钙、钙调蛋白与植物的有性生殖

钙、钙调蛋白作为信号转导因子，在植物生长发育过程中起着十分重要的作用，在植物有性生殖过程中，钙，钙调蛋白的分布也发生一系列的变化，综述了植物有性生殖过程中的动态，并介绍了一些广泛运用于钙，钙调蛋白研究的方法。     

猕猴桃钙调蛋白cDNA的克隆及测序

以“秦美”猕猴桃果实呼吸跃变初期ｃＤＮＡ第一链为模板，参考大麦钙调蛋白基因序更合成５端和３端引物，利用多聚酶锭式反应（ＰＣＲ）合成了完整的猕猴桃钙调蛋白ＣＤＮＡ，克隆并测定了其全序列。结果表明，猕猴桃钙调蛋白基因读码框架内序列由４４４个核苷酸组成，共编码１４８个氨基酸，且与植物领域里发表的大麦及苜蓿的钙调蛋白基因有很高的同源性。在核苷酸序列古与大麦有８６．１６％的同源性，与苜蓿有８５．６９％的同源     

OphiobolinA的生物活性及作用机理

阐述了OphiobolinA对植物及微生物的表观生物活性,作为钙调蛋白抑制剂的作用机理及对叶绿体运输蛋白的作用机理。同时展望了该毒素作为钙调蛋白抑制剂及生物防治剂的应用前景。     

羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织CaM信号通路变化的研究

为了探究朊病毒感染中钙调蛋白信号通路的变化情况,对羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织中钙调蛋白的表达变化、分布特点及下游相关激酶及调控蛋白的表达变化情况进行了检测。结果显示在羊瘙痒因子263K感染仓鼠终末期脑组织中钙调蛋白的表达水平较正常仓鼠明显上调。钙调蛋白下游相关激酶及它们的磷酸化形式均明显下调,同时Ca MKs的下游调控蛋白——CREB也呈下调趋势,而靶蛋白——BDNF的表达则明显受到抑制。研究提示在朊病毒感染中很可能存在某种原因影响了钙调蛋白的功能。     

猕猴桃钙调蛋白cDNA的克隆及测序

以“秦美”猕猴桃果实呼吸跃变初期ｃＤＮＡ第一链为模板，参考大麦钙调蛋白基因序列合成５′端和３′端引物，利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）合成了完整的猕猴桃钙调蛋白ｃＤＮＡ，克隆并测定了其全序列。结果表明，猕猴桃钙调蛋白基因读码框架内序列由４４４个核苷酸组成，共编码１４８个氨基酸，且与植物领域里发表的大麦及苜蓿的钙调蛋白基因有很高的同源性。在核苷酸序列上与大麦有８６．１６％的同源性，与苜蓿有８５．６９％的同源性，其编码的氨基酸与大麦和苜蓿的不同分别只是一个氨基酸的差异，同源率高达９９．３％．     

植物体内钙离子的感受器类型及功能研究

阐述了Ca2 信号的产生与特点,Ca2 的感受器CaM(钙调蛋白),CDPK(钙依赖性蛋白激酶)以及CBL(钙调磷酸酶B类似蛋白)的结构与生理功能。     

钙蛋白酶系统与相关信号途径对肌肉组织降解的调控

综述了钙蛋白酶系统(特别是钙蛋白酶抑制蛋白)、钙调磷酸酶-NFAT信号途径和p94-NFκB信号途径的特性及它们在肌肉组织降解中的作用,指出深入研究钙蛋白酶抑制蛋白、钙调磷酸酶-NFAT信号途径,以及p94-NFκB信号途径调控肌肉组织降解的分子机制将有助于揭示肌肉嫩化的深刻机理。     

桑树2个钙调蛋白亚型基因cDNA克隆和序列分析

    为了揭示钙调蛋白在桑树抗逆性方面的作用,利用SMART技术(switching mechanism at 5'end of RNA transeript) 建丰驰桑幼苗cDNA文库,从中获得2个钙调蛋白cDNA序列,2条序列的读码框均为450 bp,均包括完整的3'端非翻译区;序列比对分析发现,2条序列ORF(open reading frame)同源性为86%,但氨基酸同源性却为98%,说明是2个钙调蛋白基因.命名为MCaM-1,MCaM-2.其中MCaM-1与拟南芥CaM7、胡萝卜CaM4的氨基酸同源性达100%.这表明钙调蛋白序列在植物中相当保守.     

