虫草多糖对日本沼虾免疫机能的影响

在饲料中添加1‰的虫草多糖，以口服形式对日本沼虾进行免疫，通过连续测定日本沼虾血淋巴吞噬活性，血清中抗菌活力、溶菌活力以及酚氧化酶活力，研究虫草多糖对日本沼虾免疫机能的作用，结果表明：除个别情况外，虫草组的吞噬百分比和吞噬指数、抗菌活力、溶菌活力以及酚氧化酶活力、均高于对照组，因此，投喂虫草多糖能够明显地增强日本沼虾的免疫防御能力。     

饵料中的维生素B6对日本沼虾部分免疫功能的影响

[目的]探讨饵料中维生素B6对日本沼虾部分免疫功能的影响。[方法]在温度为18—23℃、pH值为（7．50±0．10）的条件下,研究了饵料添加不同水平的维生素B6（0、40、80、160、240mg／kg）对日本沼虾部分免疫功能的影响。[结果]随着饵料中维生素B6含量的增加,日本沼虾肌肉中活性氧含量下降,维生素B6含量为80mg／kg时,其活性氧含量降至最低水平,但随着维生素B6含量的继续增加,其活性氧含量迅速上升。饵料中添加一定量的维生素B6可明显提高日本沼虾肌肉中SOD的活性,当添加量为80mg/kg时,SOD活性显著高于对照组。[结论]添加一定量维生素B6可明显提高日本沼虾肌肉中SOD的活性,能够清除机体内由于缺乏维生素B6产生的活性氧自由基,减轻自由基对机体的伤害,从而提高日本沼虾机体的免疫力。     

硒对日本沼虾耐受亚硝酸钠胁迫的作用

[目的]研究亚硝酸钠胁迫下饲料中添加适量的有机硒（富硒酵母）对日本沼虾抗氧化酶活性的影响。[方法]在饲料中添加适量的有机硒,测定虾体肌肉中超氧化物歧化酶（SOD）活性。[结果]SOD活性随着亚硝酸钠浓度的增加先升高后降低,试验组沼虾的SOD活性高于无硒对照组。[结论]在饲料中添加适量浓度的有机硒后能够增强SOD活性,而且有助于增强日本沼虾机体的抗氧化能力。     

配合饲料中不同蛋白质水平对日本沼虾生长的影响

采用鱼粉作为主要饲料蛋白源,利用酪蛋白来调节饲料的蛋白质含量,设置蛋白质水平为30％～46％的6种不同梯度的试验饲料,试验设3个重复,每个重复放养日本沼虾100尾,平均初重0．067g。每天投喂2次,试验共进行60d,研究配合饲料中不同的蛋白质水平对日本沼虾生长的影响并得出日本沼虾配合饲料中的最适蛋白质含量。结果表明：蛋白质水平为39．32％和41．67％的试验组的虾体增重和特定生长率均显著高于其它试验组（P〈0．05）;以增重率和特定生长率为衡量指标,采用二次方程回归分析法,得出日本沼虾配合饲料中蛋白质的最适含量约为41％～41．5％。饲料中不同蛋白质水平对日本沼虾虾体（全虾）的水分和粗蛋白质含量具有显著影响（P〈0．05）,但对其成活率,粗脂肪含量和粗灰分含量均无显著影响（P〉0．05）。     

配合饲料中不同蛋白质水平对日本沼虾生长的影响

采用鱼粉作为主要饲料蛋白源,利用酪蛋白来调节饲料的蛋白质含量,设置蛋白质水平为30％～46％的6种不同梯度的试验饲料,试验设3个重复,每个重复放养日本沼虾100尾,平均初重0．067g。每天投喂2次,试验共进行60d,研究配合饲料中不同的蛋白质水平对日本沼虾生长的影响并得出日本沼虾配合饲料中的最适蛋白质含量。结果表明：蛋白质水平为39．32％和41．67％的试验组的虾体增重和特定生长率均显著高于其它试验组（P〈0．05）;以增重率和特定生长率为衡量指标,采用二次方程回归分析法,得出日本沼虾配合饲料中蛋白质的最适含量约为41％～41．5％。饲料中不同蛋白质水平对日本沼虾虾体（全虾）的水分和粗蛋白质含量具有显著影响（P〈0．05）,但对其成活率,粗脂肪含量和粗灰分含量均无显著影响（P〉0．05）。     

