量子点荧光免疫法快速测定氧氟沙星

研究建立了基于量子点(quantum dots,QDs)的间接荧光免疫吸附测定技术(competitive fluorescence linked immunosorbent assay,cFLISA),并应用于牛奶中的氧氟沙星(ofloxacin,OFL)抗生素残留检测中.首先将量子点同抗氧氟沙星抗体通过生物素-亲和素系统进行连接,优化连接条件进行并测定连接效率.其次对cFLISA测定条件进行了优化,并确定了合适的检测时间≤60min.所建立方法的最低检测限(IC90值)和IC90值分别为0.25 ng·mL-1和1.16 ng·mL-1.cFLISA针对实际牛奶样品中氧氟沙星抗生素残留回收率测定结果为88.2%～105.3%,Cv值为7.3%～10.9%,同传统酶联免疫吸附测定(ELISA)方法相比十分接近.结果表明,本研究所建立的cFLISA方法可以替代传统的ELISA方法应用于牛奶中氧氟沙星抗生素残留的实际测定中.更重要的是,新方法对于针对不同药物残留的多重测定技术的建立具有一定的参考价值.     

酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量

[目的]探索水产品中氯霉素残留量的快速检测方法。[方法]采用酶联免疫法(ELISA)测定鱼、虾类水产品中氯霉素的残留量。[结果]检测的20个水产品中有1个阳性样品,其他样品均为阴性。ELISA方法的检出限为0.01μg/kg,平均回收率为76.1%~90.7%,相对标准偏差(RSD)≤3.21%,在0.025~1.600 ng/ml范围内有良好的线性关系,相关系数为0.997 5。[结论]该检测方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于大批量水产品中氯霉素残留的快速检测。     

动物组织中氯霉素残留快速检测方法研究

采用酶联免疫分析法(ELISA法)对动物组织中氯霉素的残留检测进行了研究。氯霉素浓度在0.05-4ng/mL范围内呈线性关系,线性方程为y=-0.321x 0.8193,R2=0.9985。IC50为1.0ng/mL,样品添加回收率为67%-98%,变异系数小于5.5%,最低检测限为0.05 ng/mL。乙酸乙酯提取法回收率为73%-98%,乙腈水提取法回收率为67%-94%。     

ELISA方法检测氯霉素的质量评价

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的固相酶免疫测定方法,但ELISA的影响因素较多,必须加强质量控制才能充分发挥其方法学的优点。为了检测ELISA方法在检测氯霉素残留中的应用效果,从精密度、灵敏度、特异性、板内差异多个角度对酶联免疫测定法进行质量评价。结果表明：灵敏度可达到小于0.025 ng/mL,检测范围为0.025～100 ng/mL,板内变异系数CV〈20%,与结构相似的甲砜霉素、氟甲砜霉素没有交叉反应。     

化学发光免疫分析与酶联免疫分析法检测水产品药物残留的比较研究

对检测水产品中呋喃唑酮代谢物( AOZ)和氯霉素( CAP)药物残留的两种方法---化学发光免疫分析( CLEIA)和酶联免疫分析( ELISA)法进行了比较研究。结果表明：两种药物残留检测中, CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两种免疫分析法的添加回收率均具有很好的相关性;用CLEIA法检测AOZ的检出限为0.01μg/kg,线性范围为0.01~2.56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.025~6.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.10~1.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.05~4.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数( RSD)为5.5%~11.3%,批间RSD为12.3%~20.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%~11.1%,批间RSD为15.6%~18.3%。研究表明,用CLEIA法检测水产品药物残留较ELISA法检出限低、线性范围宽,虽然检出CAP和AOZ的变异系数均高于ELISA法,但仍符合《兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案参考评判标准》的规定。     