东海原甲藻钙调蛋白的分离纯化及鉴定

以东海原甲藻（Prorocentrum donghaiense Lu）为材料,经热变性、离心处理,上清液依次经DEAE纤维素阴离子交换层析和苯基．Sepharose CL．4B疏水层析分离纯化钙调蛋白（CaM）．SDS—PAGE和Westem blot检测结果显示：东海原甲藻中CaM的相对分子质量为16ku．采用该实验方法首次有效地从海洋浮游植物东海原甲藻中分离纯化出钙调蛋白．     

DON暴露对断奶仔猪小脑组织脂质过氧化反应、神经递质分泌及钙稳态的影响

旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对断奶仔猪小脑组织中脂质过氧化、神经递质及钙稳态的影响。选择临床检查健康的15头"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分成3组,每组5头,对照组饲喂基础饲粮,DON低剂量组和高剂量组分别饲喂1 mg·kg~(-1)和2 mg·kg~(-1)的DON饲粮。试验期为60 d。试验结束时进行屠宰,取部分小脑组织匀浆用于检测氧化与抗氧化指标、神经递质及钙离子含量;部分组织存于液氮,用于检测钙调通路相关基因和蛋白的表达水平。结果显示,与对照组相比,DON显著降低断奶仔猪小脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,提高一氧化氮(NO)含量;并引起5-羟色胺(5-HT)及Ca~(2+)含量显著增加,同时使多巴胺(DA)及乙酰胆碱(ACH)的含量显著下降;此外,DON还使小脑组织中钙调蛋白基因(CaM)及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ基因( CaMKⅡ)表达降低,同时降低CaM蛋白表达水平,增加CaMKⅡ蛋白磷酸化水平。研究结果说明:DON可影响断奶仔猪小脑的脂质过氧化反应,改变神经递质分泌,引起钙稳态失衡,对断奶仔猪具有一定的神经毒性作用。     

在低温诱导毛白杨抗冻性中CaM含量和G6PDHase及ATPase活性的变化

该文对毛白杨幼苗在低温锻炼中钙调蛋白 (CaM)、6 磷酸葡萄糖脱氢酶 (G6PDHase)、腺苷三磷酸酶 (ATPase)、幼苗存活率及抗冻性的动态变化过程进行了测定 .结果表明 ,为了获得较高的抗冻性 ,生长期毛白杨幼苗的低温锻炼可分 3阶段进行 ,其中第 3阶段的 - 3℃锻炼对毛白杨幼苗抗冻性发育最有效 ;低温锻炼提高了幼苗叶片和枝条中CaM含量和G6PDHase及ATPase活性 ,同时也提高了幼苗的存活率和抗冻性 ,但毛白杨幼苗叶片的CaM含量和G6PDHase及ATPase活性提高程度较枝条明显 .进一步分析发现 ,在 - 3℃低温锻炼期间 ,上述各项指标变化与幼苗抗冻性的提高存在着明显的相关性 ,CaM可能参与G6PDHase和ATPase活性的调节 .     