日本沼虾幼虾的耐盐性研究

在人工养殖条件下,研究了日本沼虾幼虾（体长为2．0～2．5cm）在不同盐度条件下的平均死亡时间（MST）、半数死亡时间（ST50）、半致死盐度（MLS）以及生长率和成活率。结果表明：日本沼虾在盐度为32、34、36条件下的MST分别为19.63、6．63、2．93h;在盐度为30、32、34、36条件下的ST50分别为26．67、11．27、2．60、1．53h;MLS-24、MLS-48、MLS-72、MLS-96分别为30．71、26．66、26．31、25,80;当盐度为12时,日本沼虾幼虾的增长率和增重率最高。这说明日本沼虾的耐盐性较高,能在盐度较高的水域中养殖。     

不同投喂频率对日本沼虾影响的初步研究

本实验以800尾左右体重0.8～1.8g的日本沼虾为实验材料,随机分成4组,每组设置两个平行组,研究不同投喂频率对日本沼虾的影响。实验结果表明：（1）不同投喂频率对日本沼虾的增重率和含肉率有显著影响,投喂频率为3次/d时,增重率最高;对日本沼虾的性腺发育无显著影响,但投喂频率在3次/d时性腺指数最高。（2）不同投喂频率对日本沼虾的虾体肌肉主要营养成分（初水分、粗灰分、粗脂肪和粗蛋白含量）的影响不显著,但粗灰分含量有随投喂频率增加而上升的趋势;而粗脂肪含量有随投喂频率增加而下降的趋势。（3）根据不同投喂频率对日本沼虾各项生理指标的影响,日本沼虾的适宜投喂频率为3次/d。     

副溶血弧菌对罗氏沼虾肝胰腺和鳃组织中呼吸相关酶活性及抗氧化酶基因表达的影响

【目的】探讨副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）肝胰腺和鳃组织中呼吸相关酶活性和抗氧化酶基因的影响,以期为罗氏沼虾免疫机理研究和病害防治提供参考依据。【方法】选取规格整齐、健康的罗氏沼虾,分别注射PBS溶液（对照组）和副溶血弧菌（试验组）,在第1、3、6、12、24、48、72和96h统计累计存活率,并取肝胰腺和鳃组织进行呼吸相关酶活性及抗氧化酶相关基因表达测定。【结果】罗氏沼虾感染副溶血弧菌后,随着时间的推移,其累计存活率逐渐下降,在96h累计存活率为72%。感染副溶血弧菌后,其肝胰腺中的ATP合酶、细胞色素C氧化酶和NADH脱氢酶活性随时间延长均呈先降低后上升最后趋于对照组水平的变化趋势,且在6~24h 3种酶活性均显著低于对照组（P<00.05,下同）,之后酶活性逐步上升;活性氧（ROS）含量则呈先上升后下降的变化趋势,且在6~48h显著高于对照组;超氧化物歧化酶（SOD）基因、过氧化氢酶（CAT）基因及谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）基因相对表达量呈先升高后降低再升高的变化趋势。在鳃组织中,ATP合酶、细胞色素C氧化酶和NADH脱氢酶的活性随着感染时间的延长呈先降低后上升至趋于对照组水平,在6~72h 3种酶活性不同时间段表现出显著下降趋势;ROS含量则呈先上升后下降的变化趋势;SOD、CAT和GPX基因相对表达量呈先升高后降低再升高的变化趋势,且均在感染6h显著上调至最大值,其中GPX基因相对表达量在12~48h显著下调低于对照组,并在72h逐渐上调。【结论】副溶血弧菌感染罗氏沼虾后对肝胰腺和鳃组织中的呼吸相关酶及抗氧化酶基因产生显著影响,ROS水平呈上升趋势。虽然罗氏沼虾能通过自我调节呼吸相关酶和抗氧化酶基因促使机体抵御病原体入侵,但超过机体自我调节的限度时会对机体造成损伤。     

