等特点,2007年3月通过河北省品种审定委员会审定,适宜在冀中南及黄河流域棉区春播种植.     

环介导等温扩增技术的研究进展

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是利用2对特殊设计的引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效地扩增DNA的新技术,扩增产物为一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰菜样结构的DNA片段混合物,电泳图谱呈阶梯式带状分布,反应伴有白色的副产物焦磷酸镁沉淀产生,可通过肉眼定性判断反应结果.LAMP技术已在核酸的科学研究、疾病诊断和动物胚胎性别的鉴定等领域得到了广泛的应用.从LAMP技术的原理、引物组成及反应过程、技术特点、方法延伸和应用等方面对其进行了概述,以期为同类研究提供参考.     

棉花皱叶病毒LAMP检测方法的建立

棉花皱叶病毒(Cotton leaf crumple virus,CLCrV)是危害棉花的重要病毒之一,属中国进境检疫性植物病毒,本研究根据其DNA-B基因序列设计LAMP特异性引物,通过试验建立CLCrV的LAMP检测方法。该方法检测快速,15min即可检测到扩增曲线;特异性强,可有效区分同属的CLCrV、棉花曲叶病毒(CLCuV)、非洲木薯花叶病毒(ACMV)及番茄黄化曲叶病毒(TYLCV);灵敏度高,可检测到约43fg/μL的总DNA,比普通PCR灵敏度高1 000倍;并可通过肉眼观察浊度或颜色反应进行结果判断。该方法适用于现场CLCrV的快速检测。     

TRAP分子标记技术在植物分子遗传育种中的应用

近年来,随着生物技术的迅速发展,分子标记技术也得到了广泛应用。作为一种新兴研究手段,目标区域扩增多态性(TRAP)分子标记技术已经在分子遗传图谱构建、基因定位、遗传多样性、系谱分析等方面取得了重要的研究进展。简介了TRAP分子标记技术及其在分子遗传育种中的应用。     

棉铃虫世代种群的发展变化

对棉铃虫种群动态的多年研究证明 ,棉铃虫年发生世代从 3.3代增加到 4.5代 ,年平均百株累计卵量增加了 4倍。主害代明显后延多发 ,完全 5代出现率已达 2 2 % ,大发生频率巨增。     

基于ADAMS的型孔式棉花精量排种器仿真平台开发及试验

应用虚拟样机技术软件ADAMS,结合其二次开发功能,研发型孔式棉花精量排种器仿真平台.以新陆早23号棉种为例,应用该系统虚拟定量地研究型孔式棉花精量排种器的排种过程,以揭示种子与排种器系统之间的作用机理.虚拟试验结论与经验值台架试验结果的匹配验证了仿真系统的相对正确性.该系统的开发对于机械式排种器的改进和创新有重要的意义.