胞外及胞内Ca~(2+)共同参与拟南芥中茉莉酸诱导的钙动员

【目的】探究茉莉酸(Jasmonic acid,JA)诱导的钙动员的来源及钙调素(CaM)在JA信号通路中的作用。【方法】以拟南芥(Arabidopsis thaliana columbia)为材料,采用不同类型的离子通透性通道抑制剂(或拮抗剂)预处理拟南芥叶肉细胞,利用激光共聚焦显微镜检测其对JA诱导的[Ca2+]cyt升高的影响;同时还利用上述拮抗剂、钙调素(CaM)拮抗剂处理10d的拟南芥幼苗,采用Northern blot方法检测了其对JA诱导的VSP表达的影响。【结果】胞内及胞外钙离子共同参与JA诱导的钙动员,JA诱导的Ca2+通过CaM或CaM相关蛋白进一步传递JA信号。【结论】质外体钙离子的流入和胞内钙库中钙离子的释放均参与JA诱导的钙离子动员,Ca2+可能通过CaM或CaM相关蛋白传递JA信号,进一步诱导JA反应基因的表达。     

Extracellular and Intracellular Calcium both Involved in the Jasmonic Acid Induced Calcium Mobilization in Arabidopsis thaliana

The objective of this experiment is to evaluate the role of intracellular and extracellular Ca2＋ and calmodulin （CAM） in jasmonic acid （JA） signaling. The laser scanning microscopy was used to detect the changes of [Ca2＋]cyt of Arabidopsis thaliana leaf cells which pretreated with different types of calcium channel blocker. Moreover, the expression of VSP, one of JA response genes, was also investigated after pretreated with the above blocker and antagonist of CaM. The results showed that extracellular and intracellular calcium both involved in the JA-induced Ca2＋ mobilization, and then Ca2＋ exerted its functions through activating the CaM or CaM related proteins. The apoplast calcium influx and the calcium release from the calcium stores are both involved in the JA-induced calcium mobilization, then the JA-induced Ca2＋ transmited the JA signal through CaM or CaM related proteins, and regulated the JA responsive genes.     

水分胁迫诱导的玉米叶片钙调素基因表达及其与ABA和H_2O_2的关系

以玉米(Zea mays L.)为材料,探讨了水分胁迫下玉米钙调素(CaM)基因CaM1、CaM2和CaM3在叶片中转录水平的变化;并对水分胁迫下脱落酸(ABA)积累和H2O2产生与CaM基因表达的关系进行了研究.结果表明,25% PEG 6000模拟的水分胁迫能够诱导上述玉米CaM基因在叶中的表达,其中对CaM1和CaM3的影响较为显著,3个基因具有各自不同的表达模式.外源ABA处理也能显著诱导这3个基因的表达,施用ABA合成抑制剂FLU明显抑制了水分胁迫下CaM基因表达,暗示水分胁迫下CaM基因表达增强依赖于ABA的积累.外源H2O2处理下3个CaM基因均出现2次表达增强的情况,ROS抑制剂或清除剂并不影响外源ABA诱导的CaM基因的前期表达,仅抑制了后期表达,暗示H2O2参与ABA诱导的CaM基因表达后期的调控,它们之间可能存在交谈机制,并且这种机制在不同CaM基因之间具有普遍性.     

栀子苷的降糖作用和对PPARγ受体的激活

葡萄糖消耗试验表明,栀子苷能显著促进前脂肪细胞对葡萄糖的吸收。小鼠荷糖试验和四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖试验证实,栀子苷具有剂量依赖性降低小鼠餐后血糖及糖尿病高血糖的作用。通过基于PPARγ受体信号通路的报告基因诱导表达试验,发现栀子苷在体内外的降糖功效,可能与过氧化物酶增殖体激活受体γ的激活有关。     

