细胞自噬与多囊卵巢综合征研究进展

多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）是导致女性月经不调、排卵障碍性不孕的主要原因,确切发病机制尚未阐明。自噬可以发生在卵泡发育的各个阶段,卵泡颗粒细胞自噬相对活跃,具有促性腺激素依赖性和细胞特异性。卵泡颗粒细胞自噬稳态平衡以维持卵巢功能,调控卵泡发育,影响胚胎质量和妊娠结局。PCOS卵泡颗粒细胞自噬活性过高,自噬相关基因表达过强,与PCOS卵泡发育异常、内分泌代谢紊乱、临床自然流产率高和辅助生殖中发生卵巢过度刺激综合征风险增高密切相关,可能是PCOS发病的重要机制。补肾中药通过下调PCOS卵泡颗粒细胞过度自噬,改善卵巢功能,维持机体阴阳平衡,但具体作用机制亟待进一步阐明,为PCOS、不孕症等妇科疑难病症临床诊疗提供新思路。     

羔羊卵巢AMH的免疫组织化学分析

为探讨AMH在羔羊和成年羊卵巢中时间和空间表达变化,揭示卵泡生长发育调控的机制。收集1月龄羔羊和正常成年羊卵巢,采用HE染色观察卵巢的组织学特征,免疫组化法检测绵羊卵巢AMH蛋白表达分布,RT-PCR技术分析卵巢卵丘细胞中AMH基因的表达变化。结果显示,卵巢HE染色后,对外源激素处理有反应的卵巢存在大量的大直径卵泡,且无中等卵泡和小卵泡,也没有黄体化和排卵;对外源激素没有反应的卵巢仅存在原始卵泡和少量的初级卵泡,无有腔卵泡。免疫组化结果显示,AMH存在于生长期的腔前卵泡和小的有腔卵泡,以及卵丘细胞,大多原始卵泡无AMH的表达,而在原始卵泡向初级卵泡转变,外层的颗粒细胞由扁平向柱状转变时AMH有表达,颗粒细胞存在表达AMH和不表达AMH 2种类型。RT-PCR结果显示,羔羊卵丘细胞的表达量高于成年羊。AMH可能参与卵泡发育的启动、向促性腺激素依赖期的转变等过程的调控,其功能作用还有待于深入研究。     

AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达

本研究旨在分析AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达特征,为水禽卵泡发育的分子机制研究积累基础资料。以连城白鸭为研究对象,通过定量PCR技术分别检测了卵巢不同等级卵泡中AMH基因及其相关调控基因的表达情况。结果表明,随着卵泡的发育,AMH及其相关基因AMHR2、BMP6、SF1、GATA4和WT1的表达量逐渐降低,而CYP19A1基因的表达量逐渐升高,SOX9和FSHR基因的表达量保持不变。我们推测AMH基因在鸭等级前卵泡中的高表达量可能有助于维持颗粒细胞未分化的状态,且可能是通过抑制FSHR信号通路来实现的。     

丹栀逍遥散对多囊卵巢大鼠血清T、AMH及卵巢局部AMH蛋白表达的影响

目的 探讨丹栀逍遥散对多囊卵巢（polycystic ovaries,PCO）大鼠血清睾酮（testosterone,T）、抗苗勒管激素（anti-mulerian hormone,AMH）及卵巢局部AMH蛋白表达的影响。方法 SD雌性大鼠以颈背部皮下注射脱氢表雄酮（dehydroepiandrostexone,DHEA）溶液构建PCO大鼠模型,判定造模成功后再随机分成模型组、达英-35组、丹栀逍遥散组,并设空白组,分别用蒸馏水、达英-35及丹栀逍遥散对大鼠灌胃给药,连续灌胃21 d,停药7 d为一疗程,灌胃3个疗程后处死大鼠,采用放射免疫法测定T、AMH,免疫组织化学法检测PCO大鼠卵巢局部AMH蛋白表达。结果 与模型组比较,丹栀逍遥散组血清T、AMH水平及AMH蛋白表达强度均下降（P<0.01或P<0.05）。结论 丹栀逍遥散治疗高雄激素血症（hyperandrogenism,HA）可能是通过降低PCO大鼠血清T、AMH水平,降低卵巢局部AMH蛋白表达强度,对AMH进行良性调节,从而改善HA。     

卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关性

细胞自噬是哺乳动物细胞物质代谢的一个重要机制,与细胞凋亡共同参与卵巢卵泡的发育和闭锁,并发挥重要的作用。近年研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号通路参与卵巢疾病的发生。PI3K和AKT的过度激活可使原始卵泡过早发育以及卵泡过快凋亡,卵巢颗粒细胞作为卵泡发育重要的支持细胞,其功能的减退或凋亡很可能引发一系列女性内分泌方面的疾病。FOXO3a转录因子是PI3K/AKT信号通路下游的重要靶蛋白之一,参与抗增殖和凋亡。本文就关于卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关进展加以综述。     

生长分化因子9在兔卵巢中的免疫组织化学定位

［目的］探讨生长分化因子9（GDF9）在兔卵巢卵泡发生过程中的调控机制。［方法］采用免疫组织化学方法测定GDF9蛋白在兔卵巢中的表达定位情况。［结果］GDF9在原始卵泡中没有表达;在初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡卵母细胞及有腔卵泡颗粒细胞、透明带及卵泡液中均检测到GDF9蛋白;在黄体中也有GDF9的表达。［结论］GDF9不仅是卵母细胞分泌因子,而且是颗粒细胞的分泌因子,其表达随兔卵巢中卵泡发生呈时空动态变化,在兔卵巢卵泡发生过程中发挥了重要作用,参与了黄体活动的调节。     

鲁西黄牛卵巢性繁殖障碍调控技术

本研究基于鲁西黄牛卵巢性繁殖障碍引起的原因分析、从其发病机制和临床诊疗等方面探讨了该类患牛卵巢机能不全、卵巢囊肿、卵巢萎缩坏死、卵泡壁显著增生、卵泡发育中断等具体病情,为合理调控母牛卵巢性繁殖障碍提供参考依据。     

CTNNB1对猪卵巢颗粒细胞的调控

【目的】卵巢颗粒细胞的增殖和分化是原始卵泡生长启动的关键因素,卵巢颗粒细胞过度凋亡是卵泡闭锁的主要原因,因此卵巢颗粒细胞的功能对卵泡生长发育、排卵、激素分泌等至关重要。研究通过探究连环蛋白β1（catenin beta 1, CTNNB1）对猪卵泡发育过程中颗粒细胞的增殖、凋亡及类固醇激素分泌等功能的影响,为猪卵泡发育的分子调控机制研究提供参考。 【方法】利用RNA抽提、实时定量PCR（Quantitative real time PCR, qRT-PCR）等方法,构建CTNNB1在母猪卵巢、肌肉、大脑等9个组织的表达谱;检测母猪性成熟过程中卵巢组织和小（≤3 mm）、中（3—6 mm）、大（≥6 mm）卵泡颗粒细胞中CTNNB1的表达情况。构建CTNNB1的真核表达载体及合成siRNA,转染至猪卵巢颗粒细胞,采用EdU、Annexin V- FITC/PI双染、ELISA等方法,检测CTNNB1对颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌的影响,以及对类固醇激素合成通路重要基因转录表达的影响。【结果】与肌肉、大脑等组织相比,CTNNB1在卵巢中mRNA表达水平最高。性成熟母猪卵巢中CTNNB1转录水平显著高于性成熟前和性成熟后的母猪;卵巢卵泡中CTNNB1转录和蛋白水平随卵泡发育明显上调;且卵巢颗粒细胞中CTNNB1转录和蛋白水平也随卵泡的发育逐渐上调。更重要的是,CTNNB1显著促进颗粒细胞增殖,抑制颗粒细胞凋亡;CTNNB1能够上调CYP1A1和HSD17B7的转录水平,下调CYP11A1、ESR1、ESR2、FSHR、LHR和NR5A1等类固醇激素合成相关基因的转录水平,进而促进颗粒细胞雌激素的分泌,抑制颗粒细胞雄激素和孕激素的分泌。【结论】本研究证实CTNNB1可能通过促进颗粒细胞增殖及雌激素的合成和分泌,抑制颗粒细胞凋亡及雄激素、孕激素的合成和分泌,进而促进卵泡的生长发育。     

