17-β雌二醇诱导鲻雌性化的机制

用原位杂交和免疫细胞化学技术,对服用17 β雌二醇实验组和对照组幼年鲻脑各部和性腺进行芳香化酶的定位。结果发现,芳香化酶转录物和特异性蛋白在幼年鲻端脑(嗅球和大脑)、间脑、中脑和小脑是丰富的。在性别未分化时,芳香化酶免疫活性细胞在幼鲻脑各部的分布密度有显著的差异。在嗅球,对照组芳香化酶免疫阳性细胞的分布密度高于实验组,而在间脑、中脑和小脑实验组免疫阳性细胞数量比对照组多1～3倍,特别是下丘脑视前区芳香化酶的免疫阳性细胞数量尤占优势,提示芳香化酶在幼年鲻性分化中可能起关键的作用。另外,在性分化后,芳香化酶免疫活性还定位在卵巢颗粒细胞和精巢间质细胞与足细胞。同时,免疫阳性物质也定位在卵巢和精巢的生殖细胞。这些结果揭示了17 β雌二醇诱发幼鲻雌性化的机制可能是通过芳香化酶的介导,本研究首次提供形态学新的证据。最后,文中还讨论了芳香化酶在鲻性腺发育中可能的生理作用。     

17β－雌二醇诱导鲻鱼雌性化的机制：芳香化酶和雌激素受体双染定位研究

用免疫细胞化学双重染色技术和鼠抗人芳香化酶抗体、兔抗人雌激素α受体与β受体亚型(ER-α和ER-β)抗体、兔抗人雌激素(E2)抗体，对鲻鱼(Mugil cephalus)脑各部位进行定位研究。结果显示，芳香化酶和E2、芳香化酶和ER-α、芳香化酶和ER-β、ER-α和E2的双染免疫活性物质分布在鲻鱼嗅脑、大脑、间脑和小脑的神经细胞的胞核或胞质及其突起或神经纤维上。值得指出的是，鲻鱼下丘脑视前区芳香化酶免疫活性细胞上共存有雌激素α受体与β受体亚型，提示E2诱发鲻鱼雌性化的作用机制是，E2先与芳香化酶样神经细胞上的雌激素受体结合，而后激发与性分化相关的芳香化酶基因的表达。     

17α-甲基睾丸酮诱导白斑狗鱼性逆转初步研究

实验以白斑狗鱼(Esox lucius)同一家系人工授精孵化的仔鱼为研究对象,用经浓度为20 mg/L 17α-甲基睾丸酮(17α-MT)浸泡的饵料分别在仔鱼生长的不同时期(出膜10、20、30、40 d)投喂,持续投喂30 d,待仔鱼培育至7月龄将其解剖取出性腺,进行组织学观察。结果显示:投喂17α-MT对其有显著致死效应;在10d喂药组出现较高的雄性率(40.8%),其它3个试验组雄性率相对较低,而对照组雄性率仅为26.3%,由此推断白斑狗鱼性腺分化转雄的时间节点在出膜10~20 d。在试验过程中发现白斑狗鱼性腺分化在稚鱼阶段存在精巢组织与卵巢组织共存现象,根据其性腺的组织学特征推断白斑狗鱼性腺分化方式可能是未分化型雌雄异体型。     

全雌鲻鱼培育的研究

研究了性腺未分化年幼鲻鱼，通过口服不同剂量的17β-雌二醇控制其雌性化。研究结果表明，高剂量组被诱导为全雌鲻鱼，低剂量组雌性率达90％，而对照组则为雄鱼。雄性性分化早于雌性。17β-雌二醇在肌肉和胃肠道残留量低，残留时间短。     