三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析

[目的]研究三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化。[方法]通过RACE技术,以我国重要的淡水珍珠贝——三角帆蚌为研究客体,克隆了CaM的cDNA全长,并通过Real-Time Q-PCR技术分析了该基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化。[结果]三角帆蚌CaM基因cDNA全长659bp,包括70 bp的5'UTR,299 bp的3'UTR和447 bp的ORF,编码149个氨基酸,预测其分子量为16.8 kDa,等电点为4.14。cDNA序列比对信息表明三角帆蚌与池蝶蚌、合浦珠母贝间均具有57%的相似度,而其蛋白具有高度的保守性,除斑马鱼外,各生物CaM相似率达97%。定量数据表明,CaM基因广泛表达于三角帆蚌各组织,外套膜内膜与腮中表达量显著升高(P0.05),其次是外套膜外膜和内脏团组织。插核育珠能增加该基因在各组织的表达,特别是在外套膜外膜和鳃组织中,育珠蚌该基因的表达显著高于非育珠蚌(P0.05)。此外,水体Ca2+浓度的增大对CaM基因表达有显著的影响,外套膜内膜该基因的表达随Ca2+浓度升高而增加,而外套膜外膜1.25 mmol/L Ca2+浓度下该基因的表达水平显著高于0.50 mmol/L、3.00 mmol/L组(P0.05)。[结论]为进一步深入研究钙调蛋白基因的在珍珠生长过程中的功能及其调控机理奠定了分子基础。     

钙调素与核酸在梨花芽分化中的动态研究

以梨为试格,对成花过程中ＣａＭ和核酸的含量进行了分析测定,结果表明;短枝芽的ＣａＭ含量在成花的发端期成倍增加形成高峰,而新梢芽却一直保持较低的水平;短果枝叶的ＣａＭ与新梢叶有着相近的变化趋势。但在成花前后,短果枝叶的ＣａＭ含量要明显高于新梢叶的,短枝芽所含核酸,尤其是ＲＮＡ开始回升时与ＣａＭ的峰值相吻合,并且在整个成花期间都呈上升的趋势。     

低聚原花青素对STZ糖尿病小鼠血糖水平的影响

目的:观察低聚原花青素(OPC)对糖尿病小鼠血糖的影响。方法:用低聚原花青素对昆明小鼠进行口服毒性限量试验;采用STZ小剂量多次注射方法诱导糖尿病小鼠模型;实验组分别按50、100、150 mg/kg体质量灌胃给予OPC,模型组和正常对照组则灌胃给予等容积生理盐水,连续4周;观察小鼠的一般情况、动态监测实验动物外周血中血糖含量。结果:小鼠口服OPC限量试验结果>5 g/kg体质量,证实OPC安全、无毒性作用;成模小鼠的空腹血糖水平为18.37±2.13 mmol/L,明显高于正常对照组(P<0.01),并出现三多一少的糖尿病症状,表明糖尿病模型制作成功;3个OPC给药组糖尿病小鼠的血糖水平升高趋势得到控制,血糖随着给药时间延长而下降,与模型组比较,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:OPC具有控制糖尿病小鼠血糖升高幅度,降低血糖水平、干预糖尿病发生发展进程的作用。     

水分胁迫下玉米叶片中一氧化氮与钙和钙调素的相互作用

以玉米(Zea mays L.)为材料,研究水分胁迫下玉米叶片中NO与Ca2+和钙调素(CaM)含量之间的关系。结果显示:Ca2+鳌合剂、Ca2+通道阻塞剂和CaM拮抗剂预处理均抑制了水分胁迫诱导的NO产生和一氧化氮合酶(nitric ox-idesynthase,NOS)活性的提高,同时也能抑制水分胁迫诱导的叶片线粒体NO产生,而对叶绿体NO产生并没有影响;NO清除剂羟基2苯基4,4,5,5四咪唑1羟基3氧化物(2-4-carboxypheny l-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide,c-PTIO)能抑制水分胁迫条件下Ca2+和CaM的产生以及CaM1基因表达,但对水分胁迫最初诱导的玉米叶片叶肉细胞原生质体Ca2+和玉米叶片中CaM1基因表达以及CaM含量增加没有影响。上述结果表明:水分胁迫下NO和Ca2+/CaM之间存在相互作用。