八段锦对多囊卵巢综合征患者体征、性激素及卵巢超声的影响

目的 探究八段锦对多囊卵巢综合征（PCOS）患者的体征、性激素及卵巢超声的影响。方法 将60例PCOS患者随机分为观察组与对照组各30例,两组均以低热卡饮食为基础,均不接受药物治疗,观察组有组织地进行八段锦运动6个月,对照组除日常活动外,不刻意进行体育运动。比较运动前后两组患者的体征、性激素水平以及B超下卵巢形态的变化。结果 观察组痤疮评分、体质指数（BMI）及腰臀比（WHR）较运动前及对照组均下降（P<0.05）,黄体生成素（LH）及其与卵泡刺激素（FSH）的比值（LH/FSH）、睾酮（T）水平较运动前及对照组降低（P<0.05）,B超双侧卵巢平均卵泡个数（MFN）较运动前及对照组减少（P<0.05）,但多毛评分、卵泡刺激素（FSH）、催乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E2）水平及B超双侧卵巢平均体积（MOV）较对照组及运动前差异无统计学意义（P>0.05）。结论 八段锦可以改善PCOS患者痤疮症状,降低BMI及WHR,降低LH/FSH、T水平以及改善卵巢形态,是一种有效的辅助治疗手段。     

补肾化癖方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞 CYP450表达的影响

〔摘要〕目的观察补肾化疲方对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞CYP450蛋白表达的影响〔方法 运用补肾化疲方对PCOS模型大鼠进行干预后,采用免疫组化法观察卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达〔结果模 型组与正常组比较,卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达在表达面积及表达强度上均低于正常组,差异具有统计学 意义(P<0.01);补肾化疲方中、高、低剂量组及妈富降组用药后,卵巢颗粒细胞的CYP450的蛋白表达明显升高,差 异具有统计学意义(P<0.01, P<0.05);其中补肾化疲方中剂量对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达效果 最佳、结论补肾化疲方能增强PCOS大鼠卵巢颗粒细胞CYP450的蛋白表达,调节卵巢内分泌失调,改善PCOS高 雄血症.逆转卵泡的发育异常.使排卵成功、     

匡继林教授治疗多囊卵巢综合征的辨治思路

匡继林教授基于多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）的发病病因病机,治疗PCOS遵循辨病为先、明确诊断,根据月经周期4个时期的不同生理特点及患者体质进行“辨疾病-辨时期-辨体质”的临床三维辨治。提出以“调肾本、和肝脾、益气血、行冲任、养胞宫、促进卵泡发育与排卵,进而恢复正常月经”的PCOS治疗大法,辨病辨证相结合、因时制宜、因人制宜,临床疗效显著。     

卵细胞的发生和调控

卵细胞在卵巢中进行减数分裂的过程叫作卵的发生,这个过程包括增殖期、生长期以及成熟期3个阶段.卵泡的发生包括卵泡的募集、选择和优势化,对于卵泡在发育的过程中出现这3个阶段的机理研究尚不是很清楚.卵泡发生的调节机制非常复杂,在此重点研究卵巢局部因子对卵母细胞发育的影响以及卵泡各结构间的相互影响,卵母细胞发育的过程中也出现了超微结构的改变.     