17β-雌二醇诱导黄颡鱼雌性化的研究

该研究通过对17β-雌二醇(E2)的投喂方式和投喂时间进行比较,探索了XY全雄黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)的雌性化方法,进而建立3个家系(XY♀×XY♂),结合性别分子标记对黄颡鱼雌性化诱导的成活率和性逆转率进行了对比研究。结果显示,卤虫(Artemia sp.)组从开口第1天进行诱导的性逆转率为75.20%,而从开口第5天进行诱导得不到发育好的雌性;从开口第1天投喂激素,饲料组的成活率与卤虫组无显著差异(P>0.05),而性逆转率显著高于卤虫组(P<0.05);分子标记Y1和Y2相结合能够准确鉴定黄颡鱼的遗传性别;对照组中3个家系的成活率和各个基因型性别比例均无显著差异(P>0.05),成活率为51.00%~56.67%,XX雌性占比为90.91%~97.44%,XY雄性占比为94.56%~95.96%,而YY则为雄性;诱导组中3个家系的成活率和性逆转率均无显著差异(P>0.05)。结果表明,采用含50 mg·kg-1 E2的微颗粒饲料从开口第1天开始诱导30 d,并运用遗传性别与表型性别鉴定相结合的方法能够有效筛选获得发育良好的XY/YY雌性黄颡鱼。     

苯甲酸雌二醇诱导新吉富罗非鱼雌性化的研究

2009年7月12日至10月21日和2010年5月1日至11月6日,水温23～31℃范围下,在3口2.72m×1.55m×0.72m、水深0.62m的水泥育苗池和3口1.2m×1.0 m×1.0 m、网目20目/英寸的小网箱中,分别放养100尾体长0.7～1.9㎝的新吉富尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)苗,投喂含不同剂量的苯甲酸雌二醇(EB)激素的饲料,以获得用于生产YY超雄鱼的XY转化雌鱼。结果显示,用100 mg.kg-1EB饲料投喂26d、36d、46d、59d和饲养102d后,实验鱼的雌性率分别为80.0%、93.4%、93.9%和94.0%,分别比对照鱼(54.8%)高25.2%、38.6%、39.1%和39.2%;用200 mg.kg-1EB饲料投喂24d和饲养188d后,实验鱼的雌性率为83.1%,比对照鱼(46.9%)高出36.2%。经Χ2检验,两次试验的雌性转化率差异均极显著(P<0.001)。实验鱼和对照鱼的成活率差异不显著,未见畸形现象。实验结束时两批实验鱼的体质量和全长均显著小于对照鱼(P<0.01和P<0.05),未转化的实验雄鱼与对照雄鱼的全长、体质量差异不显著(P>0.50)。综合分析认为,用EB诱导新吉富罗非鱼苗雌性化的适宜剂量为200 mg.kg-1饲料,投喂35d左右较为适宜。     

17β—雌二醇对雄性金鱼卵黄原蛋白的诱导作用

采用腹腔注射17β-雌二醇的方法诱导雄性金鱼卵黄原蛋白产生,注射浓度为0.05mg·g-1BW,诱导2周后取尾静脉血,离心分离血浆,进行血浆常规聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过对卵黄原蛋白特性基团磷、脂和糖蛋白的染色,确定了卵黄原蛋白在电泳图谱上的位置,开发了一种简便、高效的定性卵黄原蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。电泳结果表明,在0.05mg·g-1BW的注射浓度下,2周后17β-雌二醇诱导了雄性金鱼卵黄原蛋白产生,并通过ELISA检测卵黄原蛋白的平均含量为690.2ng·mL-1,与对照组雄性金鱼平均含量为10.7ng·mL-1的差异极显著(P<0.01),比雌性对照组检出量285.5ng·mL-1高1倍多;17β-雌二醇诱导组雄鱼血浆钙离子和血总蛋白含量明显增加。     

1例人工养殖子一代中华鲟雌雄同体现象的初步研究

通过对1尾养殖过程中死亡的子一代中华鲟(Acipenser sinensis,14+龄,体长163 cm,体质量51.54 kg)的死亡原因调查、分析,发现该尾中华鲟为雌雄同体.经对其性腺组织的影像及组织切片观察,发现该中华鲟性腺同时存在精巢和卵巢,性腺以精巢为主,精巢上间生多叶卵巢组织,左侧性腺长61 cm、重0.4...     