氯霉素荧光纳米颗粒免疫层析法的建立

本研究将荧光纳米颗粒与氯霉素单克隆抗体共价偶联在一起,用该颗粒代替常用的金标颗粒标记氯霉素单克隆抗体,以竞争法作为反应模式来制备免疫层析试纸条。在紫外灯下观察免疫层析试纸条上经免疫反应而产生的质控线和检测线上的荧光信号,利用荧光强度来半定量检测动物源性食品中的氯霉素残留。所制备的检测氯霉素的免疫层析试纸条只与氯霉素有交叉反应,与非目标检测物之间没有交叉反应。该试纸条的肉眼检测灵敏性为0.5ng/mL,满足相关检测标准要求。通过比较检测线和质控线之间的亮度,能够对氯霉素进行半定量检测。本研究建立的用于氯霉素残留检测的免疫层析法,具有简便、快速、灵敏度高的特点,有广阔的应用前景。     

动物性食品中4种药物残留的检测

为了解北京地区动物性食品中兽药残留情况,随机抽查北京京郊几家猪场、鸡场和商场,检测4种药物(盐酸克伦特罗、氯霉素、磺胺类、氯羟吡啶)的残留情况。盐酸克伦特罗检测采用酶联免疫法(ELISA),取206份猪肝、240份猪尿测定盐酸克伦特罗残留,阳性数分别为19、23,阳性率分别为9.22％、9.58％;氯霉素检测采用酶联免疫法,取150份鸡肝测定氯霉素残留,阳性数为15,阳性率为10.00％。磺胺类药物和氨羟吡啶检测采用高效液相色谱法(HPLC),取50份猪肝、50份鸡肝测定磺胺类药物残留,结果全为阴性;取100份鸡肝测定氯羟吡啶残留,结果全为阴性。检测结果不容乐观。     

金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测

[目的]为细菌毒素的检测提供理论依据。[方法]以BALB/c小白鼠为免疫对象,以自制的高纯度金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)为免疫抗原,研究其抗体的产生过程和效价,并建立SEB的间接竞争ELISA检测方法。[结果]自制SEB纯度较高,能较好地刺激动物产生抗体。以自制SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,其最高效价为1∶100 000。SEB浓度在1~1 000 ng/ml范围内,竞争抑制率与SEB浓度的对数值呈显著线性关系。当SEB的浓度为5~500 ng/ml时,随样品中SEB浓度的增加,污染样品的回收率变异系数减小,检测准确度提高。[结论]对不同污染程度的牛奶样品,利用间接竞争ELISA法检测其SEB残留的灵敏度远远高于生化法。     

基于碳量子点荧光恢复检测牛奶中多巴胺残留

[目的]本文旨在建立一种牛奶中兽药残留检测方法。[方法]选用常见粮食小麦、大米、玉米作为碳源,用水热法合成一种新型荧光探针。利用碳量子点与铁离子结合荧光猝灭,向猝灭体系中加入盐酸多巴胺,碳量子点荧光强度恢复的机理,在λex=365nm、λem=440nm处检测碳量子点荧光强度,通过观察碳量子点的荧光强度变化定量分析牛奶中的盐酸多巴胺含量。[结果]盐酸多巴胺在1～110μmol·L~(-1)浓度范围内与碳量子点荧光强度变化呈线性关系,检出限为0.3μmol·L~(-1),牛奶中的回收率为82.38%～104.2%,相对标准偏差为1.09%～2.01%。[结论]运用碳量子点荧光信号"开-关-开"原理实现对牛奶中兽药盐酸多巴胺的快速、高灵敏度检测,建立了一种新的痕量物质检测方法。     

氯霉素人工多克隆抗体的制备、纯化与特性分析

通过合成氯霉素完全抗原,制备氯霉素的多克隆人工抗体,建立氯霉素(CAP)的免疫学检测方法。采用重氮法合成氯霉素完全抗原,以氯霉素牛血清白蛋白(CAP-BSA)免疫大耳白家兔,用ELISA方法进行鉴定和特性分析。结果显示,该抗血清与链霉素、青霉素、四环素等常见抗生素的交叉反应率均小于2.1%,IC50为13.65 ng/ml,检测限达到1.01μg/L。获得了选择性好、特异性较高的氯霉素特异抗体,可用于氯霉素的快速定量检测。     

食品中氯霉素检测方法研究进展

本文就氯霉素残留检测方法,包括微生物学法、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、色谱-质谱联用法、放射免疫分析法(RIA)、酶免疫分析法、金标试纸条法等进行了阐述,分析了其优缺点及适用性.     

