两种卵黄抗体不同提取方法的比较试验

卵黄抗体(Ig Y)具有许多其他类型抗体所没有的优点,其分离纯化的方法有有机物抽提法、盐析法、水稀释法等。试验分别用聚乙二醇(PEG)6000和氯仿来提取卵黄抗体,对其收集的抗体量和抗体效价进行比较分析。结果表明:100 g的卵黄用PEG6000法比氯仿法多收集71 m L卵黄抗体溶液,且PEG6000法的成本远远低于氯仿法,有很好的经济效益,而PEG6000法提取的卵黄抗体效价比氯仿法略低一个滴度。     

鸡传染性法氏囊高免卵黄IgY抗体不同提取方法的比较

本试验旨在提高鸡传染性法氏囊卵黄抗体防制鸡传染性法氏囊的效果,比较不同提纯方法对鸡传染性法氏囊高免卵黄抗体效价的影响。制备高免蛋并测定其效价,在实验室通过直接离心法、酸化水提取法、氯仿提取法、聚乙二醇法4种方法分别对高免卵黄抗体提取及抗体效价检测。试验结果表明,自制卵黄抗体效价为1:64;直接离心法的抗体效价为1:128,酸化水提取法的抗体效价为1:16,氯仿提取法抗体效价为1:256,聚乙二醇法的抗体效价是1:32。试验结果显示,使用氯仿提取法后检测的抗体效价最高,是临床提取抗体的常用方法。     

应用对流免疫电泳检测鸡传染性法氏囊病病毒抗原和抗体

应用鸡传染性法氏囊病(IBD)血清抗体检测病毒抗原,对流免疫电泳试验(CIET)法比琼脂扩散(AGP)法检出率高50％;而用IBD抗原检测其血清抗体,CIET比AGP有60％血样抗体效价高1～2个滴度。CIET法比AGP法的检测速度快23～37个小时。CIET是一种简易、快速、敏感度较高的检测方法,可用于IBD的检测与诊断。     

盐酸克伦特罗人工抗原及抗体的制备

为了制备盐酸克伦特罗(CL)人工抗原及抗体,试验采用重氮化法将盐酸克伦特罗与经过活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫抗原(CL-BSA)和检测抗原(CLOVA),经紫外光谱扫描对偶联物进行鉴定;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠制备盐酸克伦特罗多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:盐酸克伦特罗人工抗原合成成功,制备的鼠源多克隆抗体效价达1∶64 000,该抗体可用于下一步试验。     

小鼠抗青霉素和头孢菌素酰化酶抗体制备及交叉反应研究

为探讨用不同方法制备的抗原对抗体效价的影响以及抗体之间的交叉反应 ,采用 3种不同方法制备的抗原分别免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备出抗青霉素酰化酶 α亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶α亚基、β亚基 4种抗体 ,测定了它们的效价 ;同时还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述 4种抗体之间对应抗原的交叉反应。结果表明 ,用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得抗体效价较高 ;同样用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得的两类抗体效价无显著差异 ;在交叉反应测试中 ,抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶 ,但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶 ,即抗头孢菌素酰化酶抗体更为活跃 ,而抗青霉素酰化酶抗体则更为专一。同类抗体对应抗原 2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位结构的类似 ,同时也说明只有进一步制作单克隆抗体才能筛选出特异性强的抗体     

不同免疫方法制备IBD卵黄抗体的效果比较

用6种不同的免疫方法接种健康产蛋母鸡所制备的卵黄抗体,用琼扩法测定免疫后不同时期的卵黄抗体效价,并将其作1:4稀释后用于临床治疗试验。结果表明,以第5组(首免肌注自制油乳剂灭活苗2 ml/只,1周后同上法二免)效价最高,总有效率达98％以上,12h后症状即见明显好转。     

不同免疫方法制备IBD卵黄抗体的效果比较

用6种不同的免疫方法接种健康产蛋母鸡所制备的卵黄抗体,用琼扩法测定免疫后不同时期的卵黄抗体效价,并将其作1：4稀释后用于临床治疗试验。结果表明,以第5组(首免肌注自制油乳剂灭活苗2mL／只,一周后同上法二免)效价最高,总有效率达98％以上,12h后症状即见明显好转。     