额尔齐斯河白斑狗鱼的生长模型和生活史类型

采用特殊Von Bertalanffy生长方程(特殊VBGF)、一般Von Bertalanffy生长方程(一般VBGF)、Logistic生长方程、Gompertz生长方程、Brody生长方程和指数生长方程等6种常用动物生长模型拟合额尔齐斯河白斑狗鱼(Esox lucius Linnaeus)的生长,根据各模型拟合残差平方和的大小判断拟合程度.结果表明,特殊VBGF生长模型对白斑狗鱼体长生长的拟合效果最好;其次是一般VBGF.以14种已知生活史类型鱼类为参照物,选择渐近体长(L∞)、渐近体质量(W∞)、生长系数(k)、自然死亡系数(M)、初次性成熟年龄(Tm)、最大年龄(Tmax)和种群繁殖力系数(PF)等7个生态学参数作指标,采用模糊聚类分析法,判断白斑狗鱼为偏r-选择类型鱼类.应用Beverton-Holt动态综合模型计算改变起捕年龄(tc)和瞬时捕捞死亡系数(F)的产量,分析产量变化曲线,结合额尔齐斯河白斑狗鱼的资源现状,建议其起捕年龄至少应定为4龄,F不超过0.25.     

Microsatellite polymorphism in Italian populations of northern pike (Esox lucius L.)

Northern pike (Esox lucius) is not considered an endangered species in Italy, but since recent studies indicate the decline of this population, conservation and management strategies based on the genetic differentiation of natural northern pike populations are needed. In this paper, genetic diversity was analysed in 10 Italian and 2 East European northern pike populations by means of seven microsatellite loci. Data indicated an appreciable genetic differentiation, in spite of a low genetic variation, and agreed with the low level of genetic polymorphism already observed for this species in North America and North Europe. Results of statistical tests revealed genetic peculiarities of the Italian populations, even though signals of recent contact between populations were found and discussed in relation to anthropic impacts, particularly to the stocking practice. This investigation represents the first approach to the knowledge of the genetic variability of Italian pike populations using microsatellite markers, and reported results could be of interest for future management and conservation programmes of this species in Italy.     

温度对白斑狗鱼早期发育和生长的影响

为了能给白斑狗鱼耐高温性状的改良提供有效的分子标记,本研究基于白斑狗鱼热敏感组 (109尾)和耐高温组 (103尾)进行简化基因组测序,对25个染色体中的InDel标记,以前两个PCA为协变量,利用MLM模型(Masked Language Mode)与白斑狗鱼的耐热性状进行了关联分析。结果显示,大部分InDel分布在内含子 (63.69%),外显子分布的InDel位点较少 (1.30%)。通过GWAS分析,发现5个位点与白斑狗鱼耐热性状显著关联,分别位于safb基因、未知基因LOC117593903和CLSTN2基因内含子中。其中9N del、4N del-1和4N del-2三个InDel位点均位于CLSTN2基因第3内含子,这3个位点在212尾个体中基因型分布高度连锁。本研究中发现的5个InDel突变可能会对白斑狗鱼的耐热性状产生显著的影响,可作为白斑狗鱼耐热性状改良的候选分子标记。进一步在验证群体中利用KASP技术对部分位点进行了验证。发现9N del位点DD基因型个体在热敏感组中占优势,DI基因型个体在耐高温组中占优势,与简化基因组测序结果基本一致。位于CLSTN2基因第2内含子的3个InDel位点可能影响CLSTN2基因的转录,该基因可能是白斑狗鱼耐高温性状相关的重要候选基因。研究结果为白斑狗鱼分子标记辅助育种提供了理论依据,为白斑狗鱼耐热性状的改良提供了候选分子标记。

     

