猪的21—羟化酶基因位点限制性片段长度多态性研究

采用纯种大约克和纯种二花脸猪血样提取基因组ＤＮＡ，分别用１１种限制必内切酶消化，以非放射性狄高辛试剂盒标记４．８ｋｂ２１－羟化酶（ＣＹＰ２１）基因方为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交对猪的ＣＹＰ２１基因位点的限制性片长度多态性（ＲＦＬＰＳ）进行了研究。结果在ＢａｎＩ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＴａｑⅠ５种限制性内切酶位点检测出了ＰＦＬＰＳ，且ＢａｎⅠ和ＫｐｎⅠ酶切位点的多态性为首次发现；而在其他     

遗传工程稻叶绿体psbA基因的克隆及结构分析

分别制备了遗传工程稻ＧＥＲ－１及其ＤＮＡ供体（慈利玉米）、ＤＮＡ受体（水稻湘早籼８号）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ），对三者之间的多种限制性内切酶酶切图谱比较表明，ＧＥＲ－１的ｃｐＤＮＡ基本与ＤＮＡ受体水稻一致．进一步克隆了ＣＥＲ－１的ｐｓｂＡ基因，并构建其酶切图谱、测定其３′非翻译区（３′ＵＴＲ）序列，初步认为该基因的序列结构与水稻相同，从而排除了ＧＥＲ－１的性状变异是由其ｐｓｂＡ基因发生变化所致的可能．此外，对叶绿体ＤＮＡ的制备及酶切消化作了较深入的探讨     

遗传工程稻叶绿体psbA基因的克隆及结构分析

分别制备了遗传工程稻ＧＥＲ－１及其ＤＮＡ供体（慈利玉米）、ＤＮＡ受体（水稻湘早籼８号）的叶绿体ＤＮＡ（ｃｐＤＮＡ），对三者之间的多种限制性内切酶酶切图谱比较表明，ＧＥＲ－１的ｃｐＤＮＡ基本与ＤＮＡ受体水稻一致。进一步克隆了ＣＥＦ－１的ｐｓｂＡ基因，并构建其酶切图谱、测定其３＇非翻译区（３＇ＵＴＲ）序列，初步认为该基因的序列结构与水稻相同，从而排除了ＧＥＲ－１的性状变异是由其ｐｓｂＡ基因发生变化所致     

用M13小卫星探针发现猪DNA指纹

用Ｍ１３ｍｐ１８含基因Ⅲ区的ＣｌａⅠ限制性酶切片段为探针，与猪基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｆⅠ限制性酶切产物进行杂交，发现了ＤＮＡ指纹，平均图带数为１７．３１条。说明Ｍ１３ｍｐ１８小卫星序列可作为猪ＤＮＡ指纹图谱分析的探针。     

马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲＩ，ＰｓｔＩ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｄ（ｇＤ）基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用Ｃｌａｌ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａＩ将ＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ，并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第９天的细胞上清，并用其感染原代ＣＥＦ，在感染后第４天和第６天收集ＣＥＦ。提取ＣＥＦ基因组ＤＮＡ，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ｄｉｇ）标记ｇＤ基因片段作为探针，通过ｄｏｔｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测基因转移情况。结果表明，转染的重组ＲＣＡＳ不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒，而且成功地将ｇＤ基因与病毒前ＤＮＡ一起整合在ＣＥＦＤＮＡ中     

用聚合酶链反应技术鉴别猪的氟烷基因型

选择３３头猪（１４头基因型已知，１９头未知）提取血液ＤＮＡ，进行聚合酸链反应扩增得到含有突变位点的６５９ｂｐ的ＣＲＣ基因特异片段，经过ＨｈａＩ酶切和电泳检测，可以鉴别氟烷基因型。１４头猪通过氟烷测验与氟烷测交鉴别的基因型与ＰＣＲ－酶切鉴别氟烷基因型结果完全吻合。     

德国骑乘马线粒体DNA的限制性酶分析

通过５种限制性内切酶获得了１３匹德国骑乘马线粒体ＤＮＡ的切割图谱。结果发现，限制性消化产生了１（ＥｃｏＲ１），３（ＢｇＩ Ⅱ），４（ＢａｍＨⅠ）或５个（ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ）限制性片段，并确定了所有片断的分子大小。ｍｔＤＮＡ总的大小平均为（１６．４８±０．１０）ｋｂ，除ＢａｍＨⅠ外，ｍｔＤＮＡ的限制性切点对于所有的个体是完全一致的。用ＢａｍＨⅠ检测到ｍｔＤＮＡ的多态性，通过带谱分析推断，德国骑乘     