三聚氰胺IgG型单克隆抗体的制备及鉴定

采用改进的重氮法合成三聚氰胺免疫抗原(三聚氰胺-BSA)和三聚氰胺包被抗原(三聚氰胺-OVA),以三聚氰胺-BSA免疫BALB/c小鼠,选取间接ELISA测定效价达8000以上的BALB/C小鼠进行融合,用HAT和HA选择性培养基筛选后,得到一株稳定分泌抗三聚氰胺抗体的杂交瘤细胞株命名为3G4,经多次传代培养和反复冻存复苏后能够稳定分泌抗体,在BALB/C小鼠体内诱生腹水,用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水。用间接ELISA方法测定杂交瘤培养上清效价为1:1600,腹水效价为1:2.048×10~6,抗体亚类为IgG2b。     

大片形吸虫CatL1蛋白的原核表达及其特异性多克隆抗体的制备

为了制备大片形吸虫诊断抗体,试验采用原核表达制备大片形吸虫组织蛋白酶L1重组蛋白(rFgCatL1),用该蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体效价,Western-blot法检测多克隆抗体的特异性。结果表明:CatL1基因大小为981 bp,蛋白质分子质量为39.0 ku左右,与预期分子质量大小一致。制备的小鼠多克隆抗体血清效价达1∶128 000,能特异性识别大片形吸虫排泄-分泌物(ESP)抗原。说明制备的rFgCatL1多克隆抗体可作为良好的诊断抗体用于研制快速诊断试剂盒。     

传染性法氏囊病病毒VP2特异性抗体效价与保护力的相关性

用一种新方法测定传染性法氏囊病病毒的特异性抗体，并对抗体效价与保护力的相关性进行了研究，对不同抗体效价的鸡进行攻毒，用乳胶凝集抑制试验测定抗体效价，该法对检测ＩＢＤＶ ＶＰ２特异性抗体快速，简便，当免疫鸡的ＬＩ效价达１：２或更高时，几乎所有的鸡均可抵抗强毒ＩＢＤＶ的攻击，相反，带有母源抗体的鸡，即使其ＬＩ效价达１：４，用同样方法攻击，仍有半数的鸡易感。     

鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备

本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100.     

高免鸡群蛋黄液和鸡血清IBD及ND抗体水平的对比试验

在制备IBD和ND二联卵黄抗体以及在计划鸡群的IBD和ND免疫程序时,都需要对鸡体内的IBD及ND抗体水平进行监测。通过对一群鸡按一定免疫程序高免IBD疫苗和ND疫苗后,利用鸡所产鸡蛋卵黄液和相对应鸡的血清测定IBD琼扩(AGP)抗体效价和ND凝集抑制(HI)抗体效价的对比试验认为:用卵黄液测定的抗体效价与用鸡血清测定的抗体效价呈一致关系,完全可用鸡蛋卵黄液代替鸡血清进行鸡体内IBD和ND抗体水平的监测。现将试验结果报告如下:     

不同提纯方法对鸡传染性法氏囊高免卵黄抗体效价影响的研究

为提高鸡传染性法氏囊卵黄抗体防治鸡传誊性法氏囊病的效果,比较不同提纯方法对鸡传染性法氏囊高免卵黄抗体效价的影响。通过直接离心法、酸化水提取法、氯仿提取法、聚乙二醇法四种方法分别提取高免蛋高免卵黄抗体并测定其提取前后抗体效价。试验结果表明,自制卵黄抗体效价为1：64;直接离心法的抗体效价为1：128,酸化水提取法的抗体效...     

氟罗沙星单克隆抗体的制备及鉴定

采用碳二亚胺(EDC)法将氟罗沙星(FLE)与载体蛋白BSA、OVA分别偶联合成人工抗原BSA-FLE、OVA-FLE,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外分析法对合成的人工抗原进行了鉴定。BSA-FLE用作免疫抗原免疫Balb/C小鼠,OVA-FLE用作检测抗原包被酶标板检测抗体效价。免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合获得了5株(4F11、2C3、8G2、3C1、2G8)稳定分泌抗FLE抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型鉴定均为IgG1。将3C1接种小鼠制备腹水,用辛酸-硫酸铵法对腹水进行纯化,纯化后腹水效价1∶1 024 000。抗体分子量160.766 KD,亲和常数为8.57×108M-1。     

应用微量HI试验检测鸡减蛋综合症卵黄抗体

用微量血凝抑制(HI)试验对曾发生过减蛋综合症(IDS-76)鸡群进行其卵黄抗体水平检测.结果证明,卵黄抗体效价与血清抗体效价基本相同,从而证实用卵黄HI 试验代替血清 HI 试验检测 EDS-76的抗体水平是可行的,且本法经济,省力,省时,有实用价值.     