白斑狗鱼新基因lincRNA-Abcc10的克隆、表达及敲除模型构建

长非编码RNA(lncRNAs)作为一种新的表观遗传因子,在研究鱼类性别决定和性别分化过程中具有重要的作用。本研究利用RACE技术,对白斑狗鱼(EsoxLucius)性别特异性lncRNAs基因Novel01784进行克隆,获得了全长共1328bp的序列。在线预测工具CPC2和CPAT的分析结果显示,该基因不具有编码蛋白质的能力。通过Blast比对分析将其定位在9号染色体,且位于sp2和Abcc10基因之间,根据其位置关系将其命名为lincRNAAbcc10。从共定位分析结果显示, lincRNA-Abcc10可能参与调控离子运输、卵泡细胞发育和线粒体活性,其表达模式与部分邻近基因相似。其次,对白斑狗鱼lincRNA-Abcc103个时期在8个组织中的qRT-PCR结果显示,该基因在卵巢中特异性表达,随着时间增长表达量逐渐下降,说明其可能在卵巢早期分化过程中起着重要的作用。此外,通过对白斑狗鱼126 d卵巢核质RNA分离, qRT-PCR结果显示, lincRNA-Abcc10分布于细胞质内,可能以顺式或反式方式调控邻近基因的翻译水平。最后,利用CRISPR/Cas9技术建立了linc...     

Stimulation of spermiation and induction of ovulation in pike (Esox lucius)

Mature northern pike were given various hormonal treatments in March or April in order to stimulate spermiation or to induce ovulation. In males the total amount of sperm collected after treatment increased, in comparison with saline-injected males, by 3–11 times with partially purified salmon gonadotropin (PPSG-activity: half of the highly purified s-GTH; injected at doses of between 5 and 100 μg/kg body weight); 3–6 times with crude carp pituitary extract (0.5–3 mg/kg body weight); and 3–7 times with fresh pike pituitaries (14 and 1.2 mg wet weight/kg body weight). The sperm obtained after hormonal treatment was of good quality. Intracardiac injection of superactive LRH analogue had no effect. In females, PPSG induced 90 and 100% ovulation at the doses of 50 and 25 μg/kg body weight. Dried salmon pituitaries (2.5 mg/kg, equivalent to 50 μg of PPSG) gave 25% ovulation; at 10 mg/kg, 25% complete ovulation was again recorded, but in addition 70% of the females showed oocyte maturation and partial ovulation. Similarly, dried carp pituitary (3 mg/kg) induced only oocyte maturation but no ovulation. The oocytes obtained after hormonal treatment were in general fertile. Intraperitoneal injection of LRH in an emulsified form induced neither oocyte maturation nor ovulation. The lack of effect of LRH analogue is discussed and shows that the use of this compound as a substitute for pituitary preparation is not very promising.     

白斑狗鱼早期发育阶段的耐热性及耐热性状关联SNP筛选

为了解白斑狗鱼(Esox lucius)早期不同发育阶段的热耐受性, 为其耐热性状的改良提供合适的分子标记, 本研究首先采用耐热性(upper thermal tolerance, UTT)作为评定指标, 对 UTT 进行方差分析, 比较分析了白斑狗鱼不同发育阶段的热耐受性。使用 GBS (genotyping-by-sequencing)技术获得两个极端组的耐热性状相关简化基因组测序数据集, 进而对耐热性状进行全基因组关联分析(genome-wide association study, GWAS), 发掘白斑狗鱼耐热性状关联的 SNP 标记。结果发现, 白斑狗鱼早期不同发育阶段的耐热性有极显著的差异(P＜0.01), 幼鱼期的耐热性最高, 其次为稚鱼期, 仔鱼期耐热性最低。联合 FarmCPU 和 Blink 模型进行了 GWAS 分析, 发现 5 个 SNPs 与白斑狗鱼耐热性状的关联性均达到了极显著水平(FDR P-value＜0.01), 分别位于 clstn2、MAPK14、VAPA 等基因的内含子和 ANKS1B 基因 5ʹ端非翻译区。这些基因直接或间接与刺激和应激反应相关。本研究初步筛选出与白斑狗鱼耐高温性状关联的候选 SNPs 和相关基因, 为今后研究白斑狗鱼在应对高温胁迫时的生理机制和分子机制提供参考, 为白斑狗鱼耐高温性状的改良提供了科学依据。     

白斑狗鱼养殖试验

白斑狗鱼俗名“鸭咀鱼”,土著名“乔尔泰”,是新疆特产亚冷水性鱼类,属鲑形目、狗鱼科、狗鱼属。该鱼经济价值高,病害少,易养殖,周期短,一年即可达到上市规格,且营养丰富,味道鲜美。2004年4月中旬,我们从新疆引进白斑狗鱼受精卵,在本地孵化育苗并养至商品鱼。现把养殖经验和养殖过程中遇到的问题总结如下,以供参考。     

Feminization of Oreochromis mossambicus by the administration of diethylstilbestrol

Gonadally undifferentiated Oreochromis mossambicus fry were given different doses of diethylstilbestrol (DES) orally for 11 or 15 days and reared for 70 days. All-female populations were produced at doses >100 μg DES/g diet in both treatments. Mortality increased at higher doses (>500 μg/g). The hormone treatment significantly (P>0.0005) improved the growth performance of the sex-reversed fish.     