骨形态发生蛋白15在兔卵巢中的免疫组化定位

[目的]探讨BMP15蛋白在兔卵巢卵泡发生过程中的调控机制。[方法]采用免疫组织化学方法测定了BMP15在兔卵巢中的表达定位情况。[结果]BMP15蛋白在原始卵泡中没有表达,在初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡卵母细胞及有腔卵泡颗粒细胞和卵泡液中均有表达,在黄体溶解早期也有表达,但是在闭锁卵泡中的表达则受到抑制。[结论]BMP15参与了兔卵泡发育全过程,并且与黄体溶解机制有关;而在闭锁卵泡中,其低水平的表达可能是由其他因子所抑制,进而共同调节了卵泡的闭锁。     

花䱻抗缪勒氏管激素基因克隆、抗体制备及其对外源雌激素的响应

【目的】克隆花䱻抗缪勒氏管激素基因Amh,分析其序列特征及亚细胞定位,检测不同浓度雌二醇处理下的表达变化规律,为后续研究Amh基因的功能及其在卵巢发育中分子机制提供理论参考。【方法】基于花转录组文库测序结果,克隆Amh基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。构建重组表达质粒pET32a-Amh,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。通过免疫荧光技术检测荧光信号确定蛋白的亚细胞定位情况。同时,利用实时荧光定量PCR检测Amh基因在雌二醇处理后的表达情况。【结果】克隆的花䱻Amh基因cDNA序列全长为1849 bp,开放阅读框（ORF）为1671 bp,编码556个氨基酸残基。系统进化分析结果显示,花䱻Amh基因与斑马鱼、鲤鱼等鲤科鱼类Amh基因聚为一支,表明其亲缘关系较近。将纯化的AMH重组蛋白免疫小鼠以制备AMH多克隆抗体,通过酶联免疫方法（ELISA）检测其抗体效价为2.4×106以上,Western blotting检测显示抗体具有特异性。AMH蛋白在花卵巢颗粒细胞表达。利用不同浓度的雌二醇处理花䱻60 d后发现,低浓度雌二醇（100 μg/g）促进花䱻卵母细胞生长,卵巢内皮质液泡数量增多。经雌二醇处理后,卵巢中Amh基因的表达量降低,说明雌激素在卵巢发育中对Amh基因表达具有抑制作用。【结论】Amh基因含有TGF-β家族典型的结构域,在卵巢颗粒细胞表达,且响应雌激素的调控,可能在花䱻卵巢发育中发挥调控作用。     

大熊猫卵巢OB-Rb、NPY的蛋白表达与分布研究

为了探究瘦素长型受体(OB-Rb)与神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)在大熊猫生殖调控中的作用,运用HE法、免疫组化SABC法观察了5例大熊猫卵巢组织学结构及OB-Rb、NPY在卵巢的表达与分布。结果显示:大熊猫卵巢各级卵泡数量较少,尤以中晚期生长卵泡更甚,原始卵泡和闭锁卵泡相对多见。OB-Rb和NPY在卵巢上均有表达,其中OB-Rb主要分布在颗粒细胞、卵泡膜细胞及黄体的粒黄体细胞;NPY阳性纤维和产物不均匀分布于卵巢各个部位,呈串珠状或点状。NPY阳性神经纤维主要位于血管周围、卵泡、黄体以及颗粒细胞中。大熊猫卵巢卵泡数量少的特征可能与其生殖能力低下有关;OB-Rb和NPY参与了卵巢卵泡发育的调控。     

电针对PCOS模型大鼠性激素及卵巢组织TSP-1表达的影响

目的 探讨电针对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型大鼠的治疗作用,以及对卵巢组织中血小板反应蛋白-1（thrombospondin-1,TSP-1）表达的影响。方法 将32只雌性SD大鼠随机分为空白组10只、模型组12只、电针组10只,采用1 mg/kg来曲唑加l%羧甲基纤维素灌胃建立PCOS大鼠模型。治疗后检测大鼠血清睾酮（testosterone,T）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）水平,HE染色观察卵巢组织病理结构改变,免疫组化法检测卵巢组织中TSP-1的表达。结果 治疗后,电针组大鼠体质量增量和卵巢相对质量较模型组降低（P<0.01）,血清T、LH水平及LH/FSH均较模型组降低（P<0.01）,卵巢切片可见小囊状扩张卵泡较模型组减少,颗粒细胞层增厚;TSP-1表达于卵巢组织颗粒细胞和卵泡膜细胞的胞浆,模型组TSP-1表达量较低空白组降低（P<0.01）,电针组TSP-1表达较模型组升高（P<0.05）。结论 电针治疗可改善PCOS大鼠性激素紊乱状态,提高卵巢组织中TSP-1的表达,通过调节血管抑制因子、减少卵巢组织中血管新生、改善微循环以达到治疗PCOS的目的。     

