猪胚胎冷冻保存研究现状

猪胚胎超低温冷冻对地方猪种的长期保存意义重大。长期以来,由于猪胚胎脂质含量较高等原因,进展一直较为缓慢(相对于牛、羊等动物)。近年来,由于玻璃化冷冻技术(特别是OPS玻璃化冷冻技术)的突破,使胚胎超低温冷冻保存成功率大幅度提高。本是法国国家农业科学院Francoise Berthelot教授对该领域的最新研究进展作的总结。     

小鼠的胚胎冷冻保存研究

随着生物工程技术的进步，出现了许多生物工程小鼠品系，促使小鼠胚胎冷冻保存技术得到了广泛的应用，采用胚胎冷冻的方法来长期的保存这些品系，可以节省大量的人力和物力，目前，在小鼠胚胎冷冻方面的研究主要是围绕提高存活率和简化操作过程，本文综述了在小鼠胚胎冷冻保存方面的国内外研究进展。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术不仅为动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流提供了简单的手段，而且还是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年，英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功，此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。至今，牛、绵羊、山羊、马、兔子、猫、羚羊、狒狒、狨猴、猴和人等的胚胎冷冻保存也获成功。然而，在     

猪胚胎冷冻保存研究进展

胚胎冷冻保存技术在大多数哺乳动物上已获得成功，牛胚胎冷冻已经进入商业化应用阶段。猪胚胎由于其特殊的低温生物学特性，冷冻保存研究进展缓慢。本文综述了猪胚胎在冷冻过程中的细胞生物学变化，以及近几年猪胚胎冷冻保存研究所取得的显著进展。     

牛胚胎冷冻保存的研究进展

目前,牛的胚胎冷冻保存巳成为一种较成熟的常规技术,广泛应用于牛的繁殖科研与生产。本文回顾了牛胚冷冻保存技术的发展概况,对牛胚胎的常规冷冻技术、直接冷冻法及玻璃化冷冻技术的进展作了简要论述。     

哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存效果受冷冻保护剂、冷冻方法、解冻方法等多种因素影响,其中冷冻方法是一个关键性因素.目前胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法和玻璃化冷冻法两种.常规慢速冷冻法是指利用甘油、乙二醇等做冷冻保护剂通过缓慢降温的方式进行胚胎冷冻;玻璃化冷冻法是指利用高浓度的冷冻保护剂通过快速降温的方式进行胚胎冷冻.与常规慢速冷冻法相比,玻璃化冷冻法简化了操作过程,大大缩短了操作时间,不需昂贵的程序控制冷冻仪.     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功。此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。然而,在胚胎冷冻和解冻过程中都存在许多会使胚胎受到损伤的因素,如:抗冻保护剂的毒性,冷冻损伤,细胞内冰晶的形成,破裂损伤,渗透压引起的膨胀。因此,使用不同的冷冻和解冻法应避免或减少胚胎受到损伤,以提高胚胎解冻后的存活率。1抗冻保护剂和冷冻溶液在哺乳…     

影响猪胚胎玻璃化冷冻的若干因素

以广西巴马小型猪为供体,采用超数排卵技术,采集5～6日龄的胚胎(囊胚/桑椹胚),比较2种冷冻方法、胚胎承载工具、透明带处理和冷冻胚胎移植受体对猪胚胎冷冻效果的影响.结果表明,2种冷冻方法的冷冻效果没有显著差异;GMP法能显著提高冷冻胚胎存活率(83.8%vs 77.6%,P＜0.05)和囊胚细胞数(47.5 vs 53.1,P＜0.05);以0.5%链蛋白酶10 s处理透明带,虽然对猪胚胎存活率没有显著影响,但能显著提高囊胚细胞数(60.1vs 46.6,P＜0.01);以地方猪种(枫泾母猪)为冷冻胚胎移植受体能显著提高妊娠率和胚胎效率(P＜0.01).     

猪胚胎的OPS玻璃化冷冻

以广西巴马小型猪为供体,采用超数排卵技术,采集5~6日龄具有完整透明带的胚胎(囊胚/桑葚胚),采用二步法OPS(Open pulled straw)玻璃化冷冻技术进行保存,即胚胎首先在冷冻液1(TCM199 20?S 10%EG 10%DMSO)中平衡3 min,然后立即转入冷冻液2(TCM199 20?S 20%EG 20%DMSO 0.4 mol/LSUC)中并在1 min内装管(每管含2~6枚胚胎),直接投入液氮保存;3个月后解冻移植给8头受体母猪(每头移入25~26枚胚胎),其中1头怀孕产仔(8头活仔),获得猪胚胎超低温(-196℃)冷冻后代。     