肾上腺素对岩牡蛎幼虫变态的诱导

为了得到壳型规则、大小均一的单体牡蛎,本研究采用肾上腺素对岩牡蛎单体苗种生产的诱导条件进行研究,阐明了岩牡蛎单体苗种的最适诱导浓度、诱导时间和诱导密度。结果显示,肾上腺素能显著诱导岩牡蛎幼虫的不固着变态,最适诱导浓度为5×10–5 mol/L,最适诱导时间为1 h,提高诱导浓度和延长诱导时间导致岩牡蛎幼虫的不固着变态率、稚贝壳高和存活率显著降低;肾上腺素对低于8个/mL幼虫密度的诱导效果差异不显著,但稚贝壳高和存活率在8个/mL的培育密度下显著低于0.5～4个/mL,研究表明利用肾上腺素诱导岩牡蛎单体时,可大批量处理眼点幼虫,但稚贝充气培养的最适培养密度应不高于4个/mL。     

花鲈冷冻精子诱导漠斑牙鲆雌核发育

采用紫外线(UV)对冻存的花鲈精子进行照射使其遗传物质失活,作为异源精子诱导源,与漠斑牙鲆卵子进行“授精”,可以诱导漠斑牙鲆卵进行雌核发育。结合静水压处理,抑制第二极体排出,成功获得了漠斑牙鲆雌核发育二倍体鱼苗。实验表明,同源精子和异源精子均可在紫外线照射遗传失活后诱导漠斑牙鲆卵雌核发育,经实验筛选出异源精子诱导漠斑牙鲆雌核发育的最佳条件为花鲈冻存精子采用80 mJ/cm²的紫外线照射,然后与漠斑牙鲆卵子进行授精,培育水温18 ℃条件下,受精后4~5 min,施以65 MPa的静水压休克处理6 min,可有效诱导漠斑牙鲆卵的雌核发育。采用形态学、流式细胞仪DNA含量分析和微卫星标记技术对雌核发育鱼苗进行了分析,证明了雌核发育鱼苗为雌核发育二倍体。本文首次报道了采用异源冷冻精子诱导漠斑牙鲆鱼卵进行雌核发育的技术方法,为漠斑牙鲆性别控制和遗传改良提供了技术手段。     

Introduced northern pike consumption of salmonids in Southcentral Alaska

The impacts of introduced northern pike (Esox lucius) on salmonid populations have attracted much attention because salmonids are popular subsistence, sport and commercial fish. Concern over the predatory effects of introduced pike on salmonids is especially high in Southcentral Alaska, where pike were illegally introduced to the Susitna River basin in the 1950s. We used pike abundance, growth, and diet estimates and bioenergetics models to characterise the realised and potential consumptive impacts that introduced pike (age 2 and older) have on salmonids in Alexander Creek, a tributary to the Susitna River. We found that juvenile salmonids were the dominant prey item in pike diets and that pike could consume up to 1.10 metric tons (realised consumption) and 1.66 metric tons (potential consumption) of juvenile salmonids in a summer. Age 3–4 pike had the highest per capita consumption of juvenile salmonids, and age 2 and age 3–4 pike had the highest overall consumption of juvenile salmonid biomass. Using historical data on Chinook salmon and pike potential consumption of juvenile salmonids, we found that pike consumption of juvenile salmonids may lead to collapsed salmon stocks in Alexander Creek. Taken together, our results indicate that pike consume a substantial biomass of juvenile salmonids in Alexander Creek and that coexistence of pike and salmon is unlikely without management actions to reduce or eliminate introduced pike.