猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学研究

通过杂交瘤技术制备猪瘟病毒单克隆抗体，对酶联免疫吸附试验筛选的阳性单克隆抗体进行免疫组织化学研究，从中发现1株单克隆抗体能与感染猪瘟病毒的猪肾、肝病理组织切片及PK15细胞产生特异性染色反应，与非感染猪的肾、肝组织切片和PK15细胞无染色反应。单克隆抗体与猪瘟病毒感染的PK15细胞或猪肝、肾小血管内皮细胞中的猪瘟病毒呈现较强的特异性棕色着染，表明该单抗是针对猪瘟病毒的单克隆抗体，对研究猪瘟病毒在宿主细胞中的生命活动和繁殖定位有非常重要的意义。该单抗命名为YNF，培养上清液和腹水的抗体效价分别为1：80和1：10000。抗体蛋白属IgG类，亚类为IgG2／κ。     

猪传染性胃肠炎病毒弱毒株STC3细胞培养特性及致病性研究

从美国引进的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）弱毒株STC3在ST、PK15及猪肾原代细胞上均能增殖，并产生明显的致细胞病变作用（CPE），其中以ST细胞上的CPE最为迅速、明显，于接毒后20－24h CPE即可达90％－100％，而在PK15及猪肾原代细胞上CPE形成较迟一些，在42－48h可达80％－90％。STC3在ST、PK15及猪肾原代细胞上的TCID50分别为10^-7.67/mL、10^-5.63/mL和10^-5.90/mL。用较大剂量STC3细胞毒经口接种被剥夺初乳的初生仔猪，仅表现为一过性的腹泻而不引起死亡，对3日龄人工哺乳的仔猪则已完全丧失了致病力，但荧光抗体检查结果显示病毒在小肠粘膜上皮细胞中仍有增殖。由此可，STC3可能是1株能很好诱导猪体免疫的TGEV弱毒株。     

猪细小病毒S-1A株对细胞的适应性及其培养条件的优化

将猪细小病毒S-1A株在不同的细胞中培养,测定病毒含量,以确定适合猪细小病毒S-1A株增殖的细胞。结果表明：猪细小病毒S-1A株能在猪肾传代细胞系(PK-15)、猪肾原代细胞(PK)、猪睾丸细胞(ST)和仔猪肾细胞(IBRS-2)中生长增殖,不能在幼仓鼠肾细胞系(BHK-21)、绿猴肾细胞(Vero)和鸡胚成纤维细胞(CEF)中增殖;当ST细胞生长至2/3单层时,将猪细小病毒S-1A株种毒液100倍或1000倍稀释后接种ST细胞,37℃培养96～144h,获得的病毒载量最高。     

利用昆虫杆状病毒表达系统表达PCV2 ORF2蛋白及其抗体的制备

猪圆环病毒(porcine circovius, PCV)最早是Tischer等于1974年在传代细胞系PK15中发现,该病毒可以持续感染PK15细胞,不引起细胞病变,对猪无致病性.     

细胞密度对猪圆环病毒2型效价检测结果的影响

为了解猪圆环病毒2型效价在检测过程中不同猪肾细胞(PK15)细胞密度对检测结果的影响,优化猪圆环病毒2型效价检测方法,提高猪圆环病毒2型效价检测结果的准确性,试验将消化后的PK15细胞稀释成细胞密度分别为3×10~4个/m L、5×10~4个/m L、7×10~4个/m L、9×10~4个/m L的细胞悬液,用于稀释猪圆环病毒2型样品,并将各组样品稀释1×10~4、1×105、1×1063个稀释度的细胞毒液,接种于96孔细胞板培养,72 h后用间接免疫荧光法测定病毒效价。结果表明:各不同密度PK15细胞检测的猪圆环病毒2型效价结果偏差很小,不超过0.1个效价,但细胞密度高的检测结果比密度低的高一些。说明不同密度细胞对病毒效价的检测结果影响很小,在猪圆环病毒2型效价检测过程中可以忽略细胞密度对病毒效价检测结果的影响,如果需要查找影响病毒效价检测结果偏差的原因,可以从其他因素去考虑分析。     

PCV2感染性克隆的构建与拯救病毒在不同细胞系中的增殖特性

将猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染性克隆分别转染到猪肾上皮细胞(PK15)和猪小肠上皮细胞(J2)中获得拯救病毒PCV2,比较病毒在2个细胞系中的复制动力学差异。设计特异性引物,通过PCR法和Over-lap PCR技术获得含1.1个拷贝PCV2基因组的DNA片段,克隆于p SP72载体获得PCV2感染性克隆。用PCV2感染性克隆分别转染PK15和J2细胞,Real-time PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测结果表明:拯救病毒可在PK15和J2细胞系中分别连续盲传10代以上,且PK15培养的PCV2基因组的拷贝数极显著高于J2培养的(P0.01),提示获得的PCV2拯救病毒在PK15的增殖性能优于J2,为进一步探索PCV2基因组的功能及PCV2相关发病机制奠定了基础。     

乙型脑炎病毒感染PK15细胞的lncRNA差异表达谱分析

旨在分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染猪肾上皮细胞PK15后的lncRNA差异表达谱,探究宿主lncRNA在JEV感染和宿主防御中的潜在功能.本研究中利用JEV感染PK15细胞,感染36 h,收集细胞,同时设立未感染对照组,每组3个生物学重复.提取细胞总RNA,构建c...     

猪细小病毒病的诊断与防制

<正>猪细小病毒感染又称猪繁殖障碍病,是由猪细小病毒引起的母猪繁殖机能障碍的一种传染病。该病的特征是受感染母猪,特别是初产母猪产出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔猪,偶有流产。1病原猪细小病毒属于细小病毒科细小病毒属,病毒粒子呈圆形或六角形,无囊膜,直径约20nm,核酸类型为单股DNA。该病毒在猪的原代细胞如猪肾和猪睾丸细胞以及传代细胞如PK15、ST等细胞上生长繁殖,并出现细胞病变,用免疫荧光技术可查出胞浆中的病毒抗     

二甲基亚砜在猪瘟病毒培养中的应用

猪瘟病毒能在猪肾细胞和其它一些哺乳动物细胞内增殖。感染性最强的是PK15和ST等几株猪肾和猪睾丸细胞系[1]。本实验室保存的ST细胞株易形成复层,长时间培养形成组织块突起,细胞团易脱落,无法长期连续收获猪瘟病毒。二甲基亚砜(DMSO)不仅可以影响细胞代谢促进蛋白合成[2]而且DMSO对猪瘟病毒囊膜中的脂质和脂蛋白有稳定作用[1]。     

建立A72细胞进行猪传染性胃肠炎血清中和试验的研究

引进了一株狗直肠瘤细胞系A72，将该细胞株进行培养传代，用于猪传染性胃肠炎中和试验研究，与用传统的猪肾细胞系PK15进行的猪传染性胃肠炎血清中和试验对比，用ELISA对这2株细胞的中和试验结果进行验证。结果表明，运用A72进行的病毒繁殖，其毒价明显高于PK15，A72在血清中和试验结果上优于PK15，且由TGEV导致A72发生的病理改变明显强于PK15，猪TGE血清中和试验与酶联免疫吸附检测结果试验的重复性较好。