河南省部分猪场猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为探讨河南省部分规模化猪场仔猪败血症病原,采用涂片镜检、细菌分离培养、生化试验、药敏试验、动物试验等方法对采集的病料进行研究。结果表明,从疑似猪链球菌2型感染猪的器官中分离得到了8株猪链球菌,经PCR鉴定及核苷酸同源性比较发现,这8株猪链球菌与猪链球菌2型的毒力因子序列同源性高达97%。动物试验证实,分离到的菌株能复制出与自然发病猪相同的临床症状。分离的菌株对青霉素、阿莫西林、恩诺沙星高度敏感,对四环素、庆大霉素、林可霉素耐药。研究结果表明,河南地区猪链球菌2型的耐药谱越来越广,耐药性也越来越强。     

上海部分地区猪链球菌2型的流行病学调查及其耐药性

猪链球菌2型是一种重要的人兽共患病病原,由其引起的猪链球菌病给养猪业带来巨大的危害。本研究通过PCR方法扩增谷氨酸脱氢酶(GDH)基因和荚膜多糖(CPS)基因检测猪链球菌2型,对上海部分地区猪链球菌2型的流行病学进行调查,并对分离到的菌株进行生化鉴定及耐药性研究。结果显示,上海部分地区猪链球菌的检出率为41.2%(103/250),猪链球菌2型的检出率为12.4%(31/250),猪链球菌2型占猪链球菌的30.1%。猪链球菌2型菌株对四环素、链霉素和氯霉素的耐药性最为严重,多数菌株呈多重耐药性,其中以4重耐药性为主。这为上海地区猪链球菌病的监管提供了依据,并对临床治疗使用抗生素具有参考价值。     

猪链球菌2型临床分离株的分离鉴定和生物学特性分析

为了确定2019年江苏省某规模化猪场仔猪疑似发生猪链球菌病的病原菌及其毒力特性,进行了细菌分离培养、生化试验、PCR分型鉴定以及毒力基因检测和药敏性测定。结果表明:分离株在血平板上形成浅灰色、半透明的有α溶血环的圆形细小菌落,镜检呈散在排列的革兰氏阳性短链球菌,结合生化试验、基因分型,确定该病原菌为猪链球菌2型,命名为HA21。毒力基因检测结果显示,HA21主要毒力基因分布为sly~+/epf~+/mrp~+,提示HA21为强毒株。药敏试验结果显示,HA21对β-内酰胺类抗生素如青霉素、阿莫西林等敏感,但对阿奇霉素、卡那霉素等细菌蛋白质合成抑制剂类抗生素耐药。     

多重PCR鉴定猪链球菌2型毒力菌株

为了鉴定猪链球菌2型毒力菌株,根据猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的荚膜多糖基因(capsular polysaccharide 2J,cps2J)、溶菌酶释放蛋白基因(muramidase-released protein,mrp)、毒力相关序列orf2基因(virulent-associate sequence orf2)设计合成3对引物,建立三重PCR检测方法,并对PCR扩增产物进行测序、酶切、特异性及敏感性实验。结果显示:26株SS2致病菌株均同时扩增出这3个目的片段,5株其他血清型猪链球菌(SS1,SS7,SS9)及13株非猪链球菌的其他猪源链球菌(兰氏B群、C群和D群)均未扩增出cps2J和mrp片段,检测结果与菌株的已知毒力因子背景完全相符。26株SS2的扩增片段经HincⅡ酶切鉴定,与预期结果一致。以SS2四川株ZY05719为模板的三重PCR产物(cps2J,mrp,orf2)测序结果与GenBank上相关序列比较,同源性分别为99%、100%、94%。该PCR敏感极限是600个细菌/每个反应。本试验所建立的三重PCR,特异性强,敏感性好,可用于实验室的快速诊断。     

猪链球菌2型福建株的分离鉴定

从临床表现为败血症的濒死病猪肝脏、肺脏、淋巴结中分离到一株链球菌,进行形态学、生化特性、小白鼠感染试验及PCR鉴定和CPS2 J序列测定.结果表明:该分离菌的形态、培养和生化特性基本符合链球菌的特点;人工感染试验显示,小白鼠腹腔接种0.2 mL分离菌培养物不发病,但接种1 mL能在48 h内致小白鼠死亡,并能从脏器中分离到接种菌;分离菌的PCR扩增产物与猪链球菌2型阳性参考菌株JA070109大小一致、长度为675 bp的特异性条带,其PCR产物的核苷酸序列与GeneBank上公布的猪链球菌2型不同菌株的同源性高达98%-100%.可见,该分离菌为猪链球菌2型,并首次证实福建存在猪链球菌2型.     

