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相似文献
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1.
绵羊、山羊和岩羊mtDNA的RFLP及其遗传分化研究   总被引:13,自引:2,他引:11  
本文用15种识别6碱基的限制性内切酶ApaⅠ、BamHⅠ、BglⅠ、BglⅡ、ClaⅠ、DraⅠ、EcoRⅠ、EcoRⅤ、HaeⅡ、HindⅢ、KpnⅠ、PvuⅡ、PstⅠ、SacⅠ和SalⅠ对绵羊、山羊和岩羊mtNDA的限制性片断长度多态性进行了比较研究,以探讨其遗传分化关系。共检测到75个酶切位点,41种限制性态型,其中绵羊和山羊、绵羊和岩羊以及山羊和岩羊的共享位点数分别为15、8和14,共享  相似文献   

2.
山羊mtDNA多态性及其起源分化研究   总被引:26,自引:6,他引:20  
本文用14种识别6碱基的限制性内切酶ApaⅠ、BamHⅠ、BglⅠ、BglⅡ、DraⅠ、EcoRⅠ、EcoRⅤ、KpnⅠ、PvuⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SmaⅠ和XhoⅠ研究了来自我国12个省和自治区共计18个地方山羊品种218个体mtDNA的RFLP,并运用Nei氏公式计算了各限制性类型间的遗传距离P和群丛遗传多态度π值。结果表明,在研究的所有个体中共检测到41个酶切位点,18种限制性态,其中B  相似文献   

3.
云南地方猪种线粒体DNA多态性研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
本文用ApaⅠ、AvaⅠ,BamHⅠ,BelⅠ,BclⅠ,ClaⅠ,DraⅠ,EⅠ,EcoRⅤ,KpnⅠ,PstⅠ,PuvⅡ,SalⅠ,SmaⅠ,StuⅠ,XhoⅠ等18种限制性内切酶分析云南猪种的mtDNA多态性。在全部18头个体中只检出一种限制性类型,结果表明,云南猪种的mtDNA变异度很低,遗传多样性贫乏,提示云南猪种起源于一个共同的祖先,在品种形成的早期可能受到创立者效应的制约。  相似文献   

4.
藏绵羊线粒体DNA遗传多样性研究   总被引:21,自引:4,他引:21  
本文用ApaI,AvaⅡ,BamHI,BclⅡ,ClaI,EcoRⅤ,HindⅢ,HpaI,KpnI,PstI,PvuⅡ,XbaI,XhoI等14种内切酶,分析了12头藏绵羊mtDNA的限制性片断长度多态性,共检测了35个酶切位点,发现AvaⅡ,ClaI,PvuⅡ三种酶切类型具有多态性,根据不同个体的mtDNA的酶切类型,发现藏绵羊存在三种mtDNA单倍型,计算mtDNA多态度π值为0.0012,  相似文献   

5.
选用EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ、EcoRⅤ、PvuⅡ、BglⅠ、SmaⅠ和PstⅠ等8种限制性内切酶,对不同地区分离的3株减蛋综合征(EDS)病毒进行酶切图谱比较。结果发现3株毒用前6种酶切割后产生的片段数及各片段的大小均相同,而用SmaⅠ和PstⅠ切割后,贵州分离毒HS-1与国际标准毒AV-127、南京他离毒GC2相比,多出1个片段。表明不同地区EDS分离毒的核酸结构基本相同而又略有差异  相似文献   

6.
将狂犬病病毒糖蛋白cDNA BglⅡ(1.67kb)片段正向插入pMT010/A^+BamHⅠ切点,构建重组质粒pMT010/A^+-Rgp,用EcoRⅠ+SalⅠ对pMT010/A^+-Rgp进行双酶切后,回收含有狂犬病病毒糖蛋白cDNA和绵羊MT启动子的2.76kb片段,通过显微注射技术将该片段注入小鼠单细胞受精卵雄前核内,在进行胚胎移植后,获得44只小鼠,经PCR、Southern杂交及原位  相似文献   

7.
产蛋下降综合征(EDS-76)病毒DNA酶切图谱分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
选用EcoRI、PstⅠ、PvuⅡ、HindⅢ、BglⅠ和BglⅡ6种限制性内切酶,对国内4株EDS-76病毒鸡源分离株和国外标准株AV-127及1株鹅源腺病毒的DNA进行酶切图谱的比较,结果发现4种鸡源分离株与AV-127株用上述6种酶切的片段数分别为4、8、10、10、6和7条。各酶切图形、片段大小亦十分相似,表明均为EDS-76病毒。EcoRI-HindⅢ和PstI-EcoRI的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为6、7、9、7、4和10条,酶切图形和片段大小均与AV-127有很大不同,表明该分离株可能为1株血清型相同而基因组不同的EDS-76鹅腺病毒。  相似文献   