猪胚胎冷冻技术的研究历程与未来展望

本文论述了近年来国内外猪胚胎冷冻技术的研究历程,分析了玻璃化冷冻技术在猪胚胎冷冻实际应用中存在的问题。结合发现的问题和最新的研究进展,从玻璃化冷冻剂的改良、玻璃化冷冻流程的优化、玻璃化冷冻与多组学研究等3个方面对猪胚胎冷冻技术的研究进行展望,以期为猪胚胎冷冻技术的创新提供理论依据。     

切割取样后胚胎的冷冻保存技术的研究

研究了切割取样后小鼠胚胎和牛胚胎冷冻-解冻的技术方法。结果表明：（1）分别以10％甘油、10％乙二醇作为冷冻液以及在以上两种冷冻液中分别添加10％葡聚糖＋0．1mol／L蔗糖作为冷冻液常规方法冷冻切割后的小鼠胚胎，冷冻-解冻后体外培养72h总发育率分别为56．9％（259／455）、81．8％（604／738）、84．8％（540／637）和59．5％（308／518）。（2）取样后胚胎体外短暂培养（0-4h）并不能提高切割取样后小鼠胚胎冷冻-解冻体外培养发育率。（3）切割取样小鼠胚胎在25％甘油＋0．25mol／L蔗糖＋20％的血清为冷冻液，在-100～-110℃左右熏蒸2min快速冷冻后体外培养发育率为73．3％（33／45），切割取样牛胚胎快速冷冻-解冻移植妊娠率为57．1％（4／7）。     

哺乳动物胚胎低温保存研究进展

胚胎冷冻是一项新的细胞冷冻保存技术,胚胎低温保存对于提高哺乳动物繁殖效率有很重要的意义,本文对家畜胚胎低温保存的特点,原理和方法进行了综述,并介绍了下班化冷冻保存的新方法。     

Survival Rate and Ultrastructure of Vitrified Bovine in vitro and in vivo Developed Embryos

The capacity of different vitrification media and methods was tested onto in vivo and in vitro produced bovine morula/blastocysts and their ultrastructure and survival studied post-thawing. Two vitrification solutions were finally selected, named 40 ES (40% ethylene glycol in PBS containing 0.5 M sucrose) and 35 EFS (composed of 35% (v/v) ethylene glycol in PBS containing 0.5 M/l sucrose and 30% (w/v) Ficoll 70). The straws were either precooled or not precooled in nitrogen vapour, plunged and stored in LN₂ for 10–25 days, and then thawed in a 20° C waterbath. The content of the straws was rediluted in 1M sucrose solution in PBS and later cocultured with BOEC for 48 h. The overall survival rates for in vitro and in vivo embryos were 36% (12 of 33) and 20% (3 of 15) after 24 h and 21% (7 of 33) and 33% (5 of 15 ) after 48 h. The survival rates for precooled embryos were significantly higher than for not precooled (48% vs 13% after 24 h and 44% vs 4% after 48 h) when tested across vitrification media. The in vitro-produced embryos presented an ultrastructure similar to the pre-freeze state, irrespective of the vitrification media used. The in vivo developed embryos showed a rather modified post-thaw ultrastructure, with clear signs of osmotic changes at both the trophoblastic and embryonic cells. The results indicated that in vitro and in vivo developed bovine embryos can survive vitrification using ethylene glycol as a cryoprotectant.     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻研究进展

近40年来,利用冷冻保存技术将哺乳动物胚胎长期保存起来,建立"胚胎库"是保护物种资源和拯救濒危动物的有效手段,同时也是加快家畜品种改良、建立动物基因库和实施胚胎移植产业化的重要组成部分,也可以为克隆、转基因等现代生物技术提供丰富的试验材料,使胚胎的供给不受时间和空间的限制。胚胎冷冻保存技术在人类辅助生殖方面也具有广阔的应用前景。本文主要介绍了玻璃化冷冻过程中胚胎冷冻主体承载工具特点和应用,并展望未来哺乳动物胚胎冷冻发展的方向。     

哺乳动物胚胎冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植，动物克隆以及动物资源保护。此技术的应用需保证胚胎在冷冻一解冻后具有较高的成活率。自1972年小鼠胚胎冷冻获得成功以来，许多学者在简化冷冻程序，缩短冷冻时间等方面进行了深入研究，试图寻找一种可用于生产的冷冻方法。本文全面地比较了不同的冷冻方法及其结果，籍此为该领域工作者提供一定帮助。     

哺乳动物胚胎冷冻技术的研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植、动物克隆以及动物资源保护。此技术的应用需保证胚胎在冷冻—解冻后具有较高的成活率。自从1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序、缩短冷冻时间等方面进行了深入的研究。文章就胚胎冷冻的原理、保护剂、冷冻方法以及解冻方法等方面进行了综述。