猪链球菌2型广西分离株毒力基因表型分析

【目的】了解广西致病性猪链球菌2型（SS2）菌株的毒力基因表型,为广西SS2的防制提供分子生物学依据。【方法】应用PCR技术对分离自发病猪的SS2菌株进行荚膜多糖糖基转移酶基因（CPS2J）、溶菌酶释放蛋白基因（MRP）、细胞外蛋白因子基因（EF）、溶血素基因（SLY）和谷氨酸脱氢酶基因（GDH）5种毒力基因检测。【结果】60%菌株的基因表型为CPS2J+/MRP+/EF+/SLY+/GDH+,30%为CPS2J+/MRP+/EF+/SLY-/GDH-,10%为CPS2J+/MRP+/EF+/SLY-/GDH+。【结论】CPS2J+/MRP+/EF+/SLY+是广西致病性SS2菌株的主要基因表型,与从江苏、四川SS2疫区分离获得的菌株基因表型一致,今后应加强对SS2毒力基因的监测,严防SS2疫情暴发。     

猪链球菌2型广西分离株毒力基因表型分析

【目的】了解广西致病性猪链球菌2型（SS2）菌株的毒力基因表型,为广西SS2的防制提供分子生物学依据。【方法】应用PCR技术对分离自发病猪的SS2菌株进行荚膜多糖糖基转移酶基因（CPS2J）、溶菌酶释放蛋白基因（MRP）、细胞外蛋白因子基因（EF）、溶血素基因（SLY）和谷氨酸脱氢酶基因（GDH）5种毒力基因检测。【结果】60%菌株的基因表型为CPS2J＋/MRP＋/EF＋/SLY＋/GDH＋,30%为CPS2J＋/MRP＋/EF＋/SLY-/GDH-,10%为CPS2J＋/MRP＋/EF＋/SLY-/GDH＋。【结论】CPS2J＋/MRP＋/EF＋/SLY＋是广西致病性SS2菌株的主要基因表型,与从江苏、四川SS2疫区分离获得的菌株基因表型一致,今后应加强对SS2毒力基因的监测,严防SS2疫情暴发。     

广东部分地区猪场猪链球菌的分离与鉴定

对从广东省广州、韶关、增城、湛江、东莞、四会、河源、汕头等地规模猪场疑似猪链球菌病病猪中分离的细菌进行了鉴定,经纯化培养、菌落形态观察、革兰氏染色镜检及生化试验等传统检测方法并结合PCR检测,将20株分离菌株鉴定为猪链球菌(Streptococcus suis).     

猪链球菌2型及7型分离株对16种抗生素的耐药性分析

[目的]有效控制猪链球菌的传播。[方法]测定121株2型和7型湖南地区分离株对16种抗生素的耐药性。[结果]结果发现,猪链球菌湖南分离株（2型和7型）对红霉素、万古霉素、克林霉素和四环素具有高频的抗性,对氟哌酸、左氟沙星、环丙沙星、克拉霉素和青霉素G等抗生素较为敏感。细菌对敏感抗生素的抗性有上升趋势。[结论]该研究为养猪业临床治疗猪链球菌感染的用药提供依据。     

猪链球菌2型分离鉴定及其对小鼠的致病性分析

为了解猪链球菌2型菌株对昆明小鼠的致病性,并建立其感染昆明小鼠模型,本试验分别取2头疑似患链球菌病的病死猪脑组织、血液分别涂布于含5％胎牛血清的TSA固体培养基中进行细菌分离;并对分离获得的细菌进行形态观察、PCR鉴定、药物敏感性试验、小鼠致病性试验及组织病理切片观察.结果显示,分离菌为革兰氏阳性短链球菌,经PCR鉴定...     