用胞质线粒体DNA电泳分析对玉米YⅡ—1型不育胞质归群

以玉米同核异质不育系为材料（自交系Ｂ７７为核背景），应用限制性核酸内切酶消化不育胞质ＹⅡ－１型、Ｓ群、Ｔ群、Ｃ群和正常可育胞持（Ｎ）的线粒体ＤＮＡ，并经 糖凝胶电泳。试验结果初步表明：ＹⅡ－１型不育胞质线粒体ＤＮＡ电科谱与Ｓ群有显著差异，酶切电泳图谱与Ｔ群不育胞质也有较大差别，与Ｃ群不育胞质有微小差异。因此，有待应用ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ技术对ＹⅡ－１不育胞质作进一步分析。     

应用RT-PCR和RFLP分析肾型鸡传染性支气管炎病毒基因型

对来自浙江省３个不同地区的肾型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ－ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ）和参考株Ｈ１２０,通过蛋白酶Ｋ－ＳＤＳ处理、酚－氯仿法抽提基因组ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增得到了预期为１．７２ｋｂ的Ｓ１蛋白基因ｃＤＮＡ,用限制性内切酶ＨａｅⅢ,ＰｓｔＩ,Ｋｓｐ６３２１对Ｓ１基因ｃＤＮＡ进行ＲＦＬＰ分析。结果表明ＪＤ,ＤＱ,ＨＹ毒株的ＲＦＬＰ带型相同,但与经典的肾型ＩＢＶ代表株（即Ｔ株、Ｇｒａｙ株、Ｈｏ     

牛生长激素cDNA的克隆与序列分析

从平脑垂体中分离总ＲＮＡ，经ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）一纤维素柱纯化ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ技术扩增牛生长激素（ｂＧＨ）ｃＤＮＡ序列，长度为６２０ｈｐ，将ＰＣＲ产物克隆于ｐＵＣ１９Ｓｍａｌ位Ⅰ点转化大肠杆菌ＤＨ５α，经蓝白斑筛选，获得重组克隆，分离重组质粒，经限制性内切酶酶切分析后，进行序列分析。结果表明，一质粒中所含克隆片段为ｂＧＨｃＤＮＡ全序列，与国外所发表的ｂＧＨ核旮酸序列基本相同     

大肠杆菌焦磷酸酶基因的克隆和序列分析

按ＣＴＡＢ法提取大肠杆菌Ｋ－１２的ＤＮＡ,应用ＰＣＲ技术获得目的基因片段（ＰＰａｓｅ基因）,低熔点胶回收后,在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下,将目的基因克隆到ｐＵＣｍ－Ｔ载体上,并转化ＪＭ１０９感受态菌中。转化获得的克隆提取质粒ＤＮＡ,０．８％琼脂糖凝胶电泳分析,并进行ＰＣＲ扩增鉴定、序列分析证明插入片段确为ＰＰａｓｅ基因。本文用ＰＣＲ技术扩增并克隆大肠杆菌焦磷酸酶基因,为导入甜菜选育高含糖量品种奠定基     

鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定

利用ＩＢＶ全长Ｓ１基因特异性引物,以纯化的３个标准株Ｍ４１、Ｈ５２、Ｔ和６个地方分离株（ＱＤ、ＺＺ、ＧＺ、ＧＪ、ＤＬ和ＹＣ）的基因组ＲＮＡ为模板,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出预期大小约１．７３ｋｂｃＤＮＡ片段,经ＢＡＭＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切插入到质粒ｐＵＣ１８中,并在大肠杆菌ＪＭ８３中实现了克隆。对６个分离株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物进行ＨａｅⅢＲＦＬＰ分析,表明ＱＤ、ＴＪ属于Ｍ４１基因型,ＺＺ和ＧＺ与Ｔ基因     

猪ESR基因一个外显子DNA片段的分子克隆

参考人、鸡,鼠的ＥＳＲ基因序列,设计一对引物,采用ＰＣＲ技术扩增出猪的ＥＳＲ基因一段ＤＮＡ片段,将该片段克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ质粒载体中,重组质粒经ＰＣＲ鉴定和酶切分析确定克隆成功,经测序结果分析确定该片段为猪ＥＳＲ基因与其他动物第４号外显子相对应的一段ＤＮＡ片段,大小为３３２ｂｐ。     