8.
大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的高效表达   总被引:13,自引:0,他引:13  
用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合基因的质粒pXSLT1,回收084kb的ST1—LTB融合基因,再将载体pET—28b(+)用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,然后将其与ST1—LTB融合基因连接,转化至受体菌BL21(DE3)中。经EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒pXETSLT1。重组菌株BL21(DE3)(pXETSLT1)经IPTG诱导后,其表达产物经SDS—PAGE和ELISA检测,结果表明重组菌株可以高效表达ST1—LTB融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的3321%,而且无天然ST1生物毒性。  相似文献   

9.
大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合基因的高效表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
用限制性核酸内切酶Eco RⅠ和HindⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的质粒pXSLT1,回收0.84kb的ST1-LTB融合基因,再将载体pET-28b(+)用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,然后将其与ST1-LTB融合基因连接,转化至受体菌BL21(DE3)中。经EcoRⅠ,HindⅢ,BamHⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒pXET-SLT1。  相似文献   

10.
用内切酶SacⅠ和HindⅢ双酶切大肠杆菌质粒pEWD299,回收505bp的LTB基因片段,再将载体pUC18用SacⅠ和HindⅢ双酶切,最后将pUC18DNA与505bp的LTBDNA进行连接,转化至受体菌DH5α中,经SacⅠ/HindⅢ、EcoRⅠ/HindⅢ酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pXLT1。再将pXLT1进行EcoRⅠ酶切、大肠杆菌聚合酶ⅠKlenow大片段补平、HindⅢ酶切处理,然后与用HicⅡ和HindⅢ酶切的pUC18连接,转化至受体菌DH5α中,经XbaⅠ/HindⅢ酶切反应鉴定重组子,得到了理想重组子质粒pXLT1-1。将质粒pXLT1-1进行核苷酸序列分析,确定了插入的LTB基因与载体的连接向位及其全部核苷酸序列  相似文献   

11.
河北省山羊品种mtDNA遗传多样性研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
用 1 2种识别 6碱基的限制性内切酶ApaⅠ、BamHⅠ、Bg1Ⅰ、DraⅠ、EcoRⅠ、EcoRⅤ、KpnⅠ、PvuⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SmaⅠ和XhoⅠ研究了河北省 5个山羊品种和类群共计 61个个体mtDNA的RFLP。结果检测到 3 3个酶切位点 ,1 4种限制性态型 ,3种基因单倍型 ,其中EcoRⅠ和CalⅠ表现出多态。基因单倍型间平均遗传距离为 0 .0 0 3 9,群体平均遗传多态度π值为 0 .1 2 %,表明其遗传分化程度较低  相似文献   

12.
我国北方部分山羊品种mtDNA遗传多样性   总被引:3,自引:0,他引:3  
用12种认别6碱基的限制性内切酶Apa I、Bam HI、Bg1 I、Eco RI、Eco RV、Kpn I、Pvu Ⅱ、Pst I、Sac I、Cla I和Xho I,研究了我国北方地区9个山羊品种和类群共计110个体线粒体DNA(mtNDA)的限制性片段长度多态性(RFLP),利用Nei氏公式计算了各基因单倍型间的遗传距离P、群体遗传多态性π值以及各群体间的净遗传距离,并利用UPGMA方法对各  相似文献   

13.
鹑源减蛋综合征病毒QAVc—94株的酶切图谱分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
选HindⅢ、EcoRⅠ、PstⅠ、SphⅠ、BamHⅠ、BamHⅠ和BglⅠ6种限制酶,对QAVc-94株和AV-127国际标准株的DNA进行酶切图谱比较结果发现,QAVc-94株用上述6种酶酶切得到的片段数分别为10、3、12、4、6、9条,将各片段碱基数相加得出其基因组长34.7kb,略高于国内的报道,而与Zask等的结果相接近,从分子水平上将QAVc-94鉴定为一株EDSV。对照AV-127株的酶切结果与文献报道相符。QAVc-94株酶切图谱分析显示:HindⅢ和EcoRⅠ的酶谱与报道的其他EDSV分离株基本相似,HindⅢ的酶谱与国内研究最多的AA-2长春分离株一致,EcoRⅠ的酶谱结果与Zask等报道的B8/78株相同。而其他4种限制酶的酶切图谱与已报道的各地分离株相比,差异较大,如PstⅠ和BglⅠ多出2-5个识别位点。说明鹌鹑源EDSV已与鸡源、鸭源、鹅源EDSV有较大的变异,是一株血清型相同而基因型不同的鹌鹑减蛋综合征病毒。  相似文献   