猪链球菌2型在小型猪模型体内的动态分布

实验采用SPF小型猪建立猪链球菌2型的动物模型,将14头SPF小型猪随机分为实验组和对照组,实验组肌肉注射2 mL的1×109 CFU.mL-1菌液,对照组注射2 mL无菌培养基。攻毒后利用细菌培养和PCR技术定期检测体内血液和组织中的细菌动态分布情况。实验发现SS2侵入血液的速度很快;扁桃体是该菌的定植器官,SS2对肝脏、肾脏等实质器官的黏附性无明显差异;只有出现神经症状及死亡仔猪,才能从脑组织中分离到SS2,说明细菌突破血脑屏障,进入大脑可能是引发脑膜炎的前提。试验为研究该病的致病机理提供了依据。     

猪链球菌2型病的研究现状及防治措施

猪链球菌2型是一种重要的人畜共患病病原,对猪链球菌2型的流行病学、毒力因子、检测方法和疾病防治等方面进行了综述。     

湖北地区猪链球菌2型的鉴定及生物学特性研究

以湖北荆州地区疑似猪链球菌病的病猪为研究对象,经病料采集、细菌分离培养、纯化、染色、镜检、生化鉴定、血清学试验和PCR检测,确定该病猪为猪链球菌2型病例。经药敏试验筛选出了环丙沙星、阿莫西林和头孢唑肟钠为其敏感药物;经动物攻毒试验复制出同样疾病,表明猪链球菌2型对湖北地区猪具有很强的致病性。     

猪链球菌的分离鉴定和药敏试验

从豫北的安阳县猪场采集的病料中分离出了5株猪链球菌。经细菌分离培养、生化试验及兰氏分群A—G诊断试剂鉴定,分离出E群链球菌2株,C群链球菌2株,D群链球菌1株。药敏试验结果表明：分离的链球菌对氨苄西林、头孢他啶和头孢曲松高度敏感,对青霉素、复方新诺明和土霉素等药物产生耐药性。     

Erythromycin Resistance of Streptococcus suis Isolates In Vivo

In order to study erythromycin resistance of Streptococcus suis under high or low concentration of selective drug pressure, Streptococcus suis strain LN was isolated from a diseased pig in 2005 and showed to be susceptible to erythromycin as determined by disc diffusion and tube dilution tests. In this study, clean level rabbits were divided into three groups of six rabbits each, including a prevention dosage group, a treatment dosage group, and a control group. After injection with S. suis strain LN, erythromycin （20 μg mL^-1） was taken orally in the prevention dosage group, erythromycin （5 mg kg^-1） was injected intramuscularly in the treatment dosage group, and no treatment was given in the control group. S. suis with intermediate resistance to erythromycin was isolated on the 5th day after infection from the prevention dosage group （5th PDG） and on the 7th day after infection from the treatment dosage group （7th TDG）. Both isolates were determined to be the constitutive macrolide-lincosamide-streptogramin B （cMLSB） resistance phenotype. The resistance gene ermB was detected in all of the isolates. The results suggested that both the 5th PDG and 7th TDG isolates had a mutation （A2372T） in the 23S rRNA gene. In addition, the 5th PDG isolates had a mutation in ribosomal protein L4 （detected as G268A） and a mutation in ribosomal protein L22 （A345C）; and the 7th TDG isolates had a C insertion at site 564. Each of these mutations is considered as a possible mechanism of erythromycin resistance in S. suis strain LN. This study demonstrated that erythromycin resistance was readily induced in S. suis at a low erythromycin dose creating selective pressure in vivo. Resistance appeared to be mediated by ribosome methylation, encoded by the ermB gene.     

猪链球菌病病原的分离鉴定及药敏试验

采集疑似猪链球菌病的病猪病料,经病原分离培养、生化鉴定、动物试验和药教试验,结果表明所分离的细菌为α溶血链球菌(α-hemolytic streptococci.),该菌对霸王金针、利福平、沙拉噻呋极敏,对替米考星、头孢唑啉钠、氨苄西林钠、猪康2号为高敏.     

荧光定量PCR检测猪肝中猪链球菌2型的基因组DNA提取方法的比较

[目的]在人工布菌猪肝中评估溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法提取猪链球菌2型基因组DNA在荧光定量检测中的应用效果,为猪链球菌2型的荧光定量检测选择合理的基因组DNA提取方法提供试验依据。[方法]采用溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法分别提取人工布菌猪肝样本中猪链球菌2型基因组DNA,通过荧光定量PCR技术检测猪链球菌2型的相对含量。[结果]利用荧光定量方法能够检测到猪链球菌2型。该方法可以最低检测到12 CFU/g的猪链球菌,特异性良好,标准曲线方程为y=-3.185 9x+39.901 0。在人工布菌猪肝样本中,溶菌酶-苯酚法在q PCR实验中检测猪链球菌2型较灵敏。[结论]溶菌酶-苯酚法在猪肝样品中提取基因组DNA效果较好;试剂盒法在细菌纯培养物中提取基因组DNA具有安全、高效等优点。