多囊卵巢综合征与正常卵泡液中环状RNA的差异表达分析

收集江苏省扬州市苏北人民医院生殖中心接受辅助生殖技术治疗的女性患者卵泡液,分为多囊卵巢综合征(PCOS)组(n=3)和对照组(n=3),利用高通量测序技术检测样本中circRNA的表达差异,对筛选出的差异表circRNA的亲本基因进行GO、KEGG富集分析。以分析环状RNA在PCOS患者卵泡液中基因表达谱的差异,探究环状RNA在PCOS发病中的作用机制。结果表明:通过高通量测序技术对卵泡液circRNA表达谱的分析,上调的circRNA亲本基因有167个,下调的245个,无明显变化的有1 846个;差异circRNA亲本基因的功能富集,发现在微生物感染功能、氧化应激反应功能、神经系统病变功能等高度富集。这一研究提示多种circRNA在PCOS患者卵泡液中呈异常表达,这些表达差异的circRNA可能参与了PCOS的发病机制。     

增殖细胞核抗原在水牛腔前卵泡中的表达与卵巢组织定位

【目的】探讨在水牛中增殖细胞核抗原（PCNA）参与卵泡发生的时期及其在卵巢组织不同时期卵泡中的表达定位;【方法】采用石蜡切片结合免疫组化的方法对PCNA在卵巢组织中进行定位,利用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）技术检测PCNA在腔前卵泡中的表达情况。【结果】免疫组化结果显示：原始卵泡中的卵母细胞能检测到PCNA的表达,但颗粒细胞并未观察到PCNA的免疫染色;初级卵泡到次级卵泡,卵母细胞和颗粒细胞中均可检测到PCNA的表达,且在颗粒细胞中的表达有增强的趋势;有腔卵泡中,颗粒细胞、卵泡膜细胞及包围卵母细胞的卵丘细胞中都能观察到很强的免疫染色。定量表达检测结果显示：PCNA在原始卵泡、初级卵泡及次级卵泡中的表达呈上升趋势,并且有显著差异（43.50333±0.138338 vs 1.633804±0.093796 vs 1±0.012219 , P<0.01）;【结论】从初级卵泡开始在颗粒细胞中能检测到PCNA的表达,并且其表达随着卵泡的发育有明显的增强趋势,腔前卵泡中PCNA表达的QRT-PCR测定结果与免疫组化结果相一致,研究结果为阐明PCNA参与卵泡发生的分子调控机制奠定了基础。     

Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响

【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程，其中绵羊卵泡颗粒细胞（granulosa cells, GCs）的增殖，分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用，Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发挥重要作用，通过探究Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡GCs增殖凋亡的影响，为进一步研究Smad7在卵泡GCs增殖凋亡过程中的调控作用提供依据。【方法】选取4—6月龄未怀孕的晋中健康杜湖杂交母羊20只，屠宰后采集双侧卵巢组织，分离培养卵泡颗粒细胞，FSHR细胞免疫荧光鉴定，Smad7细胞免疫荧光的表达定位，CCK8法测定细胞增殖情况，绘制生长曲线；细胞传代后外源添加不同浓度Smad7激动剂积雪草苷（asiaticoside,AS）(0、100、200、400、600 ng·mL-1)培养绵羊卵泡GCs，选择AS最佳作用浓度处理二代颗粒细胞，采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平；合成3个siSmad7，转染至卵泡GCs中，选择干扰效果最佳的，采用实...     

优思明治疗多囊卵巢综合征32例疗效观察

目的 观察优思明治疗多囊卵巢综合征(PCOS)不孕的疗效.方法 32例PCOS患者采用优思明治疗4个月经周期,用药前后分别测定患者血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)水平;治疗4个月经周期后则进行促排卵治疗共32个周期,监测卵泡发育及排卵情况.结果 32例患者的LH、T、LH/FSH均显著降低(P＜...