法康宁(精制蛋黄抗体)理化特性应用研究

在免疫蛋黄抗体的研究方面,德国、日本、瑞典、南非等国家明显领先,因此,为利于我国卵黄抗体的深入研究,用特殊抗原免疫母鸡,并从免疫蛋中获取特异性抗体(Igy)广泛受到人们的关注。本文重点论述外在温度、酸碱度、反复冻融以及各种蛋白酶刺激对卵黄抗体效价的影响,研究结果表明,精致卵黄抗体(法康宁)在65℃下作用30 min内效价不降低,pH 4~11时3h内抗体效价不变化;胰蛋白酶浓度为2.5 mg/mL的环境下,作用3 h后效价没有变化;经10次反复冻融后,活性未丧失。为抗体的保存运输提供指导,为临床口服应用提供了参考。     

特布他林人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

为了建立特布他林(TBL)残留酶联免疫检测方法,试验采用碳二亚胺法将TBL与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别耦联,制备TBL人工抗原,经紫外光谱扫描对耦联物进行鉴定;用免疫抗原免疫小鼠制备TBL多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附试验测定抗体效价。结果表明:通过紫外光谱扫描鉴定,TBL-BSA和TBL-OVA存在最大吸收峰值,分别在277 nm和278 nm处;用TBL-BSA免疫Balb/c小鼠,获得的TBL多克隆抗体效价达到1∶32 000以上。说明成功制备出TBL人工抗原,并获得高灵敏度和特异性的TBL多克隆抗体,证明药物耦联成功。     

鸡传染性支气管炎微量血凝抑制试验方法的研究

用胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制成血凝(HA)抗原,HA＝1:16384,用此抗原建立了微量血凝抑制试验(HI)方法检测IBV阳性血清。IBV阳性血清鸡胚病毒中和试验(NT)结果与HI效价呈正相关,相关系数r＝0.29,HI效价达1:8以上可保护鸡胚抵抗200个MLD的IBV攻击,表明HI抗体是保护性抗体,该方法具有较大的实用价值。     

N-羟乙酰神经氨酸IgY抗体的制备及鉴定

本试验旨在建立N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc) IgY抗体的制备及鉴定方法。通过碳二亚胺法将Neu5Gc和载体蛋白进行偶联,制备Neu5Gc人工完全抗原,用制备的完全抗原免疫海兰褐蛋鸡制备Neu5Gc-IgY抗体,经ELISA检测分析鉴定抗体活性。经紫外光谱扫描、琼脂糖凝胶电泳法初步判断Neu5Gc人工完全抗原制备成功,获得的特异性Neu5Gc-IgY抗体经ELISA检测分析,首次免疫后第7天产生抗体,抗体效价呈动态变化,随着免疫次数的增多,血清效价和抗体效价逐步上升,至初次免疫后63 d达到高峰,效价达1:10 000,停止加强免疫后抗体效价可持续一个月左右,1号鸡产生的IgY抗体具有很好的抗原竞争活性,获得竞争回归方程y=30.28x+16.923,线性系数R²=0.9581。以上结果表明,本试验制备的Neu5Gc IgY抗体取得了理想效果,为红肉、牛奶及肿瘤组织中Neu5Gc的检测奠定了基础。     

链霉素人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

利用直接化学交联法将链霉素(SM)与蛋白载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用紫外扫描和麦芽酚试验鉴定偶联成功。用免疫原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA测IC50,获得了效价为1:51200,IC50为23.62ng/ml的链霉素多克隆抗体,与双氢链霉素的交叉反应率为107%,与同类的其它药物均无交叉反应。