ELISA检测蜂王浆氯霉素残留的快速前处理方法

为获得一种能快速检测蜂王浆中氯霉素残留的前处理方法,采用改良的0.1mol/L Tris-TBE(pH=8.0)溶液处理蜂王浆,结合乙酸乙酯提取氯霉素(CAP),处理时间约25min。ELISA检测样品的OD450值明显低于试剂盒法,通过添加标准CAP溶液对改良法进行验证。结果表明,改良法提取的样品对不同CAP质量浓度表现出明显的OD450值变化,与添加前比较差异显著(P<0.05),排除处理过程存在干扰显色的因素。改良法检测相同样品的平均相对标准偏差为1.29%,完全符合目前国际上氯霉素残留检测的要求。     

免疫分析技术在兽药残留检测中的应用

食品中的兽药残留物,如抗生素、驱肠虫剂、β-受体兴奋剂和类固醇等对消费者的健康有极大危害。免疫分析法能对大量不同化合物进行筛查,该方法快速、灵敏,且效益高,已经被广泛应用于筛查各种兽药残留,可以显著减少常规分析的取样需求量。该文综述了用于兽药残留检测的免疫分析技术的常见方法、基本原理与应用。     

生物膜干涉技术快速定性检测牛乳中喹诺酮类药物残留

[目的]基于生物膜干涉技术建立一种快速检测牛乳中喹诺酮类抗生素残留的方法。[方法]通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定环丙沙星-BSA偶联物,结合纳米金-喹诺酮类抗生素单克隆抗体偶联物,建立了检测牛乳中喹诺酮类抗生素的方法。[结果]所建立的检测方法具有良好的灵敏度,比免疫层析法至少高出1倍。该检测方法还具有良好的特异性．与浓度1000ng／ml的黄曲霉毒素M1、青霉素G、头孢噻呋、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应。该方法还具有良好的重复性,不同基质牛乳检测对检测结果无显著影响。分别采用免疫层析试纸条和建立的金标记BLI检测方法检测43份牛乳（原奶）样品中的喹诺酮类抗生素残留,二者检测结果一致。[结论]生物膜干涉技术检测牛乳中的喹诺酮类抗生素为一种简便、快捷的检测方法,可以用于牛乳中喹诺酮类抗生素残留的快速定性检测。     

定量测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物残留的ELISA检测试剂盒的可靠性

研究定量测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物残留的酶联免疫(ELISA)检测试剂盒的准确性。通过将ELISA样本前处理进行优化,计算添加平均值、回收率及变异系数,并对国标方法和ELISA检测试剂盒测定结果进行t检验。当选择0.1mol/L Tris-HCl为样品稀释液、样本稀释倍数为1、试剂盒灵敏度为0.03μg/kg时,呋喃唑酮代谢物在各蜂蜜中添加0.1～0.3μg/kg的回收率为83%～97%,变异系数均低于5%,试剂盒检测限为0.03μg/kg,ELISA检测试剂盒与国标法测定同一份蜂蜜的t0.05检验结果差异不显著。呋喃唑酮代谢物ELISA检测试剂盒经优化与仪器的符合率为100%,ELISA检测试剂盒测定蜂蜜中呋喃唑酮代谢物存在极高的准确度和精密度。     

抗微生物药物残留的免疫学检测技术研究进展

免疫检测技术是食品安全检测领域中应用广泛的技术之一,新的免疫检测技术不断应用于抗微生物药物残留检验中,有力地推动了抗微生物药物残留安全监测体系的建立。首先,对抗微生物药物人工抗原合成与抗体生产技术进行了论述,之后着重综述了量子点荧光免疫分析法、时间分辨免疫分析法、免疫传感器和免疫芯片检测技术近年来取得的研究进展,并对这些技术的未来发展进行了展望。     