14.
本研究利用10%SDS-PAGE及Western-Blotting技术鉴定3株不同的减蛋综合征病毒(贵州株HS-1、南京分离毒GC2、国际标准毒AV-127)的蛋白抗原性,结果表明,3株毒的蛋白多肽分子量均在106-12kD范围,一各条多肽的组成上略有差异;它们都具有两条相同的免疫原性多肽,分子量分别为106和100KD。同时,运用EcoRⅠ,HindⅢ,PstⅠ和SmaⅠ等5种限制性内切酶进行了酶切分析,证实3株EDS病毒用PstⅠ和SmsⅠ酶切的片段大小及长度略有不同,而其它3种酶的酶切图谱完全相同。  相似文献   

15.
Bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) DNA molecules obtained from a limited number of infected cells were cleaved with a variety of restriction endonucleases. By use of selected DNA fragments in Bgl 1, Pst 1, Pvu 1 and Pvu 11 restriction patterns, one reference, two vaccine and three wild-type strains of BHV-1 were distinguished from one another. The simplified DNA fingerprinting method described here should be most useful, not only to control the genetic stability of BHV-1 vaccines during production, but also to differentiate the vaccine strains from other isolates in clinical cases.  相似文献   

16.
从鸡脾脏中提取总 RNA,以总RNA为模板,5’-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-(T)15-3’为反转录引物,采用TaKaRa AMV反转录酶合成First-strand cDNA (fcDNA)。根据GenBank中登录的鸡的BF2基因胞外区序列,设计了含EcoRⅠ和 HindⅢ 酶切位点的2对引物,分别扩增鸡BF2的胞外区基因。PCR产物经纯化回收后,插入到含LacZ基因的原核克隆载体pGEM-T Easy中,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞,经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆。再把所克隆的片段亚克隆到表达载体pMAL-p2X vector,构建重组质粒p2X/BF2(1-5)。将重组表达质粒转化入大肠杆菌TB1感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果表明,本研究克隆了5类鸡BF2的胞外区基因序列,试验结果证明本研究已成功克隆并可溶性表达了5类BF2胞外区蛋白质分子,全长约807~819 bp,编码约269~273个氨基酸。采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化,并对纯化的表达产物进行了western blot鉴定。本研究为进一步利用BF2的胞外区在体外构建MHC Ⅰ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础。  相似文献   

17.
Representative strains of EHV isolated from an aborted foetus and from a horse with rhinopneumonitis in New Zealand had restriction endonuclease DNA fingerprints typical of those usually associated with these syndromes elsewhere and now designated EHV1 and 4 respectively. EHV1 was isolated from the brain and spinal cord of a 4-year-old gelding that died of myeloencephalitis. A mare on the same farm, at about the same time as the gelding developed myeloencephalitis, aborted and EHV1 was isolated from the tissues of the aborted foetus. Restriction endonuclease DNA fingerprints of the viruses isolated from myeloencephalitis and abortion were indistinguishable by Bam HI but were distinguishable using Bgl I, Pvu II, Xho I and Hind III. The restriction endonuclease DNA fingerprints of 3 EHV1 strains known to cause myeloencephalitis were compared with each other and with EHV1 strains not known to be associated with myeloencephalitis. The Bgl I Pvu II and Hind III DNA fingerprints of the 3 myeloencephalogenic strains appear distinguishable from non-myeloencephalogenic strains. Abortion was induced in a mare by intrauterine inoculation of EHV4. The Bam HI, Bgl I, Pvu II, Xho I and Hind III restriction endonuclease DNA fingerprints of the inoculum virus were indistinguishable from virus recovered from the foetus. It was concluded that passage of the virus through the foetus did not detectably alter the restriction endonuclease DNA fingerprint.  相似文献   

18.
C型产气荚膜梭菌β毒素基因克隆与核苷酸序列分析   总被引:5,自引:0,他引:5  
用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pB12中扩增出了0.95Kb的β毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHI和EcoRI对其进行双酶切处理,最后将其定向连接在事先经同样内切酶处理的载体pET-28c(+)中的相应位点上,转化至受体菌BL21(DE3)中。经BamHI和EcoRI双酶切分析和核苷酸序列分析,证明重组质粒pXETB2含有产气荚膜梭菌β毒素基因,确定了其全部的核苷酸序列,并且具有正确的阅读框架  相似文献   

19.
通过T-A克隆技术,成功地构建了克隆载体pMD-18T-EGF,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切克隆质粒pMD-18T-EGF后,回收EGF基因,并将此基因定向克隆至相同双酶切回收后的pET32a原核表达载体中,获得重组质粒pET32a-EGF。经限制性内切酶分析和PCR鉴定,结果表明:成功地构建了原核重组质粒。  相似文献   

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