人胎肝cDNA中EPO基因的克隆

从人胎肝中提取得总ｍＲＮＡ，然后通过ＲＴａｓｅ反转录得到ｃＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术克隆ＥＰＯ基因（全长为５２７ｂｐ），经过计算机分析已知ＥＰＯ基因保守区段的限制性内切酶位点，选择ＢｇｌＩ和ＨｉｎｃⅡ进行酶解，确认所获得ＤＮＡ片段为ＥＰＯ基因。     

用RAPD技术对4种螺原体菌DNA多态性的初步研究

用随机扩增的多态性ＤＮＡ技术对螺原体３个血清组中的４个菌株进行ＤＮＡ多态性研究。ＰＣＲ扩增引物选自Ｏｐｅｒｏｎ随机引物试剂盒中Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、组的１２０个引物。４个菌株为２３－６，ＣＲ－１和ＣＨ－９１－１，ＣＣＨ。     

鸡贫血病毒衣壳蛋白基因的PCR扩增和克隆

通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增鸡贫血病毒（ＣＡＶ）衣壳蛋白基因（１，４ｋｂ），并将此基因克隆进ＰＵＣ－１８载体中。通过原位杂交、酶切分析、Ｓdisplay statusdisplay status     

防御素基因的化学合成及克隆

将防御素基因分成４个寡聚核苷酸片段，采用固相亚磷酰胺法在ＤＮＡ合成仪上化学合成。片段２和４分别用Ｔ＿４多聚核苷酸激酶将５′端磷酸化，４个片段等量混合，用Ｔ＿４ＤＮＡ连接酶连成一个１０９ｂｐ的双股ＤＮＡ片段，其两侧为ＢａｍＨＩ和ＳａｌⅠ粘性末端。把它与经上述双酶切的质粒ｐＵＣ１９连接，转化大肠杆菌ＤＨＳα。转化株经含Ｘｇａｌ青霉素平板初筛，质粒酶切分析以及ＰＣＲ专一性扩增，证实已获得完整的防御素基因克隆。为进一步表达防御素提供了材料．     

德国骑乘马线粒体DNA的限制性酶分析

通过５种限制性内切酶获得了１３匹德国骑乘马线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）的切割图谱。结果发现,限制性消化产生了１（ＥｃｏＲⅠ）,３（ＢｇｌⅡ）,４（ＢａｍＨⅠ）或５个（ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ）限制性片断,并确定了所有片断的分子大小。ｍｔＤＮＡ总的大小平均为（１６．４８±０．１０）ｋｂ．除ＢａｍＨⅠ外,ｍｔＤＮＡ的限制性切点对于所有的个体是完全一致的。用ＢａｍＨⅠ检测到ｍｔＤＮＡ的多态性,通过带谱分析推断,德国骑乘马的Ｂ型ｍｔＤＮＡ是由Ａ型ｍｔＤＮＡ通过突变产生１个新的切割位点进化而来。     

蒙古羊线粒体DNA限制性片断长度多态性研究

用ＡｐａⅠ等１５种识别６碱基的限制性内切酶研究了２０只蒙古羊的ＲＦＬＰ。结果表明,在所研究的个体中共检测到３２个酶切位点,１６种限制性态型,其中Ｂｇ１Ⅰ表现出多态,ＸｈｏⅠ无切点。１６种限制性态型可归结为２种基因单倍型,即单倍型Ⅰ（Ｂｇ１Ⅰ－Ａ）、单倍型Ⅱ（ＢｇⅠ－Ｂ）。线粒体ＤＮＡ多态度π值为０．０１３％,表明蒙古羊线粒体ＤＮＡ多态性比较贫乏。     

鸡传染性支气管炎腺胃病变型分离株H_(95)免疫原基因的克隆与鉴定

用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从纯化的腺胃病变型鸡传染性支气管炎分离株病毒基因组ＲＮＡ扩增出约１．７ｋｂ的ＩＢＶＳ１基因。将该扩增产物于ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ位点克隆到ｐＵＣ１８质粒载体中，对重组质粒载体进行酶切分析，得到与Ｓ１基因预期大小一致的插入片断。经Ｓ１探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测，表明插入片断为Ｓ１基因。利用该法筛选到４株阳性重组质粒转化子。