日本沼虾卵巢发育的组织学与组织化学观察

应用组织切片、组织化学技术,对日本沼虾雌性生殖系统的组织结构、卵巢发育周期进行研究。结果表明,日本沼虾雌性生殖系统由卵巢和输卵管组成,卵巢外被结缔组织膜与生殖上皮。日本沼虾的卵巢发育具有明显的色泽与体积的变化,根据其外部形态和内部结构,将其划分为增殖期、小生长期、大生长期、成熟期和恢复期5个时期。卵子发生可分为卵原细胞期、卵黄发生前期、卵黄发生期、卵黄发生后期4个时期。卵黄发生前期的卵母细胞为小生长期的初级卵母细胞,胞质嗜碱性,无卵黄颗粒曰卵黄发生期卵母细胞为大生长期卵母细胞,胞质嗜酸性,早期含卵黄颗粒,后期转变为卵黄块,核位于卵母细胞中央曰卵黄发生后期卵母细胞为成熟期卵母细胞,体积长足,核移动到卵母细胞周边,最终核生发泡破裂,核膜消失,卵周围滤泡细胞层变得极薄,等待排卵。     

海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)的人工种间杂交及其RAPD分析

运用人工授精方法,进行海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)杂交试验,获得了可育的F1代杂种,并对F1代及其双亲进行了RAPD分析。共进行6批杂交试验,4批抱卵,3批获得杂交虾,成活率分别为30%,48%,64%。形态上,F1代兼有双亲特征,但偏向父本。RAPD扩增结果显示,海南沼虾和日本沼虾的扩增带型存在显著的差异,F1杂种兼有双亲的特征带,父、母本之间的遗传距离为0.785 6,父本与F1的遗传距离为0.410 9,母本与F1的遗传距离为0.423 8。从分子水平确认了日本沼虾(♀)和海南沼虾(♂)种间杂交的成功,并为进一步寻找经济性状相关分子标记提供了条件。     

丁香酚对日本沼虾麻醉效果的研究

研究了丁香酚对日本沼虾的麻醉效果。在不同浓度(100,200,300,400和500mg/L)和不同温度(17,22和27℃)条件下,观察日本沼虾的麻醉状态和苏醒状态,然后对试验数据进行统计分析。结果表明(P<0.05):日本沼虾进入麻醉状态所需的时间(麻醉时间)随丁香酚浓度的升高而缩短,随麻醉温度的升高而缩短;苏醒所需时间(苏醒时间)随丁香酚浓度的升高而加长,随麻醉温度的升高和而缩短;苏醒后第14d统计,各实验组存活率均为100%。多重比较结果表明(P<0.05):对于麻醉效果的影响,不同的麻醉浓度之间存在显著差异,不同的麻醉温度之间也存在显著差异;对于恢复效果的影响,麻醉浓度100mg/L和200mg/L之间的差异不显著,浓度400mg/L和500mg/L之间差异也不显著,麻醉温度17℃和22℃之间差异不显著,其他两两相互比较,差异均显著。研究表明,丁香酚对日本沼虾的麻醉效果良好,是一种合适的麻醉剂。     

海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)的人工种间杂交及其RAPD分析

运用人工授精方法,进行海南沼虾(♀)×日本沼虾(♂)杂交试验,获得了可育的F1代杂种,并对F1代及其双亲进行了RAPD分析。共进行6批杂交试验,4批抱卵,3批获得杂交虾,成活率分别为30%,48%,64%。形态上,F1代兼有双亲特征,但偏向父本。RAPD扩增结果显示,海南沼虾和日本沼虾的扩增带型存在显著的差异,F1杂种兼有双亲的特征带,父、母本之间的遗传距离为0.785 6,父本与F1的遗传距离为0.410 9,母本与F1的遗传距离为0.423 8。从分子水平确认了日本沼虾(♀)和海南沼虾(♂)种间杂交的成功,并为进一步寻找经济性状相关分子标记提供了条件。     