用生物膜干涉技术快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留

[目的]采用生物膜干涉技术建立快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的方法.[方法]首先通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定氨苄青霉素-BSA偶联物,结合40 nm纳米金标记的β-内酰胺类抗生素受体,建立了检测牛乳中β-内酰胺类抗生素的方法.[结果]生物膜干涉技术检测牛乳中的β-内酰胺类抗生素的灵敏度比胶体金免疫层析试纸条的灵敏度高1倍.该技术还具有良好的特异性,与浓度为1 000 ng/ml的黄曲霉毒素M1、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应.[结论]研究表明,金标记BLI检测β-内酰胺类抗生素的定量范围较小,并不适用于实际生产中的定量检测,但却是一种简便、快捷的定性检测方法,可用于牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的快速检测.     

呋喃西林代谢物酶联免疫检测方法的建立

[目的]建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法。[方法]通过制备特异性强的单克隆抗体,采用间接竞争ELISA法建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法,并研制出对动物性食品中呋喃西林代谢物残留检测的试剂盒。[结果]该试剂盒标准曲线的IC50值为0.267 7μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本加标回收率范围为79.5%～95.6%,变异系数为7.6%～9.7%。在交叉反应试验中,对呋喃西林的交叉反应率为25%,与其他药物的交叉反应率均小于1%,表明该方法具有很强的特异性。[结论]该方法灵敏度、准确度、精密度均较高,能满足兽药残留的检测要求,且检测时间短(45 min),样本前处理简单、检测成本低,适合于大量样本中呋喃西林代谢物残留检测的快速筛选。     

应用生物素-链霉亲和素的时间分辨荧光免疫分析检测玉米赤霉烯酮

采用基于生物素(Biotin)-链霉亲和素(Strepavidin)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立了快速灵敏的玉米赤霉烯酮(ZEN)检测方法.以strepavidin包被板条,加入生物素化的ZEN-BSA,结合在板条上的ZEN-BSA与标准/样本中的游离ZEN共同竞争限量的抗ZEN单克隆抗体,用稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠IgG进行示踪,建立了间接竞争的ZEN-TRFIA.该方法的检测灵敏度为0.2 ng/ml,测量范围是0.2～200.0 ng/ml,批内、批间变异系数分别为5.7%和8.3%,平均回收率为91.1%.与玉米赤霉醇的平均交叉反应是12.3%,与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应,说明该方法的特异性较好.相关试剂在4 ℃放6个月后各检测参数基本无变化,说明该方法稳定.样品同时用ZEN-TRFIA和商品ELISA试剂盒测定样品ZEN含量,两者的相关系数为 0.966 4,说明该方法测量准确.ZEN-TRFIA具有测量准确、检测灵敏度高、检测范围宽、操作简便、标记物稳定等优点,适合于ZEN大量筛查的应用.     

酶联免疫法检测盐酸克伦特罗的试验报告

盐酸克伦特罗酶联免疫反应测试盒适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的定量检测。克伦特罗作为一种主要的β-兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中,用以提高肌肉和脂肪的比例并加快生长速度。由于克伦特罗可作为肌肉舒缓剂用于人类疾病治疗,在畜禽中过量残留可能会对消费者造成危害,为此,被禁止在食品生产中应用。根据美国FDA和WHO规定,在肌肉和脂肪中克伦特罗的含量不能超过0.2ng/g,在肝脏和肾脏中其含量不能超过0.6ng/g。与传统的HPLC或GC-MS方法相比,酶联免疫方法具有操作简便、灵敏度高、成本低的优点。盐酸克伦特罗酶朕免疫反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速检测克伦特罗残留的方法,该试剂盒的特点包括4方面,第一,该试剂盒的提取方法能达到75%～95%以上的回收率,可以不需用有机溶剂并在10～30min之内完成提取过程。第二,高灵敏度(0.05ng/g);低检测下限(肉类/脂肪0.025ng/g,尿液0.05ng/ml,饲料0.2μg/kg)。第三,检测过程只需不到2h。第四,高重复性。