镉对日本沼虾的毒性研究

[目的]研究Cd2＋对日本沼虾的急性毒性作用。[方法]采用急性毒性实验的方法测定Cd2＋对日本沼虾的24、48、96h的半致死浓度。以96h的半致死浓度为最高浓度设置5个浓度组进行急性胁迫实验,测定日本沼虾肌肉中超氧化物歧化酶（SOD）、谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）的活力。[结果]24℃下Cd2＋对日本沼虾的24、48、96h的LC50值分别为0.038、0.022、0.019mg/L。在几个Cd2＋浓度梯度胁迫下,SOD、GPT和GOT活性均受到不同程度的抑制,并且随Cd2＋浓度的升高,抑制作用越明显。[结论]Cd2＋对日本沼虾有较强的毒性作用。     

铈对日本沼虾卵子孵化的影响

研究了铈（Ce^3 )对日本沼虾（Macrobrachium nipponenese)卵子孵化的影响。结果,发Ce^3 的浓度为0．2mg.L^-1时，孵化率与对照组无显著差异；Ce^3 的浓度范围为1．2－2．4mg.L^-1，可提高孵化率13．7％－19．1％，铈对卵子孵化的促进作用是通过卵子对铈的吸收实现的。     

日本沼虾不同地理种群的遗传多样性研究

笔者采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对6个地理种群(微山湖、洪泽湖、太湖、龙感湖、洪湖、珠江)的日本沼虾各30个个体进行了遗传多样性分析.在筛选出的18个引物中共检测到201个位点,大小在100～2000bp之间.多态位点141个,多态位点比例70.15%;各种群的多态位点数为30～99不等,多态位点比例为21.13%～55.93%.日本沼虾中国不同地理种群的平均遗传杂合度为0.2446,各种群内平均遗传杂合度为0.1132～0.2071.Shannon信息指数(Ⅰ)为0.1695～0.2950.日本沼虾6个地理种群的两两地理种群间遗传分化指数Gst值在0.2116～0.4442之间.种群间总的遗传分化指数Gst0值为0.4858,Nm值在0.6257～1.8628之间,表明日本沼虾种群间已经发生显著或重要分化.同时发现OPX-830bp、OPI-360bp为珠江种群区别于其他种群的特征标记.聚类分析结果表明,洪湖种群与龙感湖种群,洪泽湖种群与微山湖种群分别先聚在一起,再与太湖种群聚类.最后与珠江种群聚合在一起.     

饥饿对日本沼虾生长和部分免疫功能的影响

在25．0±1℃范围条件下，对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理后再投饵的恢复生长实验。对照组连续饱食投喂18d，处理组分别饥饿2,4、8d，再分别饱食投喂16，14，10d。实验结果如下：在恢复生长时期，处理组的特殊生长率、摄食率、食物转化率明显高于对照组，超氧阴离子是随着饥饿时间的延长而增加，而超氧化物歧化酶和过氧化氧酶的酶活力则是随着饥饿实验先稍微增加，后又下降。在恢复投饵后，超氧阴离子、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶又恢复至对照组水平。实验结果表明，日本沼虾继饥饿后再恢复喂食出现完全或部分补偿生长效应不仅由于增加食欲，提高摄食水平，同时改善了食物转化率。因此，补偿生长是这两种生理因素共同作用的结果。     

饥饿对日本沼虾生长和部分免疫功能的影响

在25．0±1℃范围条件下,对日本沼虾进行了不同时间的饥饿处理后再投饵的恢复生长实验。对照组连续饱食投喂18d,处理组分别饥饿2,4、8d,再分别饱食投喂16,14,10d。实验结果如下：在恢复生长时期,处理组的特殊生长率、摄食率、食物转化率明显高于对照组,超氧阴离子是随着饥饿时间的延长而增加,而超氧化物歧化酶和过氧化氧酶的酶活力则是随着饥饿实验先稍微增加,后又下降。在恢复投饵后,超氧阴离子、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶又恢复至对照组水平。实验结果表明,日本沼虾继饥饿后再恢复喂食出现完全或部分补偿生长效应不仅由于增加食欲,提高摄食水平,同时改善了食物转化率。因此,补偿生长是这两种生理因素共同作用的结果。     

饲料蛋白水平对日本沼虾生长、消化酶和免疫酶的影响

按等能量不等蛋白的原则,配制蛋白水平分别为28%、32%、36%、40%、44%的5组饲料投喂日本沼虾[体重(0.28±0.07)g].饲养52 d时测定虾的增重率、饲料系数、成活率、消化酶活性和免疫酶活性等指标.结果显示:投喂不同蛋白质水平饲料的各组日本沼虾之间,增重率、饲料系数、成活率和肝胰腺中蛋白酶活性有显著差异(P＜0.05);当饲料蛋白水平为40%时,日本沼虾的成活率和增重率最高,饲料系数最小;肝胰腺中蛋白酶活性随饲料蛋白水平的增加而增加,但当饮料蛋白水平超过36%时胃蛋白酶活性下降,当饲料蛋白水平超过40%时类胰蛋白酶活性下降;胃中蛋白酶有随饲料蛋白水平增加而上升的趋势,但饲料不同蛋白水平对其影响差异不显著(P＞0.05);饲料不同蛋白水平对ACP酶活性的影响有显著差异(P＜0.05),但对AKP、SOD酶活性影响的差异不显著(P＞0.05).以增重率为指标,采用直线回归法,拟合出线性方程y=0.354 8x 46.338 0.采用抛物线回归法,拟合出抛物线方程y=-0.077 1x2 5.969 1x-53.420 0.由两个回归方程计算出日本沼虾饲料中的最适蛋白质含量为38.7%～40.3%.结合饲料系数、消化酶活性和免疫酶活性等指标的考察,建议在日本沼虾生产中,中期配合饲料的适宜蛋白质水平为38.7%～40.3%.     

日本沼虾胚胎发育的形态及组织学观察

在解剖镜和显微镜下对日本沼虾胚胎发育进行了形态学和组织学观察。根据日本沼虾胚胎发育过程中的形态特征,将其划分为受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠期、前无节幼体期、后无节幼体期、前溞状幼体期以及膜内溞状幼体期。日本沼虾卵裂属于完全卵裂和不完全卵裂之间的过渡类型,无囊胚腔。3对附肢原基在前无节幼体期形成,胚胎在前溞状幼体期腹部开始分节,复眼色素也在前溞状幼体期出现,随后复眼色素区域逐渐增加,到膜内溞状幼体期孵化时复眼结构成熟。腹部分节和复眼色素的出现表明胚胎进入前溞状幼体期。随着胚胎发育的进行,由于附肢的形成和分化,与前几个时期相比,胚胎发育的最后4个时期所持续的时间较长。研究亮点:针对日本沼虾胚胎无节幼体期和溞状幼体期划分目前存在的争议,通过胚胎外部形态与组织切片相结合的观察方法,对其胚胎发育过程进行了再研究,澄清了这两个时期的划分。同时,阐明日本沼虾卵裂类型,并分析了日本沼虾发育时间长的原因。     

日本沼虾对饲料赖氨酸的需要量研究

在10%酪蛋白和5%明胶提供全蛋白氨基酸的基础上,用晶体氨基酸赖氨酸调节7个饲料赖氨酸水平(0.85%～2.95%),并以晶体天冬氨酸和谷氨酸(1∶1)补偿调节百分比;其它饲料氨基酸分别用晶体氨基酸调节到40%的日本沼虾肌肉蛋白中各氨基酸含量的水平,配制7种精制试验饲料,喂养初始体重为0.13 g的幼日本沼虾7周。结果表明,用不同试验饲料喂养日本沼虾7周后,虾的存活率组间无显著差异(P>0.05)。饲料赖氨酸水平对虾体增重有显著影响(P<0.05)。虾体增重随饲料赖氨酸上升到1.90%不断增大,但超过此值后不再有显著变化。摄食饲料赖氨酸水平为1.55%～2.60%的试验组的饲料效率显著高于摄食饲料赖氨酸水平为0.85%的试验组。以虾体增重为指标,经折线模型回归分析,得出日本沼虾对赖氨酸的需求量为:占干饲料的1.91%,占饲料蛋白的5.41%。并以此为基准,以肌肉必需氨基酸组成比为参考,估算了其它各必需氨基酸的需要量分别为:精氨酸1.83%、组氨酸0.52%、异亮氨酸1.13%、亮氨酸1.80%、蛋氨酸0.66%、苯丙氨酸0.99%、苏氨酸0.81%、色氨酸0.27%、缬